誘導(dǎo)大豆抗胞囊線蟲(chóng)病和根腐病的生防細(xì)菌研究

閆繼辰 王媛媛 朱曉峰 劉曉宇 陳立杰 段玉璽

摘要[目的]篩選誘導(dǎo)大豆抗胞囊線蟲(chóng)病和根腐病的生防細(xì)菌，挖掘高效的新型微生物代謝物種衣劑。[方法]從誘導(dǎo)抗性角度，以大豆胞囊線蟲(chóng)和大豆根腐病菌為靶標(biāo)，通過(guò)對(duì)2 400株細(xì)菌發(fā)酵液包衣大豆種子處理、大田和溫室盆栽試驗(yàn)，篩選誘導(dǎo)大豆抗胞囊線蟲(chóng)病和根腐病的生防細(xì)菌。[結(jié)果]獲得Sneb152、Sneb572、Sneb877、Sneb1076、Sneb1401和Sneb1499共6株對(duì)病原物具有誘抗活性的生防細(xì)菌，6株生防細(xì)菌均可誘導(dǎo)大豆抗胞囊線蟲(chóng)病，抑制率超過(guò)74.98%，且能顯著促進(jìn)大豆生長(zhǎng)，增產(chǎn)效果明顯；菌株Sneb572和Sneb1076對(duì)大豆根腐病也有一定防效。[結(jié)論]優(yōu)良誘抗生防菌株Sneb572和Sneb1076用于處理大豆種子前景廣闊。

關(guān)鍵詞 生防菌；大豆胞囊線蟲(chóng)病；根腐?。淮偕L(zhǎng)；誘導(dǎo)抗性

中圖分類號(hào) S435.651 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2016）09-134-06

Abstract[Objective]To screen the biocontrol bacterium inducing soybean cyst nematode and soybean root rot diseases，and to find highefficient new microbial metabolites seed coatings.[Method]From the aspect of induced resistance，soybean cyst nematode and soybean root rot pathogen were used as the targets.A total of 2 400 coating soybean seeds were processed in bacteria fermentation liquid.[Result]After field and greenhouse screening，6 strains of biocontrol bacteria （Sneb152，Sneb572，Sneb877，Sneb1076， Sneb1499 and Sneb1401） were obtained，which had resistance activity to the pathogen.The 6 strains of biocontrol bacteria could all induce soybean cyst nematode with the inhibition rate being more than 74.98%.They could significantly promote the growth of soybean and had obvious yield increasing effect.Besides，strains Sneb572 and Sneb1076 also had certain control effects on soybean root rot.[Conclusion]Sneb572 and Sneb1076 have broad application prospects in soybean seed treatment.

Key words Biocontrol bacteria； Soybean cyst nematode； Root rot disease； Growth promotion； Induced resistance

連作大豆通常減產(chǎn)幅度在15%～30%[1]，減產(chǎn)的原因是多種因素綜合作用導(dǎo)致的，以土壤中的病原物威脅最大[2]。大豆根部病害首要的是大豆胞囊線蟲(chóng)病，其次是幼苗根腐病菌等。大豆胞囊線蟲(chóng)（Heterodera glycines）病是由大豆胞囊線蟲(chóng)（SCN）侵染引起的，是危害世界大豆生產(chǎn)的重要病害之一，具有分布廣、傳播途徑多、休眠體存活時(shí)間長(zhǎng)、危害嚴(yán)重等特點(diǎn)，是一種極難防治的土傳病害，給大豆生產(chǎn)造成嚴(yán)重?fù)p失。目前，該病在許多大豆主產(chǎn)國(guó)如美國(guó)、巴西、阿根廷和中國(guó)等都有發(fā)生[3]。該病一般造成大豆減產(chǎn)10%～20%，嚴(yán)重時(shí)減產(chǎn)70%～90%甚至絕產(chǎn)[4]。由于大豆胞囊線蟲(chóng)病的危害，致使大豆根部受損，致根部次生菌侵染，加重根腐病的危害。大豆根腐病是嚴(yán)重影響大豆苗期生長(zhǎng)的一種土傳病害[5]，由于其傳播速度快、分布廣泛、危害性大、毀滅性強(qiáng)、防治困難，已被列為大豆生產(chǎn)中毀滅性病害之一[6-7]，嚴(yán)重影響了大豆的質(zhì)量和產(chǎn)量，其造成的產(chǎn)量損失一般在 10%～30%，嚴(yán)重時(shí)達(dá)50%～60%甚至絕產(chǎn)[8]。大豆根腐病是由多種土壤習(xí)居菌復(fù)合侵染引起的，主要為尖孢鐮孢菌（Fusarium oxysporum）、禾谷鐮孢菌（F.graminearum）、燕麥鐮孢菌（F.avenaoeum）、茄腐鐮孢菌（F.solani）、半裸鐮孢菌（F.semitectum）、終極腐霉菌（Pythium ultimum）和立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）[9]。發(fā)病普遍的是由疫霉菌、鐮刀菌引起的根腐病，少部分是由腐霉菌侵染及立枯絲核菌引起，重茬使大豆根腐病加重，致其防治更加困難[5，10]。近 20 年來(lái)，我國(guó)各省也分別對(duì)大豆根腐病進(jìn)行了報(bào)道[9-12]。

種衣劑是20世紀(jì)60年代發(fā)展起來(lái)的一類農(nóng)藥，多采用殺菌劑或高毒殺線劑，用其包衣種子不但可防治病蟲(chóng)害、增加產(chǎn)量，而且可增加植物抗逆性、節(jié)約成本[13]。種衣劑在大豆上已得到廣泛應(yīng)用[12，14-15]，對(duì)大豆根腐病和胞囊線蟲(chóng)有一定的防治效果，但部分種衣劑效果不理想。某些高毒的殺蟲(chóng)劑由于環(huán)境問(wèn)題被逐漸禁用，從而促使人們必須找到替代高毒農(nóng)藥的新產(chǎn)品。生物種衣劑是一種新的選擇，筆者選用真菌發(fā)酵液包衣處理大豆種子，挖掘高效的新型微生物代謝物種衣劑，探索了利用微生物代謝物和誘導(dǎo)抗性防控大豆根腐病的新途徑。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株。2 400株細(xì)菌由沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)北方線蟲(chóng)研究所提供。

1.1.2 根腐病原菌。尖孢鐮刀菌、茄腐鐮刀菌均由沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)北方線蟲(chóng)研究所提供。

1.1.3 供試品種，大豆品種：遼豆15，由遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院大豆研究所提供。

1.1.4 種衣劑。商品種衣劑商品名為BFA，為中財(cái)盛世（北京）生物科技發(fā)展有限公司內(nèi)蒙古莫旗分公司產(chǎn)品。其主要成分為生物體制劑“BFA”結(jié)合先進(jìn)菌種。標(biāo)準(zhǔn)代號(hào)：Q/CHS03-2001。

1.2 方法

1.2.1 誘導(dǎo)大豆抗根部病害的生防細(xì)菌初篩試驗(yàn)。

1.2.1.1 材料準(zhǔn)備。2 400株細(xì)菌在蛋白胨牛肉膏（NA）液體培養(yǎng)基中發(fā)酵5 d。篩選出的生防菌發(fā)酵液采用1∶70的種子量進(jìn)行種子包衣處理，以不包衣為空白對(duì)照（CK），干燥后裝袋并編號(hào)備用。

1.2.1.2 田間布置。

在遼寧省康平縣進(jìn)行試驗(yàn)，每個(gè)處理行長(zhǎng)為5.00 m，行距為0.65 m，處理間隔為1.00 m。以不包衣為空白對(duì)照（CK）。試驗(yàn)田為連作大豆田，土壤為大豆胞囊線蟲(chóng)病和大豆根腐病田間自然發(fā)病土。

1.2.1.3 田間調(diào)查。

在大豆播種后35 d（大豆苗期），每個(gè)處理隨機(jī)取5株苗。取樣時(shí)先去掉表土（0～5 cm），將植株連根挖出，保持根系完整，先計(jì)數(shù)根上胞囊數(shù)量，然后放入取樣袋中封存，寫(xiě)好標(biāo)簽帶回實(shí)驗(yàn)室。測(cè)定項(xiàng)目：胞囊抑制率、大豆根腐病病情指數(shù)、根腐病防效。根腐病病級(jí)分級(jí)按0～5的6級(jí)分類法進(jìn)行（表1）。

病情指數(shù)=（病情指數(shù)×該級(jí)指數(shù)）/（調(diào)查株數(shù)×最高病級(jí)）×100

根腐病防效=（對(duì)照病情指數(shù)-處理病情指數(shù)）/對(duì)照病情指數(shù)×100%

胞囊抑制率=（對(duì)照胞囊數(shù)-處理胞囊數(shù)）/對(duì)照胞囊數(shù)×100%

1.2.2 誘導(dǎo)大豆抗根部病害的生防細(xì)菌復(fù)篩試驗(yàn)。

1.2.2.1 材料準(zhǔn)備。

初步篩得的細(xì)菌在NA液體培養(yǎng)基中發(fā)酵5 d。篩選出的生防菌發(fā)酵液采用1∶70的種子量進(jìn)行種子包衣處理，BFA按照使用說(shuō)明包衣大豆作為對(duì)照，干燥后裝袋并編號(hào)備用。

1.2.2.2 田間布置。在遼寧省康平縣進(jìn)行5次重復(fù)試驗(yàn)，每個(gè)處理行長(zhǎng)為5.00 m，行距為0.65 m，處理間隔為1.00 m。以不包衣為空白對(duì)照（CK），以商品種衣劑BFA為平行對(duì)照。試驗(yàn)田為連作大豆田，土壤為大豆胞囊線蟲(chóng)病和大豆根腐病田間自然發(fā)病土。

1.2.2.3 田間調(diào)查取樣。

在大豆播種后35 d（大豆苗期），每個(gè)處理隨機(jī)取5株苗。取樣時(shí)先去掉表土（0～5 cm），將植株連根挖出，保持根系完整，先計(jì)數(shù)根上胞囊數(shù)量，然后放入取樣袋中封存，寫(xiě)好標(biāo)簽帶回實(shí)驗(yàn)室。測(cè)定項(xiàng)目：胞囊抑制率、大豆根腐病病情指數(shù)、根腐病防效、根長(zhǎng)、苗高、根部鮮重、地上部鮮重和出苗率。同時(shí)于大豆成熟期，各處理隨機(jī)選取5株大豆，測(cè)定其單株大豆株高、單株莢數(shù)、單株粒數(shù)和百粒重。

出苗率=出苗總數(shù)/播種種子總數(shù)×100%

1.2.3 生防細(xì)菌誘導(dǎo)大豆抗根部病害的室內(nèi)驗(yàn)證試驗(yàn)。

1.2.3.1 發(fā)酵液包衣對(duì)大豆種子萌發(fā)的影響試驗(yàn)。

將試驗(yàn)所需的培養(yǎng)皿進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，備用。每份取100粒大豆種子，使用直徑為90 cm的培養(yǎng)皿，在其底部墊上大小合適的滅菌圓形濾紙，用無(wú)菌水濕潤(rùn)后，均勻放入經(jīng)種衣劑包衣處理的種子，每皿放入20粒種子，每個(gè)處理5次重復(fù)。同時(shí)設(shè)空白對(duì)照。蓋上培養(yǎng)皿蓋，置于溫度為（28±1）℃、相對(duì)濕度為85%的恒濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。7 d后記錄發(fā)芽率并測(cè)量芽長(zhǎng)和根長(zhǎng)，計(jì)算種子活力指數(shù)[16]。

發(fā)芽率=第7天發(fā)芽的種子數(shù)/供試種子數(shù)×100%

種子活力指數(shù)（VI）=（芽長(zhǎng)+根長(zhǎng)）×發(fā)芽率

1.2.3.2 生防細(xì)菌促進(jìn)大豆生長(zhǎng)試驗(yàn)。

采用室內(nèi)盆栽處理，取無(wú)大豆胞囊線蟲(chóng)的土和細(xì)沙，165 ℃干熱滅菌2 h，通風(fēng)冷卻2 d后，將土、沙按體積比2∶1的比例混合均勻，裝入16 cm×16 cm黑色塑料缽中。用生防菌發(fā)酵液包衣大豆，待種子陰干后播種。每缽播種3粒包衣好的大豆種子，以無(wú)菌水為對(duì)照，5次重復(fù)。30 d后，將植株取出，保持根系完整。用流水將根部泥土洗凈，并用濾紙吸干，測(cè)量單株大豆的株高、主根長(zhǎng)、地上部分鮮重和地下部分鮮重。

1.2.3.3 生防細(xì)菌誘導(dǎo)大豆抗胞囊線蟲(chóng)試驗(yàn)。采用室內(nèi)盆栽處理，取無(wú)大豆胞囊線蟲(chóng)的土和細(xì)沙，165 ℃干熱滅菌2 h，通風(fēng)冷卻2 d后，將沙、土按體積比2∶1的比例混合均勻，裝入16 cm×16 cm黑色塑料缽中。用生防菌發(fā)酵液包衣大豆，待種子陰干后播種。每缽播種3粒包衣好的大豆種子，以無(wú)菌水為對(duì)照，5次重復(fù)。待豆苗長(zhǎng)至2片子葉時(shí)，每缽留苗1顆，接種2 000條大豆胞囊線蟲(chóng)2齡幼蟲(chóng)（J2）。30 d后，將植株取出，保持根系完整。用流水將根部泥土洗凈，用濾紙吸干并計(jì)根內(nèi)線蟲(chóng)數(shù)和線蟲(chóng)抑制率。同時(shí)將根系用流水清沖洗，濾紙吸干根表水分，稱量根鮮重。采用次氯酸鈉-酸性品紅染色法進(jìn)行根內(nèi)線蟲(chóng)的染色，在體式顯微鏡下觀察記錄根內(nèi)各蟲(chóng)態(tài)線蟲(chóng)數(shù)量。

線蟲(chóng)抑制率=（對(duì)照線蟲(chóng)數(shù)-處理線蟲(chóng)數(shù)）/對(duì)照線蟲(chóng)數(shù)×100%

1.2.3.4 生防細(xì)菌誘導(dǎo)大豆抗大豆根腐病試驗(yàn)。

用高粱米對(duì)鐮孢菌分離菌株進(jìn)行擴(kuò)繁。將100 g高粱米置于500 mL三角瓶中，用水浸泡過(guò)夜后棄水，高壓滅菌 1 h。選取PDA培養(yǎng)基上活化2～3 d的供試尖孢鐮刀菌和茄腐鐮菌菌絲尖端部分，用直徑為8 mm的打孔器采集菌片，接種至上述高粱米表面，28 ℃培養(yǎng)7～10 d。待鐮孢菌菌絲長(zhǎng)滿高粱米培養(yǎng)物后，將其粉碎成粉末狀備用。盆栽致病性測(cè)定試驗(yàn)在 28 ℃恒溫溫室內(nèi)進(jìn)行，先將盆栽土于121 ℃濕熱滅菌90 min，再按照2%質(zhì)量比混合鐮孢菌于高粱米粉末并置于已滅菌的0.5 L盆栽盆中，每盆播入5粒大豆。30 d時(shí)記錄根腐病發(fā)病級(jí)別，計(jì)算病情指數(shù)[17]。

1.2.3.5 系統(tǒng)性誘導(dǎo)抗性試驗(yàn)。

參照裂根法[18]驗(yàn)證生防菌誘導(dǎo)大豆產(chǎn)生對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)病和大豆根腐病的系統(tǒng)抗性。大豆在室內(nèi)生長(zhǎng)到2葉期，將大豆根系按照垂直方向從中間分成兩部分，并且分別標(biāo)注誘導(dǎo)部分和應(yīng)答部分，然后將兩部分根分開(kāi)放入新的營(yíng)養(yǎng)缽中。在誘導(dǎo)部分接種5 mL生防菌發(fā)酵液或滅活生防菌發(fā)酵液，應(yīng)答部分不接種?？瞻讓?duì)照中，誘導(dǎo)部分接種無(wú)菌水。為了防止生防菌在兩部分根中發(fā)生污染，每一個(gè)營(yíng)養(yǎng)缽底部都用單獨(dú)的托盤(pán)隔離放置。接種生防菌28 d后，在每株大豆的應(yīng)答部分接種2 000條J2和大豆根腐病原菌1×105個(gè)/mL的孢子懸浮液。3 d后，取出應(yīng)答部分根系，然后對(duì)根系進(jìn)行染色，計(jì)數(shù)根系內(nèi)侵染的J2數(shù)量和線蟲(chóng)抑制率；5 d后，取出應(yīng)答部分根系，測(cè)定病情指數(shù)和防治效果。

1.3 數(shù)據(jù)處理 應(yīng)用Excel和SPSS軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 誘導(dǎo)大豆抗根部病害的生防細(xì)菌初篩試驗(yàn)結(jié)果

通過(guò)初次大田試驗(yàn)，從2 400株細(xì)菌中篩選出6株細(xì)菌，分別為Sneb152、Sneb572、Sneb877、Sneb1076、Sneb1401和Sneb1499（圖1），該6株生防菌均能顯著提高大豆抗胞囊線蟲(chóng)?。ㄒ种坡食^(guò)74.98%）和大豆根腐?。ǚ佬С^(guò)22.22%）。

2.2 誘導(dǎo)大豆抗根部病害的生防細(xì)菌復(fù)篩試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 大田促進(jìn)生長(zhǎng)試驗(yàn)結(jié)果。

通過(guò)三地大田復(fù)篩試驗(yàn)，苗期的調(diào)查結(jié)果（表1）顯示，BFA促進(jìn)植株增高的效果不及對(duì)照，與對(duì)照相比，生防細(xì)菌Sneb1401促進(jìn)植株增高的效果最好，Sneb1076和Sneb572次之；BFA促進(jìn)植株增高的效果與對(duì)照相當(dāng)，與對(duì)照相比，生防細(xì)菌Sneb1401促進(jìn)植株根系增長(zhǎng)的效果最好，Sneb572、Sneb877和Sneb152次之；BFA促進(jìn)地上部分鮮重增加的效果與對(duì)照相當(dāng)，與對(duì)照相比，生防細(xì)菌Sneb877促進(jìn)植株增高的效果最好，Sneb1076和Sneb1499次之；BFA促進(jìn)根系鮮重增加的效果不及對(duì)照，與對(duì)照相比，生防細(xì)菌Sneb152促進(jìn)根系鮮重增加的效果最好，Sneb1499、Sneb572和Sneb1401次之；BFA促進(jìn)出苗的效果優(yōu)于對(duì)照，與BFA相比，生防細(xì)菌Sneb877促進(jìn)出苗的效果最好，Sneb1076、Sneb1499和Sneb572次之。綜上，與對(duì)照和BFA相比，生防細(xì)菌Sneb1401促進(jìn)植株增高、植株根系增長(zhǎng)、地上部分鮮重增加、根系鮮重增加和出苗效果最顯著，而Sneb877、Sneb1076、Sneb572、Sneb1499和Sneb152次之。

2.2.2 生防細(xì)菌誘導(dǎo)大豆抗胞囊線蟲(chóng)和根腐病的大田試驗(yàn)結(jié)果。

由表2可知，BFA在抑制胞囊作用方面的效果顯著優(yōu)于對(duì)照，與BFA相比，生防細(xì)菌Sneb572在抑制胞囊作用方面的效果最好，Sneb1076和Sneb877次之；BFA在抑制根腐病作用方面的效果不及對(duì)照，與BFA相比，生防細(xì)菌Sneb1401在抑制根腐病作用方面的效果最好，Sneb572、Sneb877和Sneb1076次之。綜上，與對(duì)照和BFA相比，生防菌普遍具有顯著促進(jìn)植株出苗作用，生防細(xì)菌Sneb572在抗胞囊線蟲(chóng)病和根腐病原菌的作用方面具有最顯著效果。生防細(xì)菌Sneb1076、Sneb877和Sneb1401在抗胞囊線蟲(chóng)病和根腐病原菌的作用方面同樣具有顯著效果。

2.2.3 生防細(xì)菌對(duì)大豆產(chǎn)量構(gòu)成的影響。

通過(guò)對(duì)大田成熟期大豆的調(diào)查，結(jié)果（表3）表明，BFA促進(jìn)植株增高的效果顯著優(yōu)于對(duì)照，與BFA相比，生防細(xì)菌Sneb152促進(jìn)植株增高的效果最好，Sneb1401和Sneb1499次之；BFA促進(jìn)單株豆莢數(shù)增長(zhǎng)的效果顯著優(yōu)于對(duì)照在遼寧省康平縣的試驗(yàn)田，與BFA相比，生防細(xì)菌Sneb1076促進(jìn)單株豆莢數(shù)增長(zhǎng)的效果最好，Sneb877和Sneb152次之；BFA促進(jìn)單株豆粒數(shù)增長(zhǎng)的效果顯著優(yōu)于對(duì)照在遼寧省康平縣的試驗(yàn)田，與BFA相比，生防細(xì)菌Sneb877促進(jìn)單株豆粒數(shù)增長(zhǎng)的效果最好，Sneb1076次之；BFA促進(jìn)百粒豆粒鮮重增加的效果與對(duì)照相當(dāng)，與BFA相比，生防細(xì)菌Sneb1401促進(jìn)單株豆粒數(shù)增長(zhǎng)的效果最好，Sneb1076、Sneb1499、Sneb152和Sneb572次之。綜上，與對(duì)照和BFA相比，在大豆成熟期生防細(xì)菌普遍促進(jìn)植株增長(zhǎng)效果顯著，而生防細(xì)菌僅有Sneb152、Sneb1401和Sneb1499具有促進(jìn)植株增長(zhǎng)的作用。生防細(xì)菌Sneb1076在促進(jìn)植株單株夾數(shù)和單株粒數(shù)增長(zhǎng)、百粒重鮮重增加方面效果最顯著，Sneb877、Sneb152、Sneb1401、Sneb1499和Sneb572次之。

2.3 生防細(xì)菌誘導(dǎo)大豆抗根部病害的室內(nèi)試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果

2.3.1 促進(jìn)大豆種子萌發(fā)的試驗(yàn)結(jié)果。通過(guò)室內(nèi)生防菌發(fā)酵液包衣大豆種子發(fā)芽試驗(yàn)，結(jié)果（圖2）表明，與對(duì)照相比，Sneb572、Sneb1076、Sneb1401和Sneb1499都具有顯著促進(jìn)大豆種子發(fā)芽率和種子活力指數(shù)的作用。綜上，與對(duì)照相比，生防細(xì)菌Sneb1401促進(jìn)大豆種子發(fā)芽率和種子活力效果最顯著，Sneb1499和Sneb572次之。

2.3.2 生防細(xì)菌促進(jìn)大豆生長(zhǎng)的試驗(yàn)結(jié)果。

通過(guò)室內(nèi)盆栽試驗(yàn)，結(jié)果（表4）表明，與對(duì)照相比，4株生防菌均具有顯著促進(jìn)株高和根長(zhǎng)增加的作用；在地上部分重方面和根重方面，與對(duì)照相比，Sneb1076和Sneb1499生防菌株都能顯著促進(jìn)植株鮮重增加。綜上，與對(duì)照相比，生防細(xì)菌Sneb1499在促進(jìn)植株增高、根系增長(zhǎng)、地上部分鮮重增加和根系鮮重增加方面效果最顯著，Sneb1401、Sneb1076和Sneb572次之。

2.3.3 生防細(xì)菌誘導(dǎo)大豆抗胞囊線蟲(chóng)的試驗(yàn)結(jié)果。通過(guò)室內(nèi)抗胞囊線蟲(chóng)病試驗(yàn)，結(jié)果（圖3）表明，與對(duì)照相比，在抗胞囊線蟲(chóng)病方面4株生防細(xì)菌可顯著促進(jìn)大豆抗大豆胞囊線蟲(chóng)。Sneb1499促進(jìn)大豆防效最高達(dá)43.71%。綜上，與對(duì)照和菌劑相比，生防細(xì)菌Sneb1499抑制胞囊線蟲(chóng)作用效果最顯著，Sneb1401和Sneb1076次之。

2.3.4 生防細(xì)菌誘導(dǎo)大豆抗大豆根腐病的試驗(yàn)結(jié)果。

通過(guò)室內(nèi)抗根腐病試驗(yàn)，結(jié)果（圖4）表明，與對(duì)照相比，在抗根腐病原菌尖孢鐮刀菌和茄腐鐮刀菌方面，4株生防菌都顯著促進(jìn)大豆抗病，其中

Sneb572和Sneb1076對(duì)茄腐鐮刀菌和尖孢鐮刀菌的防效高達(dá)70.00%。綜上，與對(duì)照相比，生防菌皆對(duì)茄腐鐮刀菌和尖孢鐮刀菌有顯著抗性。

2.3.5 系統(tǒng)性誘導(dǎo)抗性試驗(yàn)結(jié)果。

通過(guò)室內(nèi)系統(tǒng)性誘導(dǎo)抗性試驗(yàn)，結(jié)果（表5）表明，應(yīng)答根系與空白根系相比，生防細(xì)菌對(duì)線蟲(chóng)抑制率超過(guò)50.90%，其中Sneb572對(duì)線蟲(chóng)的抑制率高達(dá)84.88%；生防細(xì)菌對(duì)茄腐鐮刀菌的防效超過(guò)58.34%。綜上，與對(duì)照相比，生防細(xì)菌Sneb572誘導(dǎo)大豆抗胞囊線蟲(chóng)以及對(duì)茄腐鐮刀菌和尖孢鐮刀菌的防治效果最顯著，Sneb1076、Sneb1401和Sneb1499次之。

3 結(jié)論與討論

該研究從2 400株細(xì)菌中篩選出6株生防細(xì)菌Sneb152、Sneb572、Sneb877、Sneb1076、Sneb1401和Sneb1499，采用這6株菌處理大豆種子，均能顯著提高大豆抗胞囊線蟲(chóng)病和大豆根腐病的抗性；經(jīng)過(guò)第2年復(fù)篩試驗(yàn)，結(jié)果表明，與對(duì)照和BFA種衣劑相比，Sneb152、Sneb572、Sneb877、Sneb1076、Sneb1401和Sneb1499不僅能顯著提高大豆抗胞囊線蟲(chóng)病和大豆根腐病的抗性，還具有促進(jìn)根系增長(zhǎng)、提高生物學(xué)產(chǎn)量的作用，并且在不同地區(qū)重復(fù)中均保持穩(wěn)定效果；室內(nèi)功能驗(yàn)證結(jié)果表明，Sneb572、Sneb1076、Sneb1401和Sneb1499均具有顯著誘導(dǎo)大豆抗茄腐鐮刀菌、尖孢鐮刀菌和大豆胞囊線蟲(chóng)效果，可促進(jìn)大豆發(fā)芽和增長(zhǎng)，并且通過(guò)裂根試驗(yàn)證明篩選出的生防菌對(duì)大豆胞囊線蟲(chóng)和大豆根腐病具有系統(tǒng)性誘導(dǎo)抗性。綜合上述結(jié)果，獲得的Sneb572和Sneb1076生防菌株發(fā)酵液具有顯著地系統(tǒng)誘導(dǎo)大豆抗胞囊線蟲(chóng)病和大豆根腐病、顯著地促進(jìn)大豆生長(zhǎng)和增產(chǎn)等作用，這與黃姍姍等[19]的研究結(jié)果相似，該2株優(yōu)良誘抗生防菌株對(duì)大豆種子處理具有良好的應(yīng)用前景，對(duì)其鑒定、復(fù)配和發(fā)酵條件及機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

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