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    冰凌之花

    2016-10-12 07:51劉賀
    科學(xué)中國人 2016年8期
    關(guān)鍵詞:冰凌核酸傳染病

    劉賀

    2012年,一種叫做MERS的新型冠狀病毒肆虐中東,死亡率高達(dá)30%;2015年5月4日,它跟隨一名68歲的男子從巴林返回韓國,導(dǎo)致7人確診,64人隔離。短短兩年時間,MERS已經(jīng)從發(fā)源地中東傳播到歐洲、北非、東南亞、美國、韓國等地。李冰凌博士近期的研究也圍繞于此,她在診斷中東呼吸綜合癥和埃博拉病毒領(lǐng)域取得的初步進(jìn)展非常振奮人心,此研究極具實用性,是生物學(xué)傳感器近年來不可多得的有望應(yīng)用于實際的研究成果。

    第一批吃螃蟹的人

    從中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所畢業(yè)后,李冰凌申請到美國德克薩斯州大學(xué)奧斯汀分校師從核酸適配體的發(fā)明者之一——分子生物學(xué)家Andrew D. Ellington教授從事博士后研究。在這期間,李冰凌系統(tǒng)學(xué)習(xí)并掌握了核酸適配體的篩選方法和潛在應(yīng)用,并對核酸反應(yīng)動力學(xué)和熱力學(xué)有了深入研究。

    第一個吃螃蟹的人不僅需要勇氣,更需要有足夠的實力。早在博士期間,李冰凌就對核酸適配體的諸多優(yōu)點(diǎn)充滿興趣,作為國內(nèi)首批從事核酸適配體傳感器研發(fā)的博士研究生之一,她將研究重心主要放在“如何得到方便、快捷的信號輸出”上。通過設(shè)計出一系列免標(biāo)記的電化學(xué)異相信號傳導(dǎo)過程,以及免基底、免分離的全均相信號傳導(dǎo)過程,李冰凌收獲了近30篇SCI論文,對適配體和共軛聚合物相互作用的熒光分子開關(guān)、銀離子和核酸片段的金納米和酶比色輸出以及雙鏈-復(fù)合物法電化學(xué)阻抗小分子免標(biāo)記傳感過程等做了大量研究分析。這些研究有極強(qiáng)的普適性與Point-of-care (POC,即時現(xiàn)場診斷)兼容性,且大部分已經(jīng)被有效融入到她現(xiàn)在回國后所從事的核酸分子工程技術(shù)創(chuàng)新設(shè)計中。

    成功,是從不停止前進(jìn)的腳步。利用核酸分子工程技術(shù)創(chuàng)新性改良出“零背景”“CHA催化組裝技術(shù)”,李冰凌證明其可作為“萬能無酶信號放大傳導(dǎo)元件”應(yīng)用到多項實際生物分析,尤其是傳染病快捷診斷中。經(jīng)反復(fù)試驗,李冰凌發(fā)現(xiàn)在CHA反應(yīng)中,一條線性脫氧核糖核酸會依次打開并組裝兩條發(fā)卡型DNA,且每完成依次組裝后線性DNA可自發(fā)脫離組裝體,并作為催化劑再一次參與到另一次組裝中,如此實現(xiàn)組裝的循環(huán)放大。此技術(shù)直接用線性DNA作為催化劑,能夠在幾個小時內(nèi)迅速完成100次循環(huán)放大,沒有催化劑參與到組裝信號中,可獲得優(yōu)于其他同類無酶放大器的千倍以上信噪比,達(dá)到最大幅度提高信噪比的目的。

    該CHA體系在生物分析應(yīng)用中潛力如何?帶著這個疑問,李冰凌首次對其展開了系統(tǒng)的發(fā)掘,證明CHA不僅可以靈敏地檢測線性DNA催化劑,還可以廣泛地接受核糖核酸和有機(jī)小分子等其他非線性DNA催化劑。此研究一經(jīng)發(fā)表引起了學(xué)術(shù)界的廣泛關(guān)注,對該研究在推動新型普適性放大檢測中的重要意義給予了充分肯定。

    緊接著,李冰凌利用CHA作為均相信號傳導(dǎo)器件,實現(xiàn)了對DNA納米組裝體。通過對雜交發(fā)夾鏈反應(yīng)(HCR)的免標(biāo)記檢測,李冰凌證明CHA可以靈敏地檢測DNA鏈或兩個堿基間的距離變化。針對這一特性,李冰凌對信號增加的單堿基突變識別技術(shù)又開展了深入研究,突破性地實現(xiàn)了唯有特定位置的單堿基突變才可以引發(fā)有效的信號,而無突變或其他位置的突變均不會帶來有效信號,大大增加了信號的可靠性。新加坡國立大學(xué)Zhiqiang Gao教授評價該研究為“有價值新進(jìn)展(Interesting advancements in HCR)的典型代表,認(rèn)為其開辟了HCR研究和應(yīng)用的新領(lǐng)域(“opened up new avenues in use of HCR”),更強(qiáng)調(diào)其中對單堿基突變的識別,在“基因分型(genotyping)和分子診斷中有巨大的應(yīng)用前景。

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    扎實的學(xué)術(shù)研究基礎(chǔ)為李冰凌后繼學(xué)術(shù)研究創(chuàng)設(shè)了良好的條件。在國際上最早介紹適配體傳感器的專著之一——《Aptamers in Bioanalysis》中,她所撰寫的章節(jié)被美國愛荷華州立大學(xué)Marit Nilsen-Hamilton教授評價為,“涵蓋了核酸適配體在生物傳感領(lǐng)域的多方面應(yīng)用,對讀者很有幫助,是一個很好的選擇?!比缃?,此書已被翻譯成中文《生物分析中的核酸適配體》出版,并被作為在核酸適配體分析領(lǐng)域的先驅(qū)性專業(yè)書籍在業(yè)界傳閱。

    當(dāng)前,以艾滋病、肺結(jié)核、禽流感等傳染病為例的檢測方法是采用聚合酶式反應(yīng)技術(shù),現(xiàn)有檢測技術(shù)程序繁瑣且設(shè)備昂貴,不適用于偏遠(yuǎn)地區(qū)醫(yī)院,尤其是在傳染病大規(guī)模爆發(fā)時期,檢測手段將成為制約傳染病防控效果的主要因素之一,傳染病快捷檢測手段亟待開發(fā)。

    將科研學(xué)術(shù)研究轉(zhuǎn)化為應(yīng)用于實際生活的創(chuàng)新性技術(shù)是每位科學(xué)家的初衷和信仰所在,李冰凌也是如此。面對中東呼吸綜合征(MERS-CoV病毒)、埃博拉(Ebola病毒)、寨卡(Zika病毒)等重大傳染病的肆虐,為了填補(bǔ)POC兼容超特異基因診斷的空白,李冰凌在全基因擴(kuò)增中特別用環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)(LAMP)取代傳統(tǒng)的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR);并利用一個發(fā)卡分子信標(biāo)作為橋梁,成功實現(xiàn)LAMP與CHA的終點(diǎn)和實時聯(lián)用檢測,實現(xiàn)了對DNA大分子的普適性超靈敏超特異性識別,對靶向如M13mp18、MERS-CoV和Ebola基因的識別下限均低至10-19M以下,相當(dāng)于1微升樣品中只有不到20個分子。

    在為創(chuàng)新成果感到喜悅的同時,李冰凌發(fā)現(xiàn)LAMP超強(qiáng)的放大功能和PCR(包括實時定量PCR)類似,會頻繁地帶來非特異性的反應(yīng);即使是沒有待測分子,傳統(tǒng)的堿基對識別檢測技術(shù)也常會顯示假的陽性信號,對分析結(jié)果的可靠性造成嚴(yán)重干擾。為打破頻發(fā)性假陽性對PCR和系列等溫擴(kuò)增技術(shù)臨床應(yīng)用的限制,李冰凌設(shè)計了加強(qiáng)識別LAMP產(chǎn)物中至少兩個序列的AND邏輯體系,讓信號更具有可靠性的同時,也將核酸邏輯應(yīng)用推向?qū)嶋H。在此項LAMP+CHA終點(diǎn)聯(lián)用技術(shù)中,CHA不僅對信號做了進(jìn)一步放大,其只識別LAMP產(chǎn)物中特定序列的特性更是對完全消除假陽性信號貢獻(xiàn)尤為突出。

    李冰凌的方法雖然在信噪比和抗干擾性上還有待加強(qiáng),但可以在保證超靈敏度的同時,對假陽性信號進(jìn)行完全排除,此研究的現(xiàn)實應(yīng)用前景值得期待。帶著沉甸甸的成就,李冰凌渴望回國,回到自己學(xué)術(shù)起飛的地方——中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)所研究所?!袄^續(xù)推進(jìn)研發(fā)以流行傳染病基因為靶向目標(biāo)的超精準(zhǔn)、高信噪比POC診斷平臺,并驗證其隨時向新型或傳統(tǒng)重大疾病過渡的普適性”帶著10年科研積累,李冰凌回國后的科研目標(biāo)堅定且清晰,其科研創(chuàng)新成果的普及更是令人期待。

    “如果說母親是引導(dǎo)我進(jìn)入此專業(yè)的啟蒙老師,那恩師董紹俊院士便是我科研路上的引導(dǎo)師”,李冰凌母親也從事化學(xué)工作,從小耳濡目染對化學(xué)這個專業(yè)便充滿了興趣。最原始的好奇心往往是引導(dǎo)人們專注的最原始力量,真正深入到這個專業(yè)領(lǐng)域后,李冰凌發(fā)現(xiàn)太多未知的東西有待探索,從最初學(xué)習(xí)試驗操作、儀器使用、數(shù)據(jù)分析,前進(jìn)的每一步都離不開導(dǎo)師的幫助和扶持。“導(dǎo)師已經(jīng)是80歲的高齡,每天都精神矍鑠一心撲在科研上,早出晚歸是常態(tài)。”對李冰凌來講,恩師不僅是自己學(xué)術(shù)上的榜樣,更是精神上的引導(dǎo)。

    冰凌花,開在極寒季節(jié),寓意堅韌、執(zhí)著、百折不饒,還帶有一絲詩意的美好。李冰凌,亦是人如其名,采訪匆匆劃上尾音,她溫和堅定的聲音卻猶在耳畔。科研是一件與困難、與自己抗?fàn)幍氖虑椋繕?biāo)堅定才能看得到遠(yuǎn)方,身為女性科學(xué)家,李冰凌坦言自己也會有很多壓力,在繁忙中抽出時間小憩片刻,三五好友結(jié)伴外出旅游,充滿電后再繼續(xù)出發(fā),這也是生活的魅力所在。

    談及未來,李冰凌回國后正加緊組建自己的團(tuán)隊,“我們將與醫(yī)院和地方防疫部門建立聯(lián)系,加快便攜型傳染病早期預(yù)警平臺的研發(fā)和推廣工作?!?/p>

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