應(yīng)用快速膠體金法檢測兒童甲型流感病毒

趙秋芬　穆 攀　李 念　汪 東　吳曉睛

（北京首兒李橋兒童醫(yī)院檢驗科，北京 101334）

應(yīng)用快速膠體金法檢測兒童甲型流感病毒

趙秋芬穆 攀李 念汪 東吳曉睛

（北京首兒李橋兒童醫(yī)院檢驗科，北京 101334）

目的 甲型流感病毒在流感季節(jié)期間，不同年度、不同月份、不同年齡段患兒的抗原檢出結(jié)果變化。方法應(yīng)用快速膠體金法進行甲型流感病毒抗原檢測。結(jié)果2013年10月至2014年5月兒童甲型流感病毒抗原陽性率分別為：0～1歲占1.24%；2～3歲占5.43%；4～5 歲3.65%；6～10歲以上2.92%；其中2～3歲陽性率最高5.43%。2014年10月至2015年2月兒童甲型流感病毒抗原陽性率分別為：0～1歲占1.08%；2～3歲9.73%；4～5歲2.51%；6～10歲以上4.83%，其中2～3歲陽性率最高9.73%。結(jié)論不同年齡組陽性率有差異，患兒發(fā)病陽性率較高的年齡段均在2～3歲年齡組。

甲型流感病毒；抗原檢測；膠體金法

甲型流感病毒是一種季節(jié)性發(fā)病的流感病毒，近年有全球感染的趨勢，由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，有很強的傳染性［1-2］。主要通過咳嗽和打噴嚏傳播，一般春季和冬季爆發(fā)，易發(fā)人群為20～45歲的青壯年，兒童的發(fā)病率也不可忽視。我們將2013年10月至2014年5月及2014年10月至2015年2月來我院就診的感冒發(fā)熱患兒進行甲型流病毒抗原檢測，發(fā)現(xiàn)不同年度、不同月份、不同年齡段，感染發(fā)病的人數(shù)有所不同。2014年發(fā)病的高峰期在1～2月份，檢測人數(shù)兩月合計1684人次，陽性率25.9%；2014年12月又是一次大的流行高峰期，月檢測人數(shù)達4046例，陽性率37.94%。

1　材料與方法

1.1材料：①標本來源：2013年10月至2014年5月及2015年8月至2015 年2月兩個年度的門診患兒及住院患兒。②檢測對象：按患兒不同年齡段分以下幾組：0～1歲，2～3歲，4～5歲，6～10歲以上等不同年齡組，進行甲型流感病毒抗原檢測。③試劑來源：依據(jù)科技部推薦甲型H1N1流感抗原檢測試劑，用廣州萬孚生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，甲型流感病毒抗原檢測試劑盒。

1.2方法：①樣本采用：一次性無菌PP（聚丙烯）桿的聚酯海綿拭子。②采取咽拭子分泌物：將拭子從口腔完全插入咽喉中，以咽喉壁，上顎扁桃體的發(fā)紅部位為中心，適度擦拭雙側(cè)咽扁體及咽后壁，取出拭子。放入樣本管中，垂直加入400 μL樣本提取液，上下轉(zhuǎn)動數(shù)次，使標本盡可能溶解在溶液中，擠壓拭子后向測試卡中加入80 μL病毒采樣液，15～20 min內(nèi)觀察結(jié)果。③結(jié)果觀察：兩條紅色反應(yīng)線，即在檢測區(qū)及質(zhì)控區(qū)，各出一條紅色反應(yīng)線為陽性；僅在質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)一條紅色反應(yīng)線為陰性。

表2　不同年齡段檢測甲型流感病毒抗原陽性率的統(tǒng)計表

2　結(jié) 果

2.1甲性流感病毒發(fā)病流行期，一般為每年的秋冬季，高峰期為每年的1、2月。根據(jù)不同月份，流行期又有不同的變化，2014年爆發(fā)流感季節(jié)提前至12月。實際上2014年有兩個爆發(fā)高峰期，一次在1、2月，第二次在12月（表1）。

表1　不同月份檢測甲型流感病毒抗原陽性率的統(tǒng)計表

結(jié)論：2014年8月至2015年2月甲型流感的陽性率比2013年10月至2014年5月5.17%（P＜0.01）有統(tǒng)計學差義。其中2014年在1～2月是甲型流感的高發(fā)期，2014年12月又是這一輪甲型流感的發(fā)病高峰期，比上一流感發(fā)病期提前1個月左右。

2.2根據(jù)不同年齡段的感染的情況我們的檢出率也有所不同：見表2。結(jié)論：從以上兩個年度段的流行期來看2～3歲組甲性流感病毒抗原陽性率最高， 統(tǒng)計學顯示不同年齡段組之間陽性率間有差異，2014年8月至2015年2月各年齡組，甲型流感毒抗原陽性率均高于上一流行期。

3　討 論

3.1流感是一種季節(jié)性疾病，它在夏季的發(fā)病率較低，冬季的發(fā)病率較高。樣本統(tǒng)計，其結(jié)果：2014年1～2月達到高峰；抗原的檢出率分別為25.3%和26.5%；2014年冬季12月份又是甲型流感發(fā)病高峰期，本月檢測4046人次，陽性率37.9%。與一般成人的發(fā)病率接近，符合北方地區(qū)的發(fā)病率，文獻報道成人甲型流感病毒抗原陽性率在27.8%左右，《實用醫(yī)學》2008年3期毛曉健等人報道，兒童甲流的感染率是成人的1.5～3倍。從年齡段可看出2～3歲的抗原檢出率較高，其主要原因是2～3歲這一階段的孩子，免疫力尚未健全，是容易感染的主要原因；其次，與孩子活動范圍有關(guān)，活動區(qū)域在幼兒園，屬于集體生活，感染的機會較多，密切接觸是傳播流感主要途徑，特別是空氣飛沫傳播為主；第三，通過病毒污染的一些用具。每年爆發(fā)流感類型不一樣，總的來說，每幾年就會換一種流感病毒，比較常見的分為甲1和甲3，之前流行的H1N1屬于甲1型，但在2014年的冬季12月以H3N2為主。首兒研究所病毒研究室進行病毒監(jiān)測顯示，2014年冬季流行的流感是以發(fā)熱，肌肉酸痛等為主要癥狀，感染甲3的（H3N2）病毒較多。甲型流感病毒基因組成由8個片段組成，根據(jù)病毒表面的糖蛋白抗原分為：16個HA亞（H-H16）即不同的亞型病毒表面的血凝素不同，9個NA亞型（N1-N9）即神經(jīng)氨酸酶不同；不同的亞型病毒間基因可以交雜，形成龐大復雜的家族，其中H1N、H2N2、H3N3亞型主要感染人類，其他亞型自然宿主是禽類。

3.2癥狀、并發(fā)癥、衛(wèi)生習慣。癥狀：流行性感冒是由甲、乙、丙三種病毒引起。一般甲型流感病毒多為爆發(fā)流行；乙型也可呈爆型或小流行；丙型以散發(fā)為主。甲型流感病毒具有較高的傳染性，流感典型癥狀，突然發(fā)熱頭暈頭痛、肌痛、全身癥狀明顯，同時可伴有喉嚨痛和咳嗽、鼻塞、流涕胸痛眼痛等癥狀。兒童以高燒為主，發(fā)熱體溫可達39～40 ℃，一般持續(xù)2～3 d后漸退。并發(fā)癥：最常見的并發(fā)癥是肺炎。一般以繼發(fā)性細菌性肺炎較常見，以金黃色葡萄球菌為主，我們在這一流行季節(jié)，尚未發(fā)現(xiàn)與甲型流感病毒合并感染的并發(fā)癥。衛(wèi)生習慣：家長注意保持兒童的個人衛(wèi)生，養(yǎng)成良好的衛(wèi)生習慣、勤洗手、勤洗澡，不要共用毛巾、口杯等日常用品。保持室內(nèi)清新的空氣，不帶孩子去公共場所，到醫(yī)院看病，最好戴口罩，以防接觸傳播流感病毒［3］。

3.3方法學（免疫膠體金技術(shù)）：免疫膠體金技術(shù)是近年來發(fā)展起來的新方法：具有操作簡單、快速、準確和無污染等優(yōu)點，該技術(shù)提供了很好的技術(shù)平臺，是一種更便捷的檢測流感病毒抗原的好方法。有利于臨床醫(yī)師的提早診斷，早期治療，家長只等候30 min，即可拿到檢測報告，真正做到了速檢［4］。

甲型流感病毒抗原檢測試劑盒：對流感病毒不同亞型和不同株的甲型流感病毒均有良好的反應(yīng)性。在臨床應(yīng)用中有較好的靈敏性和準確性。適合基層醫(yī)院廣泛應(yīng)用。適合兒童?？漆t(yī)院速檢通道。其他熒光PCR技術(shù)，免疫酶標法，免疫熒光印跡法等都是技術(shù)性較強的檢測方法，具備一定的儀器和操作技術(shù)會得到更好的檢驗結(jié)果。

3.4流行性感染事件：①2009年3～4月，墨西哥和美國西部有千人感染H1N1，導致100例死亡。我國4～5月在陜西發(fā)現(xiàn)1例，四川1例，廣州1例。②2010年1月10日衛(wèi)生部通報，中國已有124764例H1N1流感確診病例，其中744例死亡，北京9007例感染。③2010年～2011年北京6個地區(qū)分組隨機調(diào)查18264例，5456例陽性血清學抗體（1∶40滴度）陽性率28.9%。④2015年3月1日大公報報道：香港流感疫情加重，死亡304例，大部分感染甲型H3N2型。兩次甲型流感季節(jié)陽性率比較：2013年8月至2014年5月，檢測總?cè)藬?shù)2629例，陽性564例，陰性2065例，陽性率21.5%；2014年8月至2015年2月，檢測總?cè)藬?shù)8295例，陽性2253例，陰性6042例，陽性率27.2%。結(jié)論：2014年8月至2015年2月這個階段的甲型流感病毒陽性檢出率有差異，高于2013年段。

［1］喬偉振，謝平，李琴.應(yīng)用膠體金免疫層析法檢測人群甲型流感病毒抗原陽性率［J］.中華醫(yī)院感染學雜志，2010，20（24）：4044-4046.

［2］邱海燕，盧文波.兩種甲型流感病毒抗原檢測方法的比較［J］.中華醫(yī)院感染雜志，2010，20（18）：2890-2891.

［3］李月越，陳杭微，王萍.膠體金法與間接免疫熒光法快速檢測流感病毒抗原的比較［C］.中華醫(yī)學會呼吸病年會論文，2011.

［4］張德璽，韓洪彥.一種快速檢測甲型流感病毒的方法［J］.中華比較醫(yī)學雜志，2007，17（1）：42-45.

R373.1

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1671-8194（2016）24-0122-02