CD44V 6在大腸癌組織和外周血表達(dá)及其臨床意義

宋云駿， 姜林鶴， 季世強(qiáng)， 黃 微， 關(guān)亞男， 許再超， 楊金光

（河北省承德市中心醫(yī)院急診外科， 河北 承德 067000）

CD44V 6在大腸癌組織和外周血表達(dá)及其臨床意義

宋云駿， 姜林鶴， 季世強(qiáng)， 黃 微， 關(guān)亞男， 許再超， 楊金光

（河北省承德市中心醫(yī)院急診外科， 河北 承德 067000）

目的：檢測(cè)大腸癌組織中CD44V6的表達(dá)和外周血中CD44V6的水平，分析與大腸癌的臨床病理學(xué)特征和患者預(yù)后的關(guān)系。方法：收集57例大腸癌手術(shù)組織和外周血血清標(biāo)本，分別應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法（SP）和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)CD44V6的表達(dá)，分析其與大腸癌的臨床病理特征之間的關(guān)系以及與患者預(yù)后的相關(guān)性。結(jié)果：CD44V6在大腸癌組織中的表達(dá)（63.16%）明顯高于其在正常大腸黏膜中的表達(dá)水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（10.00%，P=0.002）?；颊哐逯蠧D44V6為14. 62±3.344ng/m L，而正常對(duì)照組血清中為 3.22±1.65ng/m L，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。大腸癌中的CD44V6表達(dá)與腫瘤的浸潤(rùn)深度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及臨床分期有關(guān)。通過Kaplan-Meier生存分析發(fā)現(xiàn)，CD44V6高表達(dá)的患者五年生存率低于低表達(dá)患者，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：CD44V6在大腸癌組織和血清中高表達(dá)，并可能成為預(yù)測(cè)大腸癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移和預(yù)后的指標(biāo)。

大腸癌； CD44V6； 免疫組化； ELLSA

本研究為CD44V64作為臨床判斷預(yù)測(cè)大腸癌轉(zhuǎn)移和預(yù)后指標(biāo)提供有力證據(jù)；對(duì)臨床評(píng)價(jià)療效、評(píng)估病情和指導(dǎo)治療具有重要的參考意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：選取2011年1月至2012年12月間在承德市中心醫(yī)院腫瘤科入院的大腸癌患者57例，所有患者均為初診手術(shù)患者，術(shù)前未接受放、化療及免疫治療?；颊吣挲g36～70歲，中位年齡47歲；其中男性35例，女性22例。手術(shù)切除組織，4%多聚甲醛固定并進(jìn)行石蠟包埋。同時(shí)收集距離癌組織15cm遠(yuǎn)處的腸黏膜組織作為正常對(duì)照。根據(jù)第六版的惡性腫瘤TNM分類進(jìn)行臨床分期，并由兩位病理科醫(yī)師進(jìn)行準(zhǔn)確的確診。其中結(jié)腸癌38例，直腸癌19例。按照浸潤(rùn)深度分為兩組：浸潤(rùn)至漿膜及漿膜外32例、未超過肌層25例；根據(jù)腫瘤分化程度分為：高分化腺癌11例，中分化腺癌34例，低分化腺癌12例。Duke's分期：A 期6例，B期18例，C期33例；按照是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，分為兩組：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性33例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性24例。同時(shí)在術(shù)前取患者空腹靜脈血2～3mL，待血液凝固后分離上清液，在-70℃下冰凍保存。另取10例正常人外周血作為正常對(duì)照。

1.2 免疫組織化學(xué)染色法：免疫組織化學(xué)染色（SP兩步法）熱修復(fù)抗原后采用兩步法檢測(cè)大腸癌和癌旁組織中CD44V6的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作。CD44V6單克隆抗體為北京中杉金橋生物科技有限公司產(chǎn)品，工作濃度均為1：100。染色判斷標(biāo)準(zhǔn)：按D.Horst等的標(biāo)準(zhǔn)。選擇5個(gè)具有代表性的高倍視野（10×40），以細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃或棕褐色為陽(yáng)性染色。不著色為陰性（-），著色為（+）。

1.3 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）：CD44V6 ELLSA試劑盒購(gòu)買北京金杉公司，實(shí)驗(yàn)方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，檢測(cè)血清中CD44V6的含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS13.00統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉx±s）表示，兩組數(shù)據(jù)間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；分類資料采用χ2檢驗(yàn)及校正χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

圖1 免疫組織化學(xué)檢測(cè)大腸癌組織中CD44V6的表達(dá)（400×）

圖2 Kaplan-Meier生存分析CD44V6表達(dá)水平與大腸癌患者預(yù)后關(guān)系

2.1 CD44V6在大腸癌患者組織和血清中的表達(dá)：CD44V6陽(yáng)性物質(zhì)定位于細(xì)胞膜和（或）細(xì)胞質(zhì)。大腸癌組織中CD44V6的陽(yáng)性表達(dá)率為63.16%（36/57）；在正常癌旁組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為8.77%（5/57）。在大腸癌組織中的表達(dá)高于正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9.722、P=0.002）。大腸癌患者血清中CD44V6水平為14.62±3.344ng/mL，而正常對(duì)照組血清中CD44V6水平為3.22±1.65ng/mL，大腸癌組水平高于對(duì)照組，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.523，P=0. 001）。

2.2 CD44V6在大腸癌組織和血清中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系：不同年齡、不同性別及不同腫瘤大小的患者CD44V6在大腸癌組織中的表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而不同腫瘤浸潤(rùn)深度、不同組織學(xué)分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及不同臨床病理分期者CD44V6在大腸癌組織中的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 CD44V6在大腸癌組織和血清中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 CD44V6在大腸癌患者組織中的表達(dá)與生存率的關(guān)系：在57例大腸癌患者中，5年后生存的患者34例，其中17例CD44V6表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為50.00%；死亡患者23例，其中19例CD44V6表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為82.61%。CD44V6陰性表達(dá)組平均生存時(shí)間為55.810 ±2.046，CD44V6陽(yáng)性表達(dá)組平均生存時(shí)間為49.361± 2.136，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.543，P=0.019），見圖2。

3 討 論

大腸癌是最常見的消化道惡性腫瘤之一，在惡性腫瘤中位居第3位。目前大腸癌的治療主要采用以手術(shù)為主結(jié)合放化療的綜合治療。但大腸癌的遠(yuǎn)期生存率并不高，其中肝轉(zhuǎn)移是治療失敗的主要原因之一［1］。隨著對(duì)大腸癌病因、發(fā)病機(jī)制的深入研究，人們發(fā)現(xiàn)了眾多大腸癌早期診斷和預(yù)后有意義的腫瘤標(biāo)志物，其中最廣泛的就是CD44V6。

CD44是一種廣泛分布的多功能、多結(jié)構(gòu)的細(xì)胞表面跨膜糖蛋白［2］，屬于未分類的細(xì)胞粘附分子。近年來研究發(fā)現(xiàn)，CD44能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞之間的黏附，并促進(jìn)與基底膜的浸潤(rùn)，同時(shí)影響細(xì)胞骨架蛋白的分布及構(gòu)型，增加癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移［3］。CD44V6是CD44的變異體，參與了腫瘤細(xì)胞的粘附，生長(zhǎng)調(diào)控，逃逸，分化以及游動(dòng)。CD44V6是一組跨膜糖蛋白，是細(xì)胞外基質(zhì)ECM家族中一個(gè)重要成員的受體，主要在大腸癌中表達(dá)［4］。CD44V6參與了很多重要的細(xì)胞活動(dòng)過程，如粘附，生長(zhǎng)調(diào)控，逃逸，分化以及游動(dòng)，也因此被認(rèn)為既是一種腫瘤抑制因子又是一種生長(zhǎng)侵襲促進(jìn)因子。Wielenga等［5］通過免疫組織化學(xué)法檢測(cè)直腸癌組織中的CD44V6的表達(dá)情況，結(jié)果表明CD44V6能夠提示癌癥的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，可以作為判斷大腸癌預(yù)后的重要指標(biāo)。王道榮等研究也表明在發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的大腸癌中CD44V6的表達(dá)水平要明顯增高。

本研究采用免疫組化法檢測(cè)大腸癌及癌旁組織中CD44v6蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，在57例大腸癌組織中CD44V6的表達(dá)率明顯高于其在癌旁組織中的表達(dá)。隨浸潤(rùn)程度的加重，CD44V6蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.034）；在腫瘤細(xì)胞的不同分化程度間，CD44V6的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P =0.001）。在臨床分期上，Dukes C期病例組的陽(yáng)性率高于Dukes A、B期病例組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0. 000）。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽(yáng)性表達(dá)率也高于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組（P=0.001）。以上結(jié)果提示CD44V6蛋白表達(dá)的大腸癌具有更強(qiáng)的侵襲力，易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，在大腸癌的臨床病理進(jìn)展和侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要的促進(jìn)作用。

［1］ Bourguignon L Y，Wong G，Earle C，et al.Hyaluronan-CD44v3 interaction with Oct4-Sox2-Nanog promotesmiR-302 expression leading to self-renewal，clonal formation，and cisplatin resistance in cancer stem cells from head and neck squamous cell carcinoma［J］.Biol Chem，2012，287 （39）：32800～32824.

［2］ Nurwidya F，Murakami A，Takahashi F，et al.Molecular mechanisms contributing to resistance to tyrosine kinase-targeted therapy for non-small cell lung cancer［J］.Cancer Biol Med，2012，9（1）：18～22.

［3］ Heider K H，Kiefer K，Zenz T，et al.A novel Fc-engineered monoclonal antibody to CD37 with enhanced ADCC and high proapoptotic activity for treatment of B-cellmalignancies［J］.Blood，2011，118（15）：4159～4168.

［4］ 高艷薇.喉和下咽鱗癌中CD44V6的表達(dá)及意義［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009，6（1）：76～78.

［5］ Bendardaf R，Algars A，Elzagheid A，et al.Comparison of CD44 expression in primary tumors and metastases of colorectal cancer［J］.Oncol Rep，2006，16（4）：741～746.

Expression and Clinical Significance of CD44V6 in Colorectal Cancer Tissues and Peripheral Blood

SONG Yunjun， JIANG Linhe， JIShiqiang， et al

（The Central Hospital of Chengde，Hebei Chengde 067000，China）

【Abstract】Objective：To investigate the expression of CD44V6 in colorectal cancer tissue and eripheral blood，to analyze the relationship between clinical pathological features and prognosis of patientswith colorectal cancer.M ethods：Serum samples in peripheral blood and tissue of colorectal cancer from 57 patientswere collected.The expression of CD44V6 was detected by immunohistochemicalmethod（SP）and enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）.The relationship between the clinical pathological characteristics and the prognosis of patientswith colorectal cancerwere analyzed.Results：The expression of CD44V6 was obviously higher （63.16%）in colorectal cancer tissue than that in the adjacent tissue（10.00%，P=0.002）.The expression levels of CD44V6 in serum was 14.62±3.344ng/mL，while thatwas3.22±1.65ng/mL in normal control group. There was significant difference between the two groups.There were relationship between the expression of CD44V6 and tumor depth，the degree of differentiation，lymph nodes and pathological degree.Kaplan-Meier survival analysis showed that the 5-year survival rate in CD44V7 high expression group was significantly higher than that in low expression group（P＜0.05）.Conclusions：CD44V67 is highly expressed in colorectal cancer tissues and serum，and may be an indicator for predicting the invasion and metastasis of colorectal cancer.

Colorectal cancer； CD44V6； Immunohistochemistry； ELISA

1006-6233（2016）08-1238-04

A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2016.08.003

河北省承德市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目，（編號(hào)：201601A016）