高效液相色譜-DAD法檢測(cè)飼料中三類（8種）農(nóng)藥殘留

高　林，高文惠*（1.河北科技大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，河北石家莊 050000；2.河北省發(fā)酵工程技術(shù)研究中心，河北石家莊 050000）

高效液相色譜-DAD法檢測(cè)飼料中三類（8種）農(nóng)藥殘留

高林1，2，高文惠1，2*
（1.河北科技大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，河北石家莊 050000；2.河北省發(fā)酵工程技術(shù)研究中心，河北石家莊 050000）

本實(shí)驗(yàn)建立了同時(shí)分離檢測(cè)飼料中三嗪類除草劑（莠滅凈、莠去津）、三唑類殺菌劑（戊唑醇、聯(lián)苯三唑醇、烯唑醇）和菊酯類殺蟲(chóng)劑（胺菊酯、三氟氯氰菊酯、四氟甲醚菊酯）三類（8種）農(nóng)藥的高效液相色譜（HPLC）-二極管陣列檢測(cè)器（DAD）方法。結(jié)果表明，8種農(nóng)藥在10m in內(nèi)實(shí)現(xiàn)了基線分離，線性相關(guān)系數(shù)為0.9996～0.9999，檢出限為0.003～0.02μg/m L。該方法可用于飼料及其他樣品中三類農(nóng)藥殘留的高效、靈敏、快速檢測(cè)。

飼料；三嗪類除草劑；三唑類殺菌劑；菊酯類殺蟲(chóng)劑；二極管陣列檢測(cè)器；高效液相色譜法

［Abstract］A high performance liquid chromatography（HPLC）-diode array detector（DVD）method was developed for the determination of eight pesticides including ametryn，atrazine，tebuconazole，bitertanol，diniconazole，tetramethrin，cyhalothrin and dimefluthrin in feed samples.The results showed that complete sparation of the eight pesticideswas achieved within 10 min，the detection limits were 0.003～0.02μg/mL.Themethod was efficient，sensitive and fast，which could determine simultaneously the three classes of pesticide residues in feed or other samples.

［Key words］feed；triazine herbicide；triazole fungicide；pyrethroid insecticide；diode array detector；high performance liquid chromatography

三嗪類除草劑作為預(yù)防農(nóng)田雜草生長(zhǎng)的高效除草劑使用廣泛，因其結(jié)構(gòu)具有3個(gè)碳和3個(gè)氮對(duì)稱排列的六元環(huán)結(jié)構(gòu)母體，因此又被稱作均三氮苯類除草劑。三嗪類除草劑由于用量大、性質(zhì)較穩(wěn)定、殘留時(shí)間較長(zhǎng)，而且具有較高水溶性，因此使用過(guò)程中可能對(duì)土壤、農(nóng)作物、地表水和其他飲用水源造成污染，從而對(duì)人類健康和環(huán)境造成嚴(yán)重危害（王曉春等，2011）。三唑類殺菌劑是指含有1，2，4-三唑環(huán)的化合物，主要用于防治植物病害，對(duì)病原微生物有殺死作用或抑制生長(zhǎng)作用，因其高效、廣譜、低毒以及長(zhǎng)效性而廣泛地應(yīng)用于糧油作物等病蟲(chóng)害的防治（胡艷云等，2014）。該農(nóng)藥在農(nóng)作物、土壤和水體中的殘留給生物安全和人體健康帶來(lái)了負(fù)面影響（孫瑞娟等，2013）。菊酯類農(nóng)藥是目前廣泛使用的一類殺蟲(chóng)劑，其毒性比有機(jī)磷農(nóng)藥低，但具有一定的毒性和蓄積性（Trunnelle等，2014）。隨著三嗪類、三唑類及菊酯類農(nóng)藥的廣泛應(yīng)用，其在食品、飼料和環(huán)境中的殘留問(wèn)題也逐漸引起人們的關(guān)注。

馮蕾等（2011）通過(guò)優(yōu)化固相萃?。⊿PE）條件，采用SPE前處理，結(jié)合超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（UPLC-MS）檢測(cè)乳制品中11種常用三嗪類除草劑，即西碼津、莠去津、西草凈、阿特拉津、仲丁通、撲滅通、莠滅凈、撲滅津、特丁津、撲草凈、特丁凈的殘留量。趙春娟和高文惠（2015）建立了同時(shí)分離檢測(cè)飼料樣品中腈菌唑、戊唑醇、聯(lián)苯三唑醇、烯唑醇4種三唑類殺菌劑殘留的高效液相色譜法。

本實(shí)驗(yàn)利用二極管陣列檢測(cè)器（DAD）的可變波長(zhǎng)功能，結(jié)合溶劑梯度對(duì)飼料樣品中三嗪類除草劑、三唑類殺菌劑及菊酯類殺蟲(chóng)劑殘留進(jìn)行靈敏、快速的分離與檢測(cè)。

1　材料與方法

1.1儀器與材料Waters 1525-2988高效液相色譜儀 （美國(guó)沃特世科技有限公司）；LD-52A低速離心機(jī)（北京雷勃爾離心機(jī)有限公司）；SK5200LHC型超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲器有限公司）；SZ-93自動(dòng)雙純水蒸餾器 （上海亞榮生化儀器廠）。

甲醇（色譜純，天津市康科德科技有限公司）；莠滅凈（98％，浙江中山化工集團(tuán)有限公司）、莠去津（97％，浙江中山化工集團(tuán)有限公司）、戊唑醇（97％，鄭州綠康化工有限公司）、聯(lián)苯三唑醇（99％，鄭州綠康化工有限公司）、烯唑醇（98％，鄭州綠康化工有限公司）、胺菊酯（95％，廣東立威化工有限公司）、三氟氯氰菊酯（96％，廣東立威化工有限公司）、四氟甲醚菊酯（94％，廣東立威化工有限公司）。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制：分別準(zhǔn)確稱取莠滅凈、莠去津、戊唑醇、聯(lián)苯三唑醇、烯唑醇、胺菊酯、三氟氯氰菊酯和四氟甲醚菊酯各150mg，用乙腈溶解后分別定容于100mL容量瓶中。

雞飼料、豬飼料和牛飼料，均為市售。

1.2樣品處理稱取5.00 g樣品，研磨后用30mL甲醇提?。ǚ謩e提取兩次，每次 15 mL），超聲20 min，于4000 r/min離心10min，合并2次上清液，定容至30 mL，混勻，取10 mL過(guò)0.45μm微孔濾膜，超聲脫氣后備用（曹小妹等，2012）。

1.3色譜條件色譜柱Symmetry?C18（5μm，4.6 mm×250 mm）；流動(dòng)相：甲醇-水，溶劑梯度和流速洗脫程序見(jiàn)表1；進(jìn)樣量：20μL；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)范圍：200～300 nm。

表1　梯度洗脫程序

2　結(jié)果與討論

2.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇DAD的優(yōu)勢(shì)之一在于其能對(duì)每一個(gè)待測(cè)組分進(jìn)行光譜掃描，由掃描結(jié)果可知，8種農(nóng)藥的最大吸收波長(zhǎng)在203～222 nm，綜合考慮溶劑和各物質(zhì)的紫外吸收情況，檢測(cè)波長(zhǎng)范圍選定為200～300 nm。在該范圍內(nèi)，DAD對(duì)被分析物質(zhì)提取最大吸收波長(zhǎng)，以提高檢測(cè)靈敏度。

2.2流動(dòng)相的選擇本實(shí)驗(yàn)對(duì)8種農(nóng)藥的分離條件進(jìn)行了優(yōu)化。以甲醇-水為流動(dòng)相，當(dāng)甲醇∶水=83∶17（V/V）時(shí)，8種農(nóng)藥可實(shí)現(xiàn)分離，但整體的分離時(shí)間較長(zhǎng)。在5 min時(shí)將甲醇-水的比例提高到87∶13，但此時(shí)在5～6 min出峰的戊唑醇和聯(lián)苯三唑醇不能完全分離，故在5～6 min時(shí)將甲醇-水的比例降到85∶15，隨著甲醇比例減少，戊唑醇和聯(lián)苯三唑醇實(shí)現(xiàn)了分離，此后逐步將甲醇的比例提高到100％，此時(shí)8種農(nóng)藥在10 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)了基線分離（圖1）。

圖1　混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的分離色譜圖注：圖中1～8分別為莠滅凈、莠去津、戊唑醇、聯(lián)苯三唑醇、烯唑醇、胺菊酯、三氟氯氰菊酯、四氟甲醚菊酯。

2.3線性關(guān)系和檢出限將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制成濃度為0.001～100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，在1.3的色譜條件下測(cè)定，以峰面積對(duì)濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見(jiàn)表2。8種農(nóng)藥具有良好的線性相關(guān)性，其線性相關(guān)系數(shù)為0.9996～0.9999，檢出限為0.003～0.02μg/mL。由于有效地發(fā)揮了DAD的優(yōu)勢(shì)，與相關(guān)文獻(xiàn)（孟瀟等，2013；金射鳳等，2012）比較，對(duì)被分析物質(zhì)檢測(cè)的靈敏度明顯提高。

表2　8種農(nóng)藥的線性關(guān)系及檢出限

2.4樣品測(cè)定飼料樣品按照1.2中樣品處理方法處理，在1.3色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，其色譜分離圖如圖2所示。結(jié)果顯示，在雞飼料、豬飼料和牛飼料中未檢出此8種農(nóng)藥。

注：a為雞飼料樣品，b為豬飼料樣品，c為牛飼料樣品。圖2　飼料樣品色譜分離圖

2.5回收率和精密度實(shí)驗(yàn)對(duì)雞飼料、豬飼料和牛飼料在1μg/mL和50μg/mL 2個(gè)添加水平下進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明，樣品加標(biāo)平均回收率（AR）為91.3％～108.4％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSDs）為1.56％～3.92％（n=5）。表明該方法回收率和精密度高，分析方法可行。

表3　樣品加標(biāo)回收率和精密度（n=5）

3　結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了同時(shí)分離檢測(cè)飼料中三嗪類除草劑（莠滅凈、莠去津）、三唑類殺菌劑（戊唑醇、聯(lián)苯三唑醇、烯唑醇）和菊酯類殺蟲(chóng)劑（胺菊酯、三氟氯氰菊酯、四氟甲醚菊酯）3類（8種）農(nóng)藥殘留的高效液相色譜-DAD法。8種農(nóng)藥在10 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)了基線分離，其線性相關(guān)系數(shù)≥0.9996，檢出限為0.003～0.02μg/mL。樣品加標(biāo)平均回收率為91.3％～108.4％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSDs）為1.56％～3.92％（n=5）。該方法靈敏、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速，可用于飼料及其他樣品中這8種農(nóng)藥的檢測(cè)。

［1］曹小妹，王攀，張敬敬，等.毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜法檢測(cè)飼料中防腐劑［J］.中國(guó)飼料，2012，，7：34～36.

［2］馮蕾，胡曉芳，許書(shū)軍，等.SPE-UPLC-MS法同時(shí)檢測(cè)乳制品中11種三嗪類除草劑的殘留［J］.上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)科學(xué)版），2011，29（2）：88 ～94.

［3］胡艷云，徐慧群，姚劍，等.分子印跡固相萃取-液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定果蔬中20種三唑類農(nóng)藥殘留［J］.分析化學(xué)研究學(xué)報(bào)，2014，42（2）：227～232.

［4］金射鳳，周游，張家俊，等.水、土壤和小麥中阿特拉津和草萘胺殘留檢測(cè)的前處理方法研究［J］.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，35（6）：137～141.

［5］孟瀟，邵華，張志虎.高效液相色譜法測(cè)定尿中擬除蟲(chóng)菊酯及其代謝產(chǎn)物的方法研究［J］.中國(guó)輻射衛(wèi)生，2013，22（2）：215～217.

［6］孫瑞娟，郭晶，宋千千，等.三唑醇、三唑酮對(duì)人肝細(xì)胞的毒性研究［J］.南開(kāi)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2013，46（1）：83～87.

［7］王曉春，王廣，焦杏春.三嗪類除草劑分析方法研究進(jìn)展 ［J］.農(nóng)藥，2011，50（5）：320～324.

［8］趙春娟，高文惠.高效液相色譜法檢測(cè)飼料中三唑類殺菌劑殘留［J］.中國(guó)飼料，2015，3：24～25，34.

［9］Trunnelle K J，Bennett D H，Ahn K C，et al.Concentrationsof the urinary pyrethroid metabolite 3-phenoxybenzoic acid in farm worker fam ilies in the M ICASA study［J］.Environmental Research，2014，131：153～159.

S816.17

A

1004-3314（2016）08-0037-03

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20160810

河北省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（14227504D，14236602D-13）