兩種染色法在肺結(jié)核診斷中的對比性研究

陳國麗

?

兩種染色法在肺結(jié)核診斷中的對比性研究

陳國麗

目的：研究熒光染色法和抗酸染色法在診斷結(jié)核病中的靈敏度與陽性率。方法：收集100例疑似肺結(jié)核患者的痰液標(biāo)本，對抗酸染色法及熒光染色法檢測痰液中結(jié)核桿菌的陽性檢出率進(jìn)行比較。結(jié)果：熒光染色法檢測±～4+ 為35例，陽性率（35.0％）顯著高于抗酸染色法±～4+為20例，陽性率（20.0％）。結(jié)論：熒光染色法操作簡便快捷，低倍物鏡觀察，陽性檢測率高，有效減少漏檢誤檢，適合在肺結(jié)核病診斷中運用。

肺結(jié)核診斷 熒光染色法 抗酸染色法 痰涂片

對于結(jié)核疾病的診斷，主要通過結(jié)核桿菌的檢查和病理分析來進(jìn)行的。對肺結(jié)核的早診斷、早治療，對于疾病的治療與預(yù)后，減少耐多藥結(jié)核產(chǎn)生有著重要意義［1］。為了進(jìn)一步研究結(jié)核病患者診斷中不同檢測方式的靈敏度與陽性率，提高結(jié)核診斷準(zhǔn)確率，對來我中心進(jìn)行結(jié)核病診斷的100例疑似患者痰標(biāo)本研究分析如下：

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2010年1月-2011年12月來我院進(jìn)行結(jié)核病診斷的100例患者痰液標(biāo)本，其中，男64例，女36例，平均年齡為57.8歲。6例原發(fā)性結(jié)核，78例繼發(fā)性結(jié)核，16例結(jié)核性胸膜炎。對上述100例患者痰標(biāo)本均進(jìn)行抗酸染色法及熒光染色法染色鏡檢查痰液中的結(jié)核桿菌陽性率，并進(jìn)行比較。

1.2 材料與方法 收集結(jié)核病患者的痰液標(biāo)本100份放置在無菌密閉的痰盒中，嚴(yán)格按照《結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)規(guī)程》操作挑取痰標(biāo)本中干酪樣、膿樣痰標(biāo)本，在玻片右側(cè)2/3處均勻涂抹成10cm×20cm大小的卵圓形痰膜，同一份標(biāo)本制備2張?zhí)挡Ｆ科匀桓稍锖?，分別放置在染色架上，火焰固定，將固定好的痰片按下列步驟進(jìn)行熒光染色和抗酸染色。

1.2.1 熒光染色法 ①在痰膜上滴加0.1％的金胺0染液，30分鐘，流水沖洗。②滴加3％鹽酸乙醇，脫色3分鐘或至無色，流水沖洗。③滴加0.5％高錳酸鉀復(fù)染液，染色1分鐘，流水沖洗。④將染色后的玻片置于玻片架上，自然干燥，在熒光染顯微鏡（Primo Star EX30）下進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢測。

1.2.2 抗酸染色法 ①在痰膜上滴加0.8％的石碳酸復(fù)紅染液，加熱至出現(xiàn)蒸汽，保持5min，流水沖洗。②滴加5％的鹽酸乙醇，脫色1min，流水沖洗。③滴加0.06％的亞甲藍(lán)復(fù)染液，染色30s，流水沖洗。④將染色后的玻片置于玻片架上，自然干燥后，進(jìn)行抗酸染色普通光學(xué)顯微鏡（Nikon ECLIPSE E200）下進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢測。結(jié)合顯微鏡檢測進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.2.3 試劑 熒光染色法和抗酸染色法試劑均由貴陽市疾控中心提供。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS15.0數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行綜合處理，計數(shù)資料行χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

熒光染色法檢測陽性±～4+為35例，陽性率（35.0％），抗酸染色法±～4+為20例，陽性率（20.0％），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。提示熒光染色法檢出率靈敏度明顯高于抗酸染色法。見表1。

表1　兩種方法檢測結(jié)果分析 （例）

3 討 論

結(jié)核是一種由結(jié)核分枝桿菌入侵機體內(nèi)部導(dǎo)致感染的常見疾病，是經(jīng)常發(fā)生于青壯年的緩發(fā)慢性傳染病，經(jīng)由呼吸系統(tǒng)進(jìn)行疾病傳播，疾病潛伏期為4～8周［2］。約80％以上的結(jié)核病變發(fā)生在肺部，少部分病變發(fā)生在骨骼、皮膚、淋巴等部位。隨著人們生活水平的不斷提升，人群的大面積流動，給結(jié)核病的防控和規(guī)范性治療增加了難度。早期結(jié)核癥狀不顯著，且表現(xiàn)多樣化，很容易造成誤診。近幾年，隨著艾滋病的不斷傳播以及環(huán)境污染加劇，結(jié)核病的發(fā)病趨勢呈現(xiàn)逐年上升趨勢。實驗室進(jìn)行結(jié)核病診斷，主要通過細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)以及痰涂片檢測，細(xì)菌培養(yǎng)所需要時間比較長，約2～8周，尤其是針對無痰的結(jié)核患者更難以確診。X線健康檢查，對于初次感染未出現(xiàn)結(jié)核病灶患者，沒有實際指導(dǎo)意義。因此，及時、準(zhǔn)確的診斷出結(jié)核病，對于患者治療預(yù)后有很好的療效，并且對控制耐多藥結(jié)核的產(chǎn)生起到阻止作用。痰涂片實驗常用于結(jié)核分枝桿菌的初篩檢測，該檢測方式價格便宜、操作簡便［3］。

在本研究中，對100例同一份痰液標(biāo)本同時制備2張玻片進(jìn)行抗酸染色及熒光染色，結(jié)果熒光染色法檢測±～4+為35例，陽性率（35.0％）顯著高于抗酸染色法檢測±～4+為20例，陽性率（20.0％），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。在結(jié)果比較中發(fā)現(xiàn)，熒光染色法用低倍物鏡（40X）觀察靈敏度更高，縮短觀察同樣多視野所用的時間，不易漏檢，減輕檢測技術(shù)人員工作強度?？顾崛旧ㄓ闷胀ü鈱W(xué)顯微鏡（100X）油鏡觀察具有一定的局限性，染色過程需要很好地掌握加熱時間和溫度。標(biāo)本中含菌量的多少會直接影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。熒光染色方法在熒光顯微鏡下觀察，背景為黑色，分枝桿菌菌體呈現(xiàn)亮黃色，這就在結(jié)核桿菌辨識上更加準(zhǔn)確、清晰，不容易發(fā)生誤檢或漏檢的情況［4］?？顾崛旧ㄔ陲@微鏡環(huán)境下背景是藍(lán)色的，分枝桿菌菌體為紅色，相對來說辨析度不高，缺乏的一定的清晰性。在具體的檢測過程中，熒光染色方法不需要進(jìn)行加熱，而且，在顯微鏡環(huán)境下有100個左右視野，能夠較全面的檢查。與此同時，該操作方式比較簡便，很容易控制整個實驗過程，提高工作效率?？顾崛旧ㄔ谶M(jìn)行檢測的過程中，需要進(jìn)行加熱，如果加熱時間掌握不合理，有可能導(dǎo)致染液干涸，菌膜起層易被水沖掉，導(dǎo)致菌體不著色或著色不均，影響鏡檢結(jié)果判斷，在耗費了大量人力、時間的基礎(chǔ)上，工作效率無法保障，檢測的及時性與準(zhǔn)確性也無法保障。本文研究中的陽性比例以及分布情況來看，如果痰液標(biāo)本中的分支桿菌數(shù)量比較少，那么，抗酸染色法檢測的準(zhǔn)確率不高，需要進(jìn)行重復(fù)性檢查。熒光檢測法就能夠有效避免這一問題，操作相對簡單染色過程穩(wěn)定。

綜上所述，結(jié)核病患者臨床診斷中，熒光染色法應(yīng)用效果顯著，操作方便、快捷，陽性檢測率高，有效減少漏檢、誤檢率，具有推廣使用價值，尤其是基層實驗室。

［1］趙平，張淑芳，高文慧，等.北京市朝陽區(qū)肺結(jié)核病患者細(xì)菌學(xué)檢驗結(jié)果分析［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2008，18（9）∶1821～1822.

［2］中國防癆協(xié)會基礎(chǔ)專業(yè)委員會.結(jié)核病診斷實驗室檢驗規(guī)程［M］.北京∶中國教育文化出版社，2006∶13～29.

［3］Horne DJ，Johnson CO，Oren E，et al. NaritaM. How soon should patients with smear-positivetuberculosis be released from inpa-tient isolation Infect Control［J］. Hosp Epidemiol，2010，31（1）∶78～84.

［4］周步全，朱建峰，王迎春，等.結(jié)核分枝桿菌標(biāo)本的不同處理方法對 PCR 擴增敏感性的影響［J］.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗雜志，2010，20（6）∶60～63.

Two kinds of staining in the diagnosis of tuberculosis comparative study

Guiyang huaxi district center for disease control and prevention，Guiyang 550025，Guizhou
CHEN Guo-li

Objective：To study the fluorescent dyes and acid dyes in the diagnosis of sensitivity and the positive rate of tuberculosis （TB）.Methods：collected 100 cases of patients with suspected tuberculosis sputum specimens，against acid staining method and fluorescent staining detection of mycobacterium tuberculosis in sputum positive detection rate.Results：the fluorescent staining detection ±～ 4 + for 35 cases， positive rate （35.0％） is significantly higher than acid staining method ± ～ 4 + 20 cases， positive rate （20.0％）.Conclusion：the fluorescent staining method is simple and quick，low-power objective observation， positive detection rate is high， effectively reduce the residual error checking， suitable for use in tuberculosis diagnosis.

Tuberculosis diagnosis；Fluorescent staining；Anti-acid staining；Sputum smear /（編審：陳 強）

R521

A

1671-8054（2016）03-0165-02

貴陽市花溪區(qū)疾病預(yù)防控制中心 貴州 550025
2016-02-01收稿，2016-04-01修回