雙孢蘑菇菌種生產(chǎn)規(guī)范與技術(shù)要點(diǎn)

周林，郭尚，蕭晉川，趙照林，吳風(fēng)明，郭宵飛，劉曉鋼

(山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，太原030031)

?

雙孢蘑菇菌種生產(chǎn)規(guī)范與技術(shù)要點(diǎn)

周林，郭尚，蕭晉川，趙照林，吳風(fēng)明，郭宵飛，劉曉鋼

(山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，太原030031)

食用菌產(chǎn)業(yè)大發(fā)展，菌種是非常重要的關(guān)鍵，起著巨大的作用。介紹了雙孢蘑菇菌種生產(chǎn)基本流程和操作技術(shù)，分析了菌種生產(chǎn)過程中的重點(diǎn)技術(shù)特點(diǎn)，推薦了雙孢蘑菇菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程，供我國特別是山西的廣大雙孢蘑菇生產(chǎn)者和菌種生產(chǎn)者以及關(guān)聯(lián)業(yè)務(wù)人員參考應(yīng)用。

雙孢蘑菇；菌種；菌種生產(chǎn)；生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范

隨著我國經(jīng)濟(jì)實(shí)力的大發(fā)展，工農(nóng)業(yè)產(chǎn)量產(chǎn)值在世界中占有越來越重要的位置，我國的食用菌產(chǎn)業(yè)不斷擴(kuò)大，生產(chǎn)總量達(dá)到3000萬t左右，在世界食用菌生產(chǎn)量中占據(jù)第一位[1]。食用菌生產(chǎn)量的增長，菌種作為生產(chǎn)資料是至關(guān)重要的。

雙孢蘑菇(Aagaricusbisporus)是主要的食用菌產(chǎn)品之一，微生物學(xué)分類隸屬擔(dān)子菌亞門(Basidiomycotina)、傘菌目(Agaricales)、蘑菇科(Agaricaceae)、蘑菇屬(Agaricus)的草腐菌，在全國乃至世界上都是占有重要地位的，對(duì)食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重大的影響。雙孢蘑菇的菌種生產(chǎn)是其雙孢蘑菇生產(chǎn)的重要環(huán)節(jié)，是生產(chǎn)量和產(chǎn)品質(zhì)量的第一關(guān)鍵。菌種生產(chǎn)技術(shù)的要求和規(guī)范以及菌種產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢驗(yàn)，直接影響食用菌的生產(chǎn)和產(chǎn)品質(zhì)量。為了實(shí)現(xiàn)雙孢蘑菇菌種生產(chǎn)的技術(shù)規(guī)范化，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化，推進(jìn)我國特別是山西食用菌產(chǎn)業(yè)走向現(xiàn)代化，維護(hù)菌種生產(chǎn)者、經(jīng)營者和使用者的合法權(quán)益，根據(jù)我國國家機(jī)關(guān)，質(zhì)量管理部門的有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)范，我們系統(tǒng)地，精準(zhǔn)地將雙孢蘑菇的菌種生產(chǎn)技術(shù)與質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)總結(jié)出來，供廣大雙孢蘑菇企業(yè)，栽培農(nóng)戶者，菌種生產(chǎn)者以及管理者參考應(yīng)用。本文系統(tǒng)地介紹雙孢蘑菇菌種生產(chǎn)規(guī)范與技術(shù)要點(diǎn)。

1　我國雙孢蘑菇及其菌種生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范介紹

我國各級(jí)政府以及食用菌管理部門都非常重視食用菌產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和產(chǎn)品質(zhì)量，制定了很多相關(guān)的法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)，技術(shù)規(guī)范等，監(jiān)查管理有關(guān)食用菌產(chǎn)業(yè)的生產(chǎn)、流通、加工、銷售各個(gè)環(huán)節(jié)。雙孢蘑菇也有很多相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)，行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)以及各省的地方標(biāo)準(zhǔn)和企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。我們?cè)谥贫ū炯夹g(shù)規(guī)范時(shí)也參照了很多國家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和雙孢蘑菇的有關(guān)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，如《中華人民共和國種子法》[2]；《食用菌菌種管理辦法》[3]；《GB/T12728-2006 食用菌術(shù)語》[4]；《GB/T 23190-2008雙孢蘑菇》[5]；《NY/T 528-2010食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》[6]；《NY/T 1846-2010食用菌菌種檢驗(yàn)規(guī)程》[7]；《NY/T 1731-2009食用菌菌種良好作業(yè)規(guī)范》[8]；《GB/T 19171-2003 雙孢蘑菇菌種》[9]；《GB/T 7096-2003 食用菌衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》[10]；《GB/191-1990包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)準(zhǔn)》[11]《GB4789.28-2013》[12]等。在本論文中引用的有關(guān)上述標(biāo)準(zhǔn)中的條文，凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤內(nèi)容)或改訂版，均不適用本規(guī)程。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本規(guī)程。

2　菌種生產(chǎn)包含的內(nèi)容與菌種生產(chǎn)的流程

菌種生產(chǎn)所包含的內(nèi)容一般是菌種生產(chǎn)制作涉及到的，生產(chǎn)條件，設(shè)備，人員，技術(shù)，操作，質(zhì)量檢驗(yàn)，入庫，運(yùn)輸，儲(chǔ)藏等全過程。

菌種生產(chǎn)的流程包括，生產(chǎn)場(chǎng)地選擇—環(huán)境水源整備—廠區(qū)布局與廠房設(shè)置—設(shè)備與設(shè)施—生產(chǎn)原料儲(chǔ)備—衛(wèi)生檢驗(yàn)與消毒—培養(yǎng)基制成—分裝—滅菌—冷卻—接種—培養(yǎng)(檢驗(yàn))—成品—檢驗(yàn)合格—入庫管理。

3　菌種生產(chǎn)場(chǎng)(機(jī)關(guān)，企業(yè))的責(zé)任與義務(wù)

菌種場(chǎng)生產(chǎn)食用菌菌種必須經(jīng)過國家有關(guān)管理部門審批合格，持有生產(chǎn)食用菌菌種的資質(zhì)證明。

生產(chǎn)或出售菌種的企業(yè)或科研單位，對(duì)所生產(chǎn)的菌種以及出售的菌種質(zhì)量負(fù)有責(zé)任，并有義務(wù)將所生產(chǎn)的菌種的使用方法和注意事項(xiàng)向菌種使用者說明。

4　雙孢蘑菇菌種生產(chǎn)技術(shù)與工程管理

4.1菌種生產(chǎn)的產(chǎn)品保證與質(zhì)量管理檢驗(yàn)

產(chǎn)品保證主要是指保證提供經(jīng)過質(zhì)量檢驗(yàn)合格的具有良好農(nóng)業(yè)生產(chǎn)性能的菌種產(chǎn)品，以及保證所提供的菌種產(chǎn)品出現(xiàn)質(zhì)量問題時(shí)要承擔(dān)責(zé)任。

菌種質(zhì)量管理與檢驗(yàn)是菌種生產(chǎn)單位的重要環(huán)節(jié)，必須配備專門機(jī)構(gòu)，專業(yè)專職技術(shù)人員，有職有權(quán)，有責(zé)任有擔(dān)當(dāng)，制定嚴(yán)格的質(zhì)量管理與檢驗(yàn)制度，監(jiān)督全生產(chǎn)單位堅(jiān)決執(zhí)行，行之有效。菌種質(zhì)量管理檢驗(yàn)主要包括廠區(qū)環(huán)境衛(wèi)生安全—水源及廠房衛(wèi)生檢驗(yàn)—生產(chǎn)原料檢驗(yàn)—生產(chǎn)工序檢驗(yàn)—菌種質(zhì)量檢驗(yàn)—菌種生產(chǎn)單位審核—菌種檔案。

4.2生產(chǎn)技術(shù)人員與質(zhì)量管理人員

菌種生產(chǎn)人員和菌種質(zhì)量檢驗(yàn)人員必須經(jīng)過省級(jí)人民政府農(nóng)業(yè)主管部門考核合格，并持有上崗證明。

菌種生產(chǎn)單位要建立菌種生產(chǎn)技術(shù)人員和質(zhì)量管理人員的培養(yǎng)計(jì)劃，并按計(jì)劃認(rèn)真培訓(xùn)所有從業(yè)人員。新員工上崗前要接受食用菌生產(chǎn)技術(shù)以及菌種生產(chǎn)技術(shù)，質(zhì)量檢驗(yàn)等教育和培訓(xùn)，并在以后的每一年都進(jìn)行新技術(shù)培訓(xùn)進(jìn)修。

4.3生產(chǎn)條件與設(shè)備

4.3.1生產(chǎn)條件

場(chǎng)地選擇：生產(chǎn)雙孢蘑菇菌種的廠址要選擇地勢(shì)高、干燥、通風(fēng)良好、排水暢通、交通方便的地方。

環(huán)境衛(wèi)生要求：廠區(qū)周圍300m內(nèi)不允許存在有禽畜舍，垃圾糞便堆積點(diǎn)，污水廢水廢渣點(diǎn)等污染源。50m內(nèi)不允許有食用菌生產(chǎn)場(chǎng)地，以及農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)。廠區(qū)布局與廠房設(shè)置：如表1所示。

表1　雙孢蘑菇菌種生產(chǎn)廠區(qū)布局與廠房設(shè)置

4.3.2生產(chǎn)設(shè)備與設(shè)施，如表2所示

表2　菌種生產(chǎn)常用設(shè)備與設(shè)施

4.4生產(chǎn)原料與菌種

4.4.1用于雙孢蘑菇菌種生產(chǎn)的原料主要是農(nóng)作物谷粒及農(nóng)副產(chǎn)品的廢棄下腳料如稻稈、麥稈、棉籽皮等，還有其他生物制劑如酵母粉、蛋白胨等。另外還要添加一些化學(xué)藥品如硫酸鎂、磷酸二氫鉀等。

4.4.2菌種以及種源的確認(rèn)。菌種的引種來源要確實(shí)可靠，一般應(yīng)從國家正式科研機(jī)關(guān)，或具有菌種出售資質(zhì)的菌種生產(chǎn)單位。要有正式的菌種質(zhì)量保證書。引種的菌種質(zhì)量檢驗(yàn)及種性鑒定是保證菌種生產(chǎn)質(zhì)量的第一關(guān)健。在菌種生產(chǎn)開始時(shí)，要對(duì)菌種的質(zhì)量和種性做正規(guī)的栽培試驗(yàn)。

4.5生產(chǎn)技術(shù)與良好操作

4.5.1培養(yǎng)原料來源及成分確認(rèn)。用于雙孢蘑菇菌種生產(chǎn)的原料主要是農(nóng)作物谷粒及農(nóng)副產(chǎn)品的廢棄下腳料如稻稈，麥稈，棉籽皮等，這些原料的作物生產(chǎn)地以及作物的品種不同，其下腳料的物質(zhì)成分含量也不盡相同，有的作物下腳料可能會(huì)含有重金屬污染，以及農(nóng)藥殘留，會(huì)影響到雙孢蘑菇菌種的質(zhì)量。因此在擴(kuò)繁菌種時(shí)要進(jìn)行確認(rèn)。應(yīng)確認(rèn)農(nóng)作物下腳料的原產(chǎn)地，作物種類及品中，農(nóng)藥使用情況并進(jìn)行登記記錄。

4.5.2培養(yǎng)基配制與分裝

4.5.2.1母種培養(yǎng)基。一般使用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)，也可以使用綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(CPDA)，嚴(yán)格掌握pH值。

4.5.2.2原種與栽培種培養(yǎng)基。雙孢蘑菇原種和栽培種的生產(chǎn)培養(yǎng)基，可根據(jù)當(dāng)?shù)氐脑腺Y源、農(nóng)作物生產(chǎn)情況以及農(nóng)藥使用狀況選用合適的原材料，可以選擇以下的培養(yǎng)基配方，注意調(diào)配pH值。

腐熟麥稈或稻稈(干)77%，腐熟牛糞粉(干)20%,石膏粉1%,碳酸鈣2%,含水量62%±1%,pH7.5。

腐熟棉籽殼(干)97%，石膏粉1%,碳酸鈣2%,含水量55%±1%, pH7.5。

谷粒(小麥，谷子，玉米，高粱)98%，石膏粉2%,含水量50%±1%, pH7.5。

4.5.2.3培養(yǎng)基分裝。母種培養(yǎng)基的分裝量掌握在試管長度的1/4～1/5，滅菌后擺放成的斜面頂端距試管口不少于50mm。原種和栽培種培養(yǎng)基裝至距瓶(袋)口不少于50mm，滅菌后不少于45mm。

4.5.3滅菌及滅菌效果檢查。母種的培養(yǎng)基配制分裝后應(yīng)立即滅菌;原種和栽培種培養(yǎng)基配制后應(yīng)在4h內(nèi)滅菌。母種培養(yǎng)基滅菌0.11～0.12MPa,30min，原種和栽培種培養(yǎng)基滅菌應(yīng)使用0.14～0.15MPa,2.5h(參照NY/T528-2010[6])。

雙孢蘑菇的菌種培養(yǎng)基滅菌應(yīng)使用高壓滅菌，不宜使用常壓法。滅菌后藥進(jìn)行滅菌效果檢查。母種培養(yǎng)基可直接放入28℃恒溫培養(yǎng)，原種和栽培種培養(yǎng)基可先取一點(diǎn)培養(yǎng)基接入PDA培養(yǎng)基中，置于28℃恒溫培養(yǎng)，48h后檢查有無微生物長出，判斷培養(yǎng)基滅菌是否合格。

4.5.4冷卻。冷卻室在使用前要進(jìn)行清潔和消毒處理。將滅菌后的原種瓶(袋)或栽培種瓶(袋)放置在冷卻室中自然冷卻到料溫降至適宜溫度。

4.5.5接種

4.5.5.1接種室(箱)的清潔滅菌處理。接種室為專門接種用，室內(nèi)要求清潔無菌，在搬入接種物和被接種物前要衛(wèi)生清潔處理，然后進(jìn)行消毒處理。接種超凈臺(tái)(接種箱)藥用藥物消毒(75%酒精)并用紫外燈照射。

4.5.5.2接種物的滅菌。接種用培養(yǎng)基可以先放入培養(yǎng)室與培養(yǎng)室一起消毒滅菌。菌種在放入超凈臺(tái)里時(shí)，要進(jìn)行表面消毒滅菌。

4.5.5.3接種操作。在無菌室(箱)或凈化工作臺(tái)上嚴(yán)格按無菌操作接種。接種的品接要單品種操作，中間不得更換品種。一個(gè)品種操作完成后，再換另一品種。無論是接種母種還是原種、栽培種，接種時(shí)都應(yīng)從開口處一點(diǎn)接種，避免打孔多點(diǎn)接種。

4.5.5.4接種完成后及時(shí)貼好標(biāo)簽、標(biāo)志，按照品質(zhì)管理要求，記錄品種，接種時(shí)間等必要信息

4.5.5.5接種室(箱)后處理。接種室每次使用后，要及時(shí)清理清潔，排除廢氣，清除廢物，臺(tái)面要用75%酒精或新潔爾滅溶液擦拭消毒。

4.5.6培養(yǎng)

4.5.6.1培養(yǎng)室滅菌處理。在使用培養(yǎng)室的前兩天，采用藥物消毒和紫外線消毒。

4.5.6.2培養(yǎng)條件。雙孢蘑菇的菌種培養(yǎng)條件應(yīng)保持適宜的溫度24℃±1℃，保持空氣相對(duì)濕度在75%以下，要求通風(fēng)良好，避免直射陽光。

4.5.6.3培養(yǎng)期的檢查。各級(jí)菌種培養(yǎng)期間應(yīng)定期檢查，按照本標(biāo)準(zhǔn)的要求以及制種單位的管理制度進(jìn)行檢查，及時(shí)揀出不合格菌種，并做好檢驗(yàn)記錄作為菌種質(zhì)量管理檔案資料。

4.5.7成品檢驗(yàn)。培養(yǎng)結(jié)束后進(jìn)行產(chǎn)品的最終檢驗(yàn)。貼好標(biāo)簽、標(biāo)志、接種日期、培養(yǎng)日數(shù)等，做好登記。

4.5.8入庫管理。入庫之前應(yīng)確認(rèn)產(chǎn)品質(zhì)量合格，并做好入庫登記。

母種一般在5℃±1℃冰箱中貯存，保藏期不超過90天。原種應(yīng)盡快使用，在5℃±1℃下貯存，保藏期不得超過40天。短期儲(chǔ)藏可在溫度24℃±1℃、清潔、通風(fēng)、干燥(相對(duì)濕度70%～75%)、避光的室內(nèi)存放，但不應(yīng)超出10天。栽培種應(yīng)盡快使用，在溫度24℃±1℃、清潔、通風(fēng)、干燥(相對(duì)濕度70%～75%)、避光的室內(nèi)存放谷粒種不超過10天，其余培養(yǎng)基的栽培種不超過20天。在5℃±1℃下可貯存90天。

[1]張俊飚，李波. 對(duì)我國食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展的現(xiàn)狀與政策思考 [J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(社會(huì)科學(xué)版)，2012(5)：13-21.

[2]中華人民共和國種子法.

[3]中國農(nóng)業(yè)部.食用菌菌種管理辦法(農(nóng)業(yè)部令2015年第1號(hào)修訂) [EB/OL].http://www.moa.gov.cn，20150506-4581023.htm，2015-05-06.

[4]GB/T12728-2006, 食用菌術(shù)語[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2007.

[5]GB/T 23190-2008，雙孢蘑菇[S]. 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.

[6]NY/T 528-2010,食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程[S]. 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010.

[7]NY/T 1846-2010,食用菌菌種檢驗(yàn)規(guī)程[S]. 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010.

[8]NY/T 1731-2009,食用菌菌種良好作業(yè)規(guī)范[S]. 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2009.

[9]GB/T 19171-2003,雙孢蘑菇菌種[S]. 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

[10]GB/T 7096-2003,食用菌衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[S]. 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

[11]GB/191-1990,包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，1990.

[12]GB4789.28-2013,食品微生物學(xué)檢驗(yàn)培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求[S].北京:中國質(zhì)檢出版社，2014.

Practice and Technology Point for Agaricus bisporus Spawn Production

Zhou Lin, Guo Shang, Xiao Jinchuan, Zhao Zhaolin,Wu Fengming,Guo Xiaofei, Liu Xiaogang

(Shanxi Provincial Academy of Agricultural Sciences, Institute of Edible Fungi, Taiyuan 030031)

The spawn is very important for development of edible fungus industry.This paper introduces the basic process and operation technology ofAgaricusbisporusspawn production, and analyses key technology in the process of producing.It is recommended that the technical specification ofAgaricusbisporusspawn production, and offers reference for the large number ofAgaricusbisporusproducer and the related service personnel.

Agaricusbisporus;Spawn; Spawn production; Technical specification for production

2016-06-12

2014年度山西省煤基重點(diǎn)科技攻關(guān)項(xiàng)目(FT2014-03)子項(xiàng)目“食用菌產(chǎn)品質(zhì)量保證體系構(gòu)建與研究”的階段性研究成果

周林(1958-)，男，博士，主要從事食用菌資源及菌根食用菌共生機(jī)理研究，食用菌生產(chǎn)技術(shù)與產(chǎn)品質(zhì)量保證體系研究，E-mail：nkysyj301@126.com。

S646.1+1

B

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2016.05.017