蒲公英水提物對小鼠高脂性脂肪肝的治療作用

劉馨宇，王　瑩，王沙沙，郭　澤，張　沖，王　平，張雪梅

(延邊大學農(nóng)學院動物醫(yī)學系，吉林延吉 133002)

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蒲公英水提物對小鼠高脂性脂肪肝的治療作用

劉馨宇，王瑩，王沙沙，郭澤，張沖，王平，張雪梅*

(延邊大學農(nóng)學院動物醫(yī)學系，吉林延吉 133002)

通過給小鼠灌胃高脂飲食，觀察蒲公英水提物對小鼠高脂性脂肪肝的治療作用。設立空白組，模型組，陽性組及蒲公英水提物高、中、低劑量組(10、5、2.5 g/kg)，給小鼠腹腔注射地塞米松的同時，灌胃高脂飲食建立小鼠急性脂肪肝模型，觀察小鼠肝臟指數(shù)，肝臟病理組織學變化，測定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)，肝組織中甘油三酯(TG)和總膽固醇(TC)含量。結(jié)果與模型組相比，蒲公英水提物高、中劑量組可以顯著或極顯著降低脂肪肝小鼠的肝臟指數(shù)(P<0.05或P<0.01)，降低血清中ALT和AST活性(P<0.05或P<0.01)，降低肝組織中TG和TC含量(P<0.05或P<0.01)；病理組織學觀察蒲公英水提物高、中劑量組肝組織脂肪變性明顯減輕。結(jié)果表明，蒲公英水提物對高脂飲食引起的小鼠高脂性脂肪肝有一定的治療作用。

蒲公英水提物；小鼠；高脂性脂肪肝；治療作用

脂肪性肝病是常見的彌漫性肝病之一，主要是肝細胞攝取的脂肪增加而氧化減少所致的肝細胞內(nèi)蓄積脂肪過多的病理狀態(tài)，通?？煞譃榫凭灾拘愿尾?Alcoholic fatty liver disease,AFLD)和非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)。非酒精性脂肪肝是一種無過量飲酒史，而以肝實質(zhì)細胞脂肪貯積和脂肪變性為特征的臨床病理綜合征[1]。目前尚缺乏較為理想的方法和藥物，因此，尋找高效廉價的防治藥物越來越受到關(guān)注。

蒲公英(Dandelion)為菊科藥食兼用植物。臨床常用于治療上呼吸道感染、眼結(jié)膜炎、流行性腮腺炎、胃炎、痢疾、肝炎、膽囊炎、急性闌尾炎、泌尿系統(tǒng)感染、盆腔炎、癰癤疔瘡、淋巴結(jié)炎等[2]。研究表明，蒲公英具有抗風濕、消腫散結(jié)、保肝利膽的功效。本試驗旨在研究蒲公英水提物對高脂性脂肪肝的治療作用。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物昆明小鼠，雄性，體重20 g±5 g，延邊大學實驗動物中心提供。

1.1.2藥物及主要試劑蒲公英全草,安國市神禾飲片有限公司；辛伐他汀,山西鑫煜制藥有限公司，(批號20150409)；地塞米松磷酸鈉注射液,貴州天地藥業(yè)有限責任公司，(批號15032401A，規(guī)格1 mL∶5 mg)；自制豬油，花生油；膽固醇,上海源聚生物科技有限公司，(批號070603)；牛膽鹽,北京奧博星生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，(批號20090415)；ALT試劑盒、AST試劑盒、TG試劑盒、TC試劑盒,南京建成生物工程研究所。

1.1.3蒲公英水提物的制備取干燥蒲公英100 g，加入 5 L 蒸餾水浸泡過夜，加熱回流，過濾，重復2次，合并濾液，濃縮至1 g/mL，4 ℃ 冰箱保存[3]。

1.1.4高脂飲食的制備20%豬油，7%膽固醇，1%牛膽鹽以及豆油的制成糊狀乳液[4]。

1.2方法

1.2.1小鼠脂肪肝模型建立、分組及給藥參照文獻[5-6]，將小鼠36只，適應性飼養(yǎng)1周，隨機分為6組，每組6只，設空白組、模型組、陽性組，蒲公英水提物高、中、低劑量組。除正常組外，模型組、陽性組、蒲公英水提物高、中、低劑量組小鼠連續(xù) 7 d灌胃高脂乳劑20 mL/kg，同時前4 d按20 mL/kg腹腔注射地塞米松磷酸鈉注射液。7 d后，蒲公英水提物高、中、低劑量組分別灌胃10、5、2.5 g/kg蒲公英水提物，陽性組灌胃辛伐他汀10 mg/kg，空白組、模型組給予等體積的生理鹽水，連續(xù)7 d。

1.2.2各指標的測定

1.2.2.1血清中ALT和AST測定末次給藥結(jié)束，禁食12 h，稱重，眼球取血分離血清，按照試劑盒提供的方法測定血清中ALT和AST的含量。

1.2.2.2肝臟指數(shù)測定剝離肝臟，稱肝臟濕重，肝臟指數(shù)=肝臟濕重/小鼠體重×100%

1.2.2.3肝組織中TC和TG測定取部分肝組織，制備100 g/L 肝勻漿，離心取上清液，按照試劑盒提供的方法，測定肝勻漿上清液中TG和TC的含量。

1.2.2.4病理組織學觀察另取部分肝組織，浸于100 g/L 中性甲醛溶液固定，做常規(guī)石蠟切片，HE染色，于光鏡下觀察肝臟組織結(jié)構(gòu)。

2　結(jié)果

2.1蒲公英水提物對脂肪肝小鼠血清中AST和ALT的影響

如表1所示,與空白組相比，模型組小鼠血清AST和ALT含量極顯著升高(P<0.01)。與模型組相比，蒲公英水提物各劑量組均能明顯降低其含量，高劑量組具有極顯著差異(P<0.01)，中劑量組具有顯著差異(P<0.05)，低劑量組無顯著性差異。與陽性組相比，低劑量組具有極顯著差異(P<0.01)，中劑量組具有極顯著差異(P<0.01)，高劑量組無顯著性差異。結(jié)果表明,蒲公英水提物能降低脂肪肝小鼠血清中AST和ALT的含量，且呈一定量效關(guān)系。

表1　蒲公英水提取對脂肪肝小鼠血清中AST和ALT的影響

注：同列中標有相同大寫字母的均數(shù)間差異極顯著(P<0.01)；同列中標有相同小寫字母的均數(shù)間差異顯著(P<0.05)。

Note：Values with same capital letters in a column mean extremely significant difference (P<0.01),and with same small letters mean significant different (P<0.05).

2.2蒲公英水提物對脂肪肝小鼠肝臟指數(shù)的影響

由表2可知,與空白組相比，模型組小鼠肝臟指數(shù)具有極顯著差異(P<0.01)。與模型組相比，蒲公英水提物各劑量組均能明顯降低肝臟指數(shù)，高劑量組具有極顯著差異(P<0.01)，中劑量組具有顯著差異(P<0.05)，低劑量組無顯著性差異。與陽性組相比，低劑量組具有極顯著差異(P<0.01)，中劑量組具有顯著差異(P<0.05)，高劑量組無顯著性差異。結(jié)果表明,蒲公英水提物能降低脂肪肝小鼠肝臟指數(shù)，且呈一定量效關(guān)系。

表2　蒲公英水提物對脂肪肝小鼠肝臟指數(shù)的影響

注：同列中標有相同大寫字母的均數(shù)間差異極顯著(P<0.01)；同列中標有相同小寫字母的均數(shù)間差異顯著(P<0.05)。

Note：Values with same capital letters in a column mean extremely significant difference (P<0.01), and with same small letters mean significant different (P<0.05).

2.3蒲公英水提物對脂肪肝小鼠肝組織中TC和TG的影響

如表3所示,與空白組相比，模型組小鼠肝組織中TC和TG含量極顯著升高(P<0.01)。與模型組相比，蒲公英水提物各劑量組均能明顯降低其含量，高劑量組具有極顯著差異(P<0.01)，中劑量組具有極顯著差異(P<0.01)，低劑量組具有顯著差異(P<0.05)。與陽性組相比，小鼠肝組織中TC含量，低劑量組具有極顯著差異(P<0.01)，中劑量組具有極顯著差異(P<0.01)，高劑量組具有顯著差異(P<0.05)；小鼠肝組織中TG含量，低劑量組具有極顯著差異(P<0.01)，中劑量組具有極顯著差異(P<0.01)，高劑量組具有極顯著差異(P<0.01)。結(jié)果表明,蒲公英水提物能降低脂肪肝小鼠肝臟中TC和TG的含量，且呈一定量效關(guān)系。

2.4病理組織學觀察

光鏡下觀察，空白組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)無明顯異常，肝小葉清楚，肝細胞以中央靜脈為中心成放射狀，未見脂肪空泡(圖1A)。模型組小鼠肝組織可見中央靜脈結(jié)構(gòu)不規(guī)則，其周圍有多量彌漫性脂肪空泡，出現(xiàn)脂肪變性(圖1B)。陽性組小鼠(圖1C)中央靜脈結(jié)構(gòu)無明顯異常。蒲公英水提物高(圖1D)、中(圖1E)、低(圖1F)劑量組與模型組相比，脂肪變性的程度有不同的改善，其中以高、中劑量組較明顯。通過病理組織學觀察可知，脂肪肝小鼠肝組織中脂肪空泡明顯減少，蒲公英水提物能減輕脂肪肝小鼠肝組織脂肪變性程度。

3　討論

肝臟是中性脂肪(甘油三酯)合成、轉(zhuǎn)運、利用的主要器官，而不是儲存脂肪的場所。高脂血癥是導致脂肪肝的重要因素之一，長期大量進食高脂類食物，小腸生成和吸收的游離脂肪酸和甘油增加，進入血液的脂肪乳糜微粒增多，肝臟攝取大量脂肪酸并合成脂肪，當脂肪合成的量超過肝臟的轉(zhuǎn)化能力時，會導致脂肪在肝臟蓄積，形成脂肪肝，繼而可發(fā)生肝組織纖維化，甚至肝硬化。

近年來，國內(nèi)外對蒲公英的藥理作用進行了大量研究[7-8]。研究表明，蒲公英有利尿、降脂、緩瀉之力，苦寒之品又能減少機體對脂類的吸收消化，蒲公英組成的復方可降低高脂血癥患者血中TC和TG的量[9]。

表3　蒲公英水提物對脂肪肝小鼠肝組織中TC和TG的影響

注：同列中標有相同大寫字母的均數(shù)間差異極顯著(P<0.01)；同列中標有相同小寫字母的均數(shù)間差異顯著(P<0.05)。

Note：Values with same capital letters in a column mean extremely significant difference(P<0.01),and with same small letters mean significant different(P<0.05).

A.空白組；B.模型組；C.陽性組；D.高劑量組；E.中劑量組；F.低劑量組

A.Control group;B.Model group;C.Positive group;D.High-dose group;E.Mid-dose group;F.Low-dose group

圖1小鼠肝組織病理學變化(100×)

Fig.1Pathological lesion of liver tissue in mice (100×)

脂肪肝早期無特異性自覺癥狀，生化檢測時ALT水平升高是無癥狀性脂肪肝的主要表現(xiàn)之一，AST活性增高提示肝細胞膜通透性改變或壞死，可以推測脂肪肝患者存在不同程度肝細胞損傷，而TC和TG在生化檢測中也存在一定的意義[10]。

本試驗結(jié)果表明，蒲公英水提物能降低脂肪肝小鼠肝臟指數(shù)，能降低小鼠血清中AST和ALT、肝組織中TC和TG的含量，提示蒲公英水提物對脂肪肝小鼠肝臟有一定的治療作用。此外，通過病理組織學觀察可知，脂肪肝小鼠肝組織中脂肪空泡明顯減少，表明蒲公英水提物能改善高脂性脂肪肝小鼠肝臟的脂肪變性程度，并在一定程度上改善脂肪肝的組織學變化。

綜上所述，蒲公英通過調(diào)節(jié)血脂、肝脂質(zhì)，對小鼠脂肪肝起到保護作用，為高脂性脂肪肝的治療提供了理論依據(jù)。

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Therapeutic Effect of Dandelion Extract on Hyperlipidemic Fatty Liver in Mice

(Department of Animal Medicine,Agricultural College of Yanbian University,Yanji,Jilin,133002,China)

LIU Xin-yu,WANG Ying,WANG Sha-sha,GUO Ze,ZHANG Chong,WANG Ping,ZHANG Xue-mei

The therapeutic effect of dandelion extract on hyperlipidemic fatty liver in mice was observed by giving high-fat diet.The mice were divided into control group,model group,positive group and dandelion extract high,middle and low dose groups (10, 5 and 2.5 g/kg). Acute fatty liver mouse model was produced by intraperitoneally injecting dexamethasone and feeding high fat diet.The liver index, the liver histological change,ALT and AST in serum,TG and TC in liver tissue were measured.Compared with model group,dandelion extract high and middle dose groups could significantly decrease liver index of mice (P<0.05 orP<0.01), decrease ALT and AST levels of serum (P<0.05 orP<0.01) and TG and TC content of the liver tissue(P<0.05 orP<0.01).The hepatic steatosis in dandelion extract high and middle dose groups was significantly reduced by pathological examination.The results showed that dandelion extract has certain therapeutic effect on fatty liver caused by high-fat diet in mice.

Dandelion extract;mice;hyperlipidemic fatty liver;therapeutic effect

2016-03-22

國家自然科學基金項目(31260622，31660727)；吉林省科技廳重點科技攻關(guān)項目(20160204016NY)

劉馨宇(1992-)，女，吉林白山人，碩士研究生，主要從事獸醫(yī)藥理學與毒理學研究。*通訊作者

S853.74

A

1007-5038(2016)09-0067-04