舒肝顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

朱　敏　劉　艷

昆明中藥廠有限公司，云南　昆明　650228

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舒肝顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

朱敏劉艷*

昆明中藥廠有限公司，云南昆明650228

目的：建立控制舒肝顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：對(duì)舒肝顆粒中白術(shù)、甘草、梔子、芍藥進(jìn)行薄層色譜鑒別；采用高效液相色譜法測(cè)定梔子苷的含量。結(jié)果：薄層色譜檢出白術(shù)、甘草、梔子苷、芍藥苷；梔子苷在0.2505～2.672μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9998，平均回收率為97.98%，RSD為2.26%(n=9)。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，能有效控制舒肝顆粒的質(zhì)量。

舒肝顆粒；梔子苷；HPLC

舒肝顆粒是由當(dāng)歸、白芍、柴胡、香附等10味中藥組成，具有疏肝理氣，散郁調(diào)經(jīng)的功效。臨床用于肝氣不舒的兩脅疼痛，胸腹脹悶，月經(jīng)不調(diào)，頭痛目眩，心煩意亂，口苦咽干，以及肝郁氣滯所致的面部黧黑斑(黃褐斑)等。該制劑載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十七冊(cè)中，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)為WS3-B-3343-98，處方合理，療效確切。原標(biāo)準(zhǔn)中有兩項(xiàng)TLC鑒別，無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)，為了有效控制其內(nèi)在質(zhì)量，現(xiàn)對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究和提高。本研究對(duì)制劑中白術(shù)、甘草建立了薄層色譜鑒別，結(jié)果可靠。用高效液相色譜法測(cè)定梔子苷的含量，方法簡(jiǎn)便，分離度好，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為控制該制劑質(zhì)量的方法[1]。

1　儀器與材料

1.1儀器B3200S-T超聲機(jī)(上海必能信超聲)；高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent 1100液相色譜儀系統(tǒng))。1.2材料硅膠G、GF254由青島海洋化工有限公司提供；白術(shù)(批號(hào)：120925-201310)、甘草(批號(hào)：120904-201117)、梔子苷(批號(hào)：110749-201316)、芍藥苷(批號(hào)：110736-201438)等對(duì)照藥材/對(duì)照品均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；舒肝顆粒(批號(hào)：150821，昆明中藥廠有限公司)；缺有關(guān)藥味的陰性對(duì)照樣品自制。乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。

2　鑒別

2.1白術(shù)的鑒別取本品30g或9g(低糖型)，加沸水10mL或3mL(低糖型)使溶解，放冷，加乙酸乙酯30mL，振搖混合，超聲處理20min，靜置，傾取上清液，殘?jiān)m(xù)加乙酸乙酯20mL，振搖混合，超聲處理10min，靜置，傾取上清液，合并上清液，以3%碳酸鈉溶液振搖提取2次(20、15mL)，合并堿水液，滴加濃鹽酸調(diào)至pH2～3，以乙酸乙酯振搖提取2次(30mL、20mL)，合并乙酸乙酯萃取液，以水20mL洗滌，分取乙酸乙酯液蒸至近干，殘?jiān)蛹状?.5mL使溶解，作為供試品溶液。另取白術(shù)對(duì)照藥材0.5g，加水30mL煎煮，保持微沸30min，煎液濾過(guò)，殘?jiān)偌铀?0mL煎煮，保持微沸20min，煎液濾過(guò)，合并2次濾液，濃縮至約1mL，放冷，加乙酸乙酯15mL，振搖混合，自“超聲處理20min”起，同供試品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液0.5mL。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn)[2]，吸取上述兩種溶液各10～20μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(7∶3)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃的烤箱中烘烤3～5min，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。見(jiàn)圖1。

2.2甘草、梔子的鑒別取本品20g或6g(低糖型)，加沸水7mL或2mL(低糖型)使溶解，放冷，加水飽和的正丁醇25mL，振搖混合，超聲處理20min，靜置，傾取上清液，殘留物再加水飽和的正丁醇15mL，振搖混合，超聲處理10min，靜置，傾取上清液，合并上清液，用正丁醇飽和的水洗滌2次(25mL、15mL)，分取正丁醇液蒸至近干，放冷，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取甘草對(duì)照藥材0.5g，加水煎煮2次(40mL、30mL)，每次保持微沸20min，煎液合并，離心，取上清液，濃縮至約3mL，加水飽和的正丁醇15mL，振搖混合，自“超聲處理20min”起，同供試品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液0.5mL。再取梔子苷對(duì)照品1mg，加甲醇1mL，制成1mg/mL的對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)，吸取上述三種溶液各5～10μL，分別點(diǎn)于同一以含1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰乙酸-水(15∶1∶1∶2)為展開(kāi)劑，上行展至12cm以上，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品與對(duì)照藥材色譜中，顯相同顏色的主斑點(diǎn)；與對(duì)照品色譜，顯相同顏色的斑點(diǎn)。見(jiàn)圖2。

2.3白芍、牡丹皮的鑒別取2.2項(xiàng)下供試品溶液作為供試品溶液。取芍藥苷對(duì)照品1mg，加甲醇1mL，制成1mg/mL的對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯(8∶4∶1)為展開(kāi)劑，在氨蒸汽飽和條件下展開(kāi)，上行展至12cm，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。見(jiàn)圖3。

3　含量測(cè)定

3.1色譜條件色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱，4.6×250mm，5μm)。柱溫：30℃；流速：1.0mL/min；流動(dòng)相：乙腈-水(10∶90)；檢測(cè)波長(zhǎng)238nm；進(jìn)樣量：10μL。理論板數(shù)按梔子苷計(jì)算不低于1500。

3.2對(duì)照品溶液的制備取梔子苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成50μg/mL的溶液，即得。3.3供試品溶液的制備取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，取2g或0.7g(低糖型)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

3.4陰性對(duì)照試驗(yàn)取缺梔子的陰性對(duì)照樣品，照“3.3項(xiàng)”下方法制成陰性對(duì)照樣品溶液，將梔子苷對(duì)照品溶液、供試品溶液和梔子陰性對(duì)照溶液，分別注入液相色譜儀中，進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示供試品與梔子苷在相應(yīng)位置有對(duì)應(yīng)的峰，陰性對(duì)照在相應(yīng)位置無(wú)對(duì)應(yīng)峰。結(jié)果見(jiàn)圖4。3.5線性關(guān)系考察精密稱取梔子苷對(duì)照品16.7mg，置25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，制成668g/mL的溶液。精密取上述對(duì)照品溶液分別稀釋成25.05、50.1、100.2、133.6、200.4、267.2μg/mL的對(duì)照品溶液，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積；以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，以梔子苷進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)作線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=1493.52597X+10.24901，結(jié)果表明，梔子苷在0.2505～2.672μg之間呈良好線性關(guān)系。

3.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取舒肝顆粒同一供試品溶液，在0、2、4、7、9h分別進(jìn)樣10μL，其峰面積值分別為706.675 90、729.119 20、683.207 15、716.021 06、703.533 08，RSD=2.39%，結(jié)果表明，在9h內(nèi)供試品溶液中的梔子苷穩(wěn)定。3.7精密度試驗(yàn)分別精密吸取對(duì)照品溶液(176μg /mL)各5μL，按測(cè)定方法重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積值。各次測(cè)得的峰面積值分別是1 543.170 90、1 503.700 20、1 536.676 27、1 535.266 11、1 533.991 33、1 500.863 77，平均值為1 525.611 43，RSD為1.20%。

3.8重復(fù)性試驗(yàn)取批號(hào)為150821的舒肝顆粒，按正文所列的含量測(cè)定方法，分別制備9份供試品溶液，分別測(cè)定梔子苷含量，梔子苷平均含量為0.5507mg/g，RSD為1.27%(n=9)，說(shuō)明本方法重復(fù)性良好。

3.9回收率試驗(yàn)采取全程加樣法。取已知含量的樣品(批號(hào)：150821，梔子苷含量：0.5507mg/g)9份，精密稱定，分成3組，分別精密加入高、中、低三組劑量的梔子苷對(duì)照品，按樣品測(cè)定方法測(cè)定梔子苷含量，平均回收率為97.98%，RSD=2.26%。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

3.10耐用性試驗(yàn)取同一批號(hào)的樣品，照樣品含量測(cè)定方法，分別變動(dòng)樣品測(cè)定的色譜條件，測(cè)定梔子苷含量。以考察測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度。分別于不同流動(dòng)相乙腈-水(9∶91)、(10∶90)、(11∶89)測(cè)定樣品中梔子苷含量，RSD為2.59%；分別于不同流速(0.9、1.0、1.1mL/min)測(cè)定樣品中梔子苷含量，RSD為0.05%；分別于不同柱溫(20、30、40℃)測(cè)定樣品中梔子苷含量，RSD為2.31%；分別于不同波長(zhǎng)(228、238、248nm)測(cè)定樣品中梔子苷含量，RSD為2.32%；分別于不同色譜柱測(cè)定樣品中梔子苷含量，RSD為2.33%。其結(jié)果表明耐用性良好。

3.11樣品測(cè)定結(jié)果20批舒肝顆粒的測(cè)定結(jié)果，樣品含量見(jiàn)表2。

表2　樣品含量測(cè)定結(jié)果

4　討論

4.1含量測(cè)定中，首先進(jìn)行檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇：精密稱取梔子苷對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每1mL含17.568μg/mL的溶液，在紫外可見(jiàn)分光光度儀上進(jìn)行梔子苷的紫外光譜掃描，得到梔子苷的紫外吸收光譜，可見(jiàn)梔子苷在238nm處有最大吸收，故選擇238nm作為梔子苷的檢測(cè)波長(zhǎng)。流動(dòng)相的選擇：曾以甲醇-水(20∶80)；乙腈-水(9∶91)(10∶90)；乙腈-0.1%磷酸(10∶90)分別做流動(dòng)相試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果表明：采用乙腈-水(10∶90)作為流動(dòng)相，梔子苷與其他組分的分離度能達(dá)到要求，空白試驗(yàn)也無(wú)干擾，故選用。4.2分別對(duì)供試品制備中的提取溶劑、提取方法和提取時(shí)間、提取溶劑用量進(jìn)行了考察。分別采用甲醇、乙醇、70%乙醇、50%乙醇進(jìn)行提取，實(shí)驗(yàn)表明甲醇和50%乙醇提取的梔子苷含量相近，但因50%乙醇提取濾過(guò)液困難，故選取甲醇作為提取溶劑。考察了超聲處理20min、30min、40min、60min，對(duì)梔子苷含量的影響，結(jié)果表明超聲處理30min已提取完全?？疾炝?5mL、25mL、40mL三種不同用量，結(jié)果表明提取溶劑加入25mL基本提取完全。故確定供試品的制備方法為：加甲醇25mL超聲提取30min。

[1]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.中藥新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的技術(shù)要求[R].

[2]國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S]. 北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015.

(編輯：熊金富)

2016-05-20

朱敏(1979-)，男，漢族，本科，工程師；研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量控制研究。E-mail：darkuyzhu@sina.com

劉艷(1969-)，女，漢族，本科高級(jí)工程師；研究方向?yàn)橹兴幑に嚰百|(zhì)量控制研究。E-mail：825177465@qq.com

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1007-8517(2016)15-0024-04