針刺治療腸易激綜合征的臨床觀察及其對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞功能的影響

鄧海珊佛山市中醫(yī)院三水醫(yī)院治未病科，廣東 三水 528100

臨床研究

針刺治療腸易激綜合征的臨床觀察及其對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞功能的影響

鄧海珊
佛山市中醫(yī)院三水醫(yī)院治未病科，廣東 三水 528100

目的觀察針刺天樞穴與足三里穴對(duì)腸易激綜合征（IBS）患者CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）、CD8+CD28-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和TGF-β、IL-10的影響。方法 將納入的IBS 30例患者隨機(jī)分成天樞組、足三里組合配伍組，分別予天樞穴、足三里穴和足三里穴+天樞穴針刺治療7 d，另設(shè)置健康對(duì)照組10例。結(jié)果 針刺治療后與未治療前IBS患者各項(xiàng)指標(biāo)具有顯著的差異性（P＜0.01）；健康組與配伍組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；余各組除天樞組CD8+CD28-T（%）指標(biāo)外，均與健康組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；針刺組內(nèi)部互相比較：與足三里組比較，除天樞組的CD4+CD25+T（%）指標(biāo)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異外（P＞0.05），余皆具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；配伍組與天樞組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 針刺天樞和足三里能明顯的調(diào)節(jié)Treg細(xì)胞百分比與TGF-β1和IL-10，從而改善機(jī)體的免疫機(jī)能。

腸易激綜合征；天樞穴；足三里穴；調(diào)節(jié)性T細(xì)胞

腸易激綜合征（IBS）是臨床上最常見的功能性胃腸?。‵D），包括腹痛、腹脹不適、以大便習(xí)慣改變?yōu)樘卣鳎?］，并伴大便性狀異常，持續(xù)存在或間歇發(fā)作，而又缺乏明顯形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)異常改變的臨床綜合征［2］。最近一項(xiàng)基于人群的大型多中心IBS患病率研究顯示，我國(guó)IBS患病率為4.6%［3］。目前西醫(yī)治療IBS存在易復(fù)發(fā)、不徹底等問題。本文擬通過中醫(yī)針刺法，針刺天樞穴和足三里穴對(duì)IBS的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）及白介素10（IL-10）在外周血含量的影響，從而研究探討其治療IBS的可能機(jī)制。

1　資料和方法

1.1一般資料

納入2015年1月～2016年1月我院IBS患者30例，診斷符合2001年中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的標(biāo)準(zhǔn)［4］。男18例，女12例；年齡30～63歲，平均47歲，30例患者隨機(jī)分成為天樞針刺組、足三里針刺組、天樞+足三里配穴組。另取同期10例健康查體者檢作為正常對(duì)照組。所有受試對(duì)象均排除細(xì)菌性痢疾及結(jié)腸克羅恩病（CD）等疾??；過去4周內(nèi)未服用過任何免疫調(diào)節(jié)藥物；抽取外周血前12 h未使用任何藥物。

1.2標(biāo)本采集

所有受檢對(duì)象在采血前1周停服影響胃腸動(dòng)力的藥物，抽空腹靜脈血3 mL。

1.3主要試劑和儀器

流式細(xì)胞儀，9600型基因擴(kuò)增儀，HCD3T Cell En-riehment Column、IL-10與TGF-B ELISA診斷試劑盒，RT-PCR試劑盒等。

1.4治療方法

針刺治療使用華佗牌28號(hào)、25 mm毫針，通過G6805-1A型電針治療儀，采用疏密波，治療25 min。1次/d，持續(xù)7 d。對(duì)照組不采取任何治療。

1.5觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，采用ELISA方法檢測(cè)人TGF-β1、IL-10。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件，所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)后，組間比較采用方差分析和t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1健康組與IBS組4項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果比較

CD4+CD25+T細(xì)胞百分比、CD8+CD28-T細(xì)胞百分比、TGF-β1、IL-10在外周血的含量均有明顯差異（P＜0.01，表1）。

表1　外周血指標(biāo)結(jié)果（）

表1　外周血指標(biāo)結(jié)果（）

注:與健康組比較，aP＜0.01.

IL-10 p/（pg·mL-1）6.812±0.141 9.322±0.804a組別健康組IBS組n 10 30 CD4+CD25+T（%）1.622±0.430 3.630±0.093aCD8+CD28-T（%）0.225±0.015 0.106±0.010aTGF-β1p/（pg·mL-1）336.7±10.99 491.8±13.530a

2.2針刺治療組與健康組指標(biāo)比較結(jié)果

健康組與配伍組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；其余各組除天樞組CD8+CD28-T（%）指標(biāo)外，均與健康組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；排除健康組，針刺組內(nèi)部互相比較結(jié)果：與足三里組比較，除天樞組的CD4+CD25+T（%）指標(biāo)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異外（P＞0.05），其余均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；配伍組與天樞組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，表2）。

表2　健康組與針刺治療組指標(biāo)結(jié)果（，n=10）

表2　健康組與針刺治療組指標(biāo)結(jié)果（，n=10）

注:與健康組比較，aP＜0.01；與足三里組比較，bP＜0.05；與配伍組與天樞組相比，cP＜0.05.

IL-10 p/（pg·mL-1）9.322±0.804 8.238±0.102a8.745±0.065ab9.421±0.096bc組別健康組足三里組天樞組配伍組CD4+CD25+T（%）3.629±0.093 3.236±0.108a3.346±0.096a3.694±0.077bcCD8+CD28-T（%）0.106±0.010 0.138±0.008a0.115±0.006b0.108±0.004bcTGF-β1 p/（pg·mL-1）491.800±13.530 421.000±7.424a460.500±9.156ab498.900±12.188bc

2.3IBS患者治療前后指標(biāo)結(jié)果

足三里組、天樞組合和配伍組皆與未治療前IBS患者各項(xiàng)指標(biāo)具有顯著的差異性（P＜0.01，表3）。

表3　針刺治療前后指標(biāo)結(jié)果（）

表3　針刺治療前后指標(biāo)結(jié)果（）

注:足三里組、天樞組與配伍組與治療前IBS組比較，aP＜0.01.

IL-10 p/（pg·mL-1）9.322±0.804 8.238±0.102a8.745±0.065a9.421±0.096a組別治療前組足三里組天樞組配伍組n 30 10 10 10 CD4+CD25+T（%）3.630±0.093 3.236±0.108a3.346±0.096a3.694±0.077aCD8+CD28-T（%）0.106±0.010 0.138±0.008a0.115±0.006a0.108±0.004aTGF-β1 p/（pg·mL-1）491.8±13.530 421.000±7.424a460.500±9.156a498.900±12.188a

3　討論

《針灸甲乙經(jīng)》中曰“：天樞，大腸募也，……，腹脹腸鳴，……天樞主之?！碧鞓醒ㄗ鳛樽汴?yáng)明胃經(jīng)穴、大腸募穴，具有疏調(diào)腸腑、消食導(dǎo)滯、理氣通便之功，擅治各種腸腑病及腸腑相關(guān)病證。已有研究表明［5］，針刺該穴可使CD4含量增加，CD4/CD8比值趨向正常，有利于CD4介導(dǎo)的B淋巴細(xì)胞分泌SIgA，增強(qiáng)了腸道局部免疫功能，有效保護(hù)腸道孰膜的完整性。孫建華等［6］指出，電針天樞穴可能通過改善結(jié)腸慢波節(jié)律，可改善結(jié)腸的傳輸功能。胡曄［7］研究發(fā)現(xiàn)天樞穴能夠明顯改善患者的胃腸道功能，提高患者的生活質(zhì)量，且遠(yuǎn)期療效好。而《靈樞·本輸》記載“大腸小腸皆屬于胃”，足三里是足陽(yáng)明胃經(jīng)合穴，針刺足三里不僅可以調(diào)節(jié)胃腸功能，還能調(diào)理臟腑經(jīng)絡(luò)氣血，相關(guān)臨床研究亦表明足三里為治療IBS之要穴之一［8］。趙寧俠等［9］研究發(fā)現(xiàn)電針足三里穴可提高正常大鼠及免疫抑制模型大鼠的紅細(xì)胞免疫粘附功能。李世安等［10］研究，歷年來(lái)文獻(xiàn)對(duì)于IBS主要選穴主有5個(gè)，其中天樞出現(xiàn)占80%，足三里70.9%。從上述經(jīng)典理論及現(xiàn)代研究可以看出，天樞穴及足三里穴，是臨床上使用最多的穴位，也是療效滿意的穴位組合。

作為T細(xì)胞亞群的重要一員，CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）具有免疫增強(qiáng)及下調(diào)的雙重免疫調(diào)節(jié)作用。Treg其重要特征以分泌細(xì)胞因子IL-10及TGF-β1為主，后兩者是Treg執(zhí)行免疫下調(diào)的重要基礎(chǔ)［11-12］。與CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞類似，CD8+CD28-T細(xì)胞同樣作為Treg，它可以分泌細(xì)胞因子特別是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）及白介素10（IL-10）從而實(shí)現(xiàn)免疫調(diào)節(jié)作用［13］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：天樞針刺組、足三里針刺組和天樞+足三里配伍針刺組均能使被檢測(cè)的4項(xiàng)指標(biāo)（CD4+ CD25+T、CD8+CD28-T、TGF-β1、IL-10）不同程度的改變，差異具有顯著性，說(shuō)明了針刺這兩個(gè)穴位能明顯的調(diào)節(jié)Treg細(xì)胞百分比與TGF-β1和IL-10，從而改善機(jī)體的免疫機(jī)能；在針刺組內(nèi)比較中，除天樞組該CD4+ CD25+T（%）指標(biāo)，余皆與足三里組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），而配伍組與天樞組比較統(tǒng)計(jì)學(xué)亦具有差異性（P＜0.05），這說(shuō)明從改善指標(biāo)強(qiáng)弱為足三里組＜天樞組＜配伍組，配伍組比另兩組更能改善，也印證了前文論述的天樞和足三里穴是治療胃腸疾病最常用的配伍穴，并且效果顯著；配伍組與健康組經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析無(wú)差異，提示我們配伍組能改善患者機(jī)體免疫功能達(dá)到正常人水平，效果顯著。

總之，目前IBS在西醫(yī)治療上存在的易復(fù)發(fā)、不徹底等問題也加重了患者精神、經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。腸易激綜合征的發(fā)病機(jī)制多種，其中免疫功能的改變是IBS的重要機(jī)制。許多臨床研究表明，針灸治療是治療IBS的有效手段，而本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步論證了針刺天樞及足三里對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞功能是具有明顯的調(diào)節(jié)作用，這對(duì)以后中醫(yī)治療IBS提供了更有效的方法路徑和可在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討針灸與IBS的機(jī)制。

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Effects of acupuncture via Tianshu and Zusanli point on the regulatory T cells for patients with IBS

DENG Haishan
Department of Following the Prognosis of Disease，Sanshui TCM hospital affiliated to Foshan TCM hospital，Sanshui 528100，China

Objective To observe effects of Tianshu point and Zusanli point on IBS patients，and the levels of CD4+CD25-Treg，CD8+CD28-Treg，TGF-β and IL-10 in plasma.Methods 30 patients were qualified for inclusion，with 10 in each group randomly，included Tianshu group and Zusanli group and Tianshu+Zusanli group.Besides，a normal group with 10 patients were included.The acupuncture group were given electroacupuncture for 7 days，while the normal group was done nothing. Results Compared with before treatment after treatment，the detection index had a statistically significant difference（P＜0.01）；No statistical significance between healthy group and experimental group（P＞0.05）；Compared with Zusanli group，except for the CD8+CD28-T（%）of Tianshu group（P＞0.05），other groups were significantly different（P＜0.05）；Compared with Tianshu group and Tianshu+Zusanli group，it had a significant difference（P＜0.05）.Conclusion Electroacupuncture the Tianshu and Zusanli can regulate the CD4+CD25-Treg、CD8+CD28-Treg、TGF-β and IL-10 in plasma obviously which can finally enhance body's immune.

irritable bowel syndrome；tianshu point；zusanli point；regulatory T cells

2016-05-29

廣東省佛山市醫(yī)學(xué)科技項(xiàng)目（2015AB001265）

鄧海珊，副主任中醫(yī)師，E-mail：sszjdhs@sohu.com