RBM3在胃癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)及其臨床意義

張維建 方瑤 蔣飛照

RBM3在胃癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)及其臨床意義

張維建 方瑤 蔣飛照

目的 探討RNA結(jié)合基序蛋白3（RBM3）在胃癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)及其臨床意義。方法 免疫組織化學(xué)法測定80例胃癌組織和癌旁正常組織及清掃淋巴結(jié)中RBM3表達(dá)量并予以比較。結(jié)果 RBM3在胃癌和正常胃黏膜中的陽性表達(dá)率分別為82.5%（66/80）和36.3%（29/80），兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。陽性淋巴結(jié)RBM3的表達(dá)率為78.4%（58/74），和胃癌組織的表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。胃癌RBM3的表達(dá)與胃癌腫瘤浸潤深度和腫瘤分化程度有關(guān)（P＜0.05），陽性淋巴結(jié)中RBM3的表達(dá)和原發(fā)腫瘤的分化程度有關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論 RBM3在胃癌組織和陽性淋巴結(jié)中高表達(dá)，與腫瘤細(xì)胞分化程度和（或）腫瘤浸潤深度有關(guān)，可以作為胃癌惡性度和預(yù)后的判定指標(biāo)。

胃癌 RBM3 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 臨床病理 預(yù)后

惡性腫瘤的無限制增殖導(dǎo)致細(xì)胞能量代謝異常和腫瘤微環(huán)境缺氧［1，2］，從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞某些基因和蛋白表達(dá)異常。本研究通過免疫組織化學(xué)方法檢測原發(fā)胃癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中RNA結(jié)合基序蛋白3 （RNA-binding motif protein 3，RBM3）的表達(dá)情況，探討是否有表達(dá)異常及其與臨床病理的關(guān)系。

1 臨床資料

1.1 一般資料 收集本院2014年6月至12月行胃癌根治手術(shù)并病理證實(shí)的80例胃癌患者的臨床病理資料。其中男52例，女28例；年齡37～85歲，平均年齡（62.5±24.6）歲。所有患者術(shù)前均未接受放療或化療等抗腫瘤治療。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑和方法 RBM3兔抗人多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司，SP試劑盒和即用型二氨基聯(lián)胺（DAB）顯色液購自北京中杉制品有限公司。胃癌組織和癌旁3cm正常組織及清掃的淋巴結(jié)各1份新鮮獲取后甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)4μm厚度切片。采用免疫組織化學(xué)SP試劑盒檢測，嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行。簡要步驟為常規(guī)脫蠟，枸櫞酸鹽緩沖液高壓修復(fù)，H2O2封閉，山羊血清室溫封閉，加入稀釋1：100的HIF-1α抗體或RBM3抗體孵育，磷酸鹽緩沖液洗滌，加酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物孵育，DAB染色，蘇木精復(fù)染，常規(guī)脫水透明和封片，顯微鏡觀察和攝照。

1.3 結(jié)果判定 RBM3主要表達(dá)于細(xì)胞核中，有棕褐色顆粒染色為陽性，表達(dá)強(qiáng)度按陽性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行判斷，取其平均值，分為4級：陽性細(xì)胞＜1%，為1分，1%～25%為2分，26%～75%為3分，≥75% 為4分。將1～2分記為陰性，3～4分記為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSSl3.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 原發(fā)胃癌和癌旁組織及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中RBM3的表達(dá) RBM3在胃癌和正常胃黏膜中的陽性表達(dá)率分別為82.5%（66/80）和36.3%（29/80），兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。80例獲取淋巴結(jié)標(biāo)本中，74例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，陽性淋巴結(jié)RBM3的陽性表達(dá)率為78.4%（58/74），和胃癌組織的表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。74例陽性淋巴結(jié)RBM3的表達(dá)相對原發(fā)腫瘤有所下調(diào)，但組間差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。典型病例胃癌陽性染色圖見圖1，淋巴結(jié)陽性染色圖見圖2。

圖1 胃癌陽性染色圖

圖2 淋巴結(jié)陽性染色

2.2 胃癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)RBM3的表達(dá)與臨床病理的關(guān)系 胃癌RBM3的表達(dá)與胃癌腫瘤浸潤深度和腫瘤分化程度有關(guān)（P＜0.05），與患者的性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和有無脈管癌栓無關(guān)（P＞0.05）。陽性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中RBM3的表達(dá)和原發(fā)腫瘤的分化程度有關(guān)（P＜0.05），與其他臨床病理指標(biāo)沒有相關(guān)性。見表1。

表1 胃癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)RBM3的表達(dá)與腫瘤臨床病理的關(guān)系

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)RBM3參與基因的穩(wěn)定性和表達(dá)調(diào)節(jié)，促進(jìn)腫瘤調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展［3，4］。RBM3在多種惡性腫瘤中表達(dá)上調(diào)，并且與腫瘤病理和預(yù)后有相關(guān)性［5，6］。在腫瘤發(fā)展過程中，RBM3的表達(dá)與細(xì)胞增殖程度呈正相關(guān)，隨著腫瘤增值活躍表達(dá)量顯著增加，在靜止或終末分化腫瘤細(xì)胞中低表達(dá)。Liv Jonsson等［7］研究發(fā)現(xiàn)伴有胃黏膜小腸化生的胃癌中RBM3的表達(dá)明顯高于無上皮化生的胃癌，同時(shí)發(fā)現(xiàn)RBM3的過表達(dá)和Ki-67表達(dá)有關(guān)，而Ki-67是細(xì)胞增殖標(biāo)志物，因此說明RBM3參與胃上皮細(xì)胞增值，可能和胃癌腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)胃癌腫瘤組織相對正常組織RBM3的陽性表達(dá)率明顯升高，且高中分化胃癌的RBM3表達(dá)與低或未分化的腫瘤的表達(dá)差異明顯，說明RBM3參與胃癌腫瘤細(xì)胞的增值和發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)在直腸癌、前列腺癌和乳腺癌等惡性腫瘤中，低RBM3表達(dá)量意味著腫瘤惡性程度高，預(yù)后差［5，6］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)RBM3的表達(dá)與腫瘤浸潤深度和腫瘤分化程度有關(guān)，而后兩者是衡量腫瘤惡性程度的指標(biāo)，因此RBM3也是胃癌惡性程度的參考因素之一。同時(shí)低RBM3表達(dá)的胃癌，腫瘤浸潤深度增加，腫瘤分化程度偏低，臨床病理分期相對較晚，與國內(nèi)外研究［7］結(jié)果相同，因此測定胃癌組織中RBM3表達(dá)量可以作為預(yù)后的判斷因素之一，同時(shí)RBM3低表達(dá)是胃癌預(yù)后差的獨(dú)立危險(xiǎn)因數(shù)［8］。但本研究暫無法統(tǒng)計(jì)術(shù)后生存率，有待于進(jìn)一步論證。

有報(bào)道［9］前列腺癌轉(zhuǎn)移灶的RBM3表達(dá)相對原發(fā)灶明顯下調(diào)，但本研究中，74例轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中，有58例RBM3表達(dá)陽性，陽性率為78.4%，和原發(fā)胃癌的陽性率相近，同時(shí)轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的RBM3表達(dá)量有所下調(diào)，但兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本組患者均未出現(xiàn)除淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移外的其他轉(zhuǎn)移病灶，因此不能評估肝臟或腹腔轉(zhuǎn)移腫瘤的RBM3表達(dá)情況。陽性淋巴結(jié)RBM3表達(dá)和腫瘤細(xì)胞分化程度有關(guān)，與腫瘤浸潤深度、腫瘤大小、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管癌栓無關(guān)，和原發(fā)腫瘤RBM3表達(dá)的相關(guān)因素有所不同，可能原因在于腫瘤浸潤深度是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)因素，具體原因有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

總之，RBM3作為細(xì)胞增殖和惡性腫瘤相關(guān)的分子，在胃癌和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中表達(dá)增加，與腫瘤分化程度和（或）腫瘤浸潤深度有關(guān)，其低表達(dá)意味著腫瘤的預(yù)后較差，因此可以作為腫瘤惡性程度和預(yù)后的指標(biāo)之一。

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Objective To explore the expressions of RNA-binding motif protein 3（RBM3）in gastric carcinoma and their clinical signifi cances. Method The expression of RBM3 were detected by immunohistochemical staining in 80 patients with gastric carcinoma. Results The positive expression rate of RBM3 in gastric carcinoma（82.5%）was signifi cantly higher than that in normal tissue（36.3%）. The positive expression rate of RBM3 in metastatic lymph node（78.4%）had no different with that in primary gastric carcinoma. The positive expression of RBM3 in gastric carcinoma was signifi cantly associated with the depth of invasion and tumor differentiation，The positive expression of RBM3 in metastatic lymph node was signifi cantly associated with tumor differentiation. Conclusion The expressions of RBM3 were higher in gastric carcinoma and metastatic lymph node than in normal tissue. They were correlated to tumor differentiation or tumor-infi ltrating，the detection of RBM3 can be used as biomarkers to predict tumor malignancy and prognosis of those patients.

Gastric carcinoma RNA-binding motif protein 3 Lymph node metastasis Clinicopathology Prognosis

浙江省溫州市科技計(jì)劃項(xiàng)目（Y20140369）

325000 溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院