血清Chemerin及IL-22水平在狼瘡性腎炎中的表達及其與疾病活動性的相關(guān)性

周璇 寇沛

血清Chemerin及IL-22水平在狼瘡性腎炎中的表達及其與疾病活動性的相關(guān)性

周璇 寇沛

目的 探討狼瘡性腎炎（LN）患者血清Chemerin及IL-22水平的表達及與疾病活動的相關(guān)性。方法 采用ELISA方法檢測30例LN患者（活動期17例，靜止期13例）和15例正常人群血清Chemerin及IL-22含量，并分析與其他相關(guān)指標間的相關(guān)性。結(jié)果 活動期LN患者Chemerin含量（139.55±21.36）μg/L、靜止期患者（132.03±20.14）μg/L均高于健康對照組（98.60±12.25）μg/L（P＜0.01）；但活動期LN患者和靜止期患者血清Chemerin含量差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。活動期LN患者血清IL-22含量［（328.37±15.86）pg/ml］顯著高于靜止期患者（239.18±16.75）pg/ml（P＜0.05）；且LN患者血清IL-22含量均顯著高于正常對照組（P＜0.01）?；顒悠谘錍hemerin與ESR和疾病活動指數(shù)（SLEDAI）評分呈正相關(guān)（r=0.431，r=0.557，P＜0.05）；與補體C3呈負相關(guān)（r=-0.473，P＜0.05）；IL-22水平與ESR和SLEDAI評分呈正相關(guān)（r=0.381，P＜0.05；r=0.658，P＜0.01）。結(jié)論 狼瘡性腎炎患者血清Chemerin及IL-22水平增高，且與疾病的活動度有關(guān)，并可作為監(jiān)測疾病嚴重程度和藥物療效的生物指標。

Chemerin IL-22 狼瘡性腎炎

狼瘡性腎炎（LN）是系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）累及腎臟所引起的一種免疫復合物性腎炎。Chemerin是一種脂肪細胞因子，通過與受體ChemR23結(jié)合對樹突細胞和巨噬細胞發(fā)揮免疫趨化作用［1］。其與炎癥標記物如超敏C反應(yīng)蛋白、IL-6及TNF-α等密切相關(guān)［2，3］。在多種自身免疫炎癥性疾病存在Chemerin的異常表達［4，5］。IL-22是IL-10細胞因子家族成員之一，其異常表達可見于多種疾病如類風濕關(guān)節(jié)炎等。研究發(fā)現(xiàn)，IL-22基因拷貝數(shù)突變是SLE發(fā)病的危險因子［6］。作者通過檢測LN患者與正常人群外周血中Chemerin和IL-22水平，分析兩者與LN臨床及血清學指標以及疾病活動指數(shù)的相關(guān)性，探討兩者在LN發(fā)病中的作用。

1 臨床資料

1.1 一般資料 2013年6月至2015年5月武漢市第一醫(yī)院及武漢總醫(yī)院住院及門診LN患者30例，均符合1982年美國風濕病學會（ARA）修訂的SLE診斷標準，均持續(xù)性蛋白尿＞0.5g/24h，鏡下血尿、管型尿和（或）腎功能衰竭。所有患者在B超引導下行經(jīng)皮腎穿刺活檢。其中男10例，女20例，平均年齡28.9歲。所有LN患者按Bombardier等SLE疾病活動指數(shù)（SLEDAI），分為活動期17例、靜止期13例。所有患者近＜4周未服用糖皮質(zhì)類固醇激素、免疫抑制劑和血管擴張劑類藥物，無感染表現(xiàn)。同期健康體檢者15例為對照組，其中男6例，女9例；平均年齡27.8歲。

1.2 方法 （1）標本采集：收集LN患者24h尿液，記錄其體積并留取10ml，同時空腹采集靜脈血5ml，2500r/min，離心5min，留取尿液上清液和分離血清，置-70℃冰箱保存?zhèn)溆?。?）血清Chemerin檢測：采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血清Chemerin。人Chemerin試劑盒購自美國RayBiotech公司，操作嚴格按照說明書進行。分別設(shè)空白孔、標準孔和待測樣品孔。加樣，將待測樣品各100μl依次加入96孔板中，用封板膜封板后置37℃溫育2.5h。每孔加滿洗滌液洗滌，靜置30s后棄去，每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。用封板膜封板后置37℃溫育1h。再次洗滌，然后每孔加入顯色劑A100μl，室溫下反應(yīng)45min后再加入顯色劑B100μl，室溫下反應(yīng)30min。每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)。使用酶標儀（450nm）測量各孔的吸光度（OD值）。通過標準曲線計算樣品濃度。（3）IL-22水平檢測：采用ELISA檢測血清IL-22。IL-22試劑盒由北京易科攀博公司提供，操作步驟嚴格按說明書進行。顯色后即刻用酶標儀450nm波長檢測OD值。（4）臨床相關(guān)指標檢測： 采用全自動生化分析儀檢測24h尿蛋白、血清肌酐（Cr），血清補體C3采用單向免疫擴散法，ESR采用魏氏法測定。

1.3 統(tǒng)計學方法 應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示，組間比較采用方差分析，相關(guān)分析采用spearman檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 LN患者活動期和靜止期血清Chemerin和IL-22水平 活動期LN患者Chemerin含量（139.55±21.36）μg/L、靜止期患者（132.03±20.14）μg/L均高于健康對照組（98.60±12.25）μg/L（P＜0.05）；但活動期LN患者和靜止期患者血清Chemerin含量差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）?；顒悠贚N患者血清IL-22含量（328.37±15.86）pg/ml顯著高于靜止期患者（239.18±16.75）pg/ml（P＜0.05）；且LN患者血清IL-22含量均顯著高于正常對照組（P＜0.01）。見表1。

表1 LN患者及正常對照組血清Chemerin和IL-22水平比較（±s）

表1 LN患者及正常對照組血清Chemerin和IL-22水平比較（±s）

注：與正常對照組比較，*P＜0.01；與靜止期比較，#P＜0.05

組別nChemerin（μg/L）IL-22（pg/ml）LN組活動期17139.55±21.36*328.37±15.86*# LN組靜止期13132.03±20.14*239.18±16.75*正常對照組1598.60±12.25156.29±11.28

2.2 LN各期患者實驗室指標的比較 LN活動期患者ESR和補體C3、SLEDAI評分與靜止期比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），血Cr、24h尿蛋白比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

表2 LN患者各組臨床與實驗室指標的比較（±s）

表2 LN患者各組臨床與實驗室指標的比較（±s）

參數(shù)LN活動期組LN靜止期組P值年齡（歲）29.3±3.728.1±2.90.175 ESR（mm/h）69.45±27.3235.24±16.610.001補體C3（g/L）62.12±51.24119.42±47.530.001 Cr（μmol/L）202.13±67.38186.36±53.220.236 24h尿蛋白（g/24h）2.126±0.5572.045±0.8120.103 SLEDAI評分11.8±2.91.9±1.370.001

2.3 血清Chemerin和IL-22水平與其他臨床指標的相關(guān)性 活動期血清Chemerin與ESR和SLEDAI評分呈正相關(guān)（r=0.431，r=0.557，P＜0.05）；與補體C3呈負相關(guān)（r=-0.473，P＜0.05）；與血Cr、24h尿蛋白無相關(guān)性；活動期IL-22水平與ESR和SLEDAI評分呈正相關(guān)（r=0.381，P＜0.05；r=0.658，P＜0.01）；與Cr、24h尿蛋白、補體C3均無相關(guān)。見表2。

表3 活動期LN患者血清Chemerin和IL-22水平與臨床指標的相關(guān)性

3 討論

Chemerin是新發(fā)現(xiàn)的脂肪細胞因子。2003年Wittamer等［7］從卵巢癌患者的腹腔積液中純化出來，并被證明是G蛋白耦聯(lián)受體ChemR23的天然配體。研究證實Chemerin通過其受體ChemR23發(fā)揮對專職抗原提呈細胞（樹突狀細胞和巨噬細胞）的募集和遷移作用，參與組織免疫和炎癥應(yīng)答。當機體受到損傷、炎癥侵襲時，多種蛋白酶可使前體Chemerin活化，與ChemR23特異性結(jié)合，促使巨噬細胞和未成熟的樹突狀細胞到達炎癥部位［1］。Berg等［2］研究發(fā)現(xiàn)，Chemerin受刺激后可進一步擴增炎癥信號，導致炎癥因子和基質(zhì)金屬蛋白酶的釋放。Chemerin可能在天然免疫與獲得免疫的聯(lián)系中起到橋梁作用。

近年來對Chemerin的研究多集中于糖尿病、代謝綜合征、動脈粥樣硬化等疾病，而在一些自身免疫性疾病則研究較少。研究發(fā)現(xiàn)在銀屑病及系統(tǒng)性紅斑狼瘡皮膚受累患者皮損處的真皮層可見Chemerin的高表達［8，9］，在狼瘡腎炎患者的腎組織管狀上皮細胞及淋巴管內(nèi)皮細胞周圍Chemerin表達增高［10］。作者通過酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測Chemerin在LN患者及正常人外周血中的表達情況，結(jié)果顯示LN患者外周血中Chemerin的濃度顯著高于正常對照組，提示Chemerin參與LN發(fā)病。LN活動期外周血Chemerin水平高于靜止期，提示外周血Chemerin表達水平與病情活動相關(guān)。ESR是臨床最常用的評價病情活動的炎癥指標。SLEDAI評分是評估SLE病情活動和嚴重性的國際通用標準之一。其能較好的反映SLE疾病的病情程度。補體C3在SLE疾病中降低，與SLE病情活動存在相關(guān)性，可作為監(jiān)測疾病活動的參考指標。本資料顯示，LN患者外周血中Chemerin水平與ESR、SLEDAI評分呈正相關(guān)，與補體C3呈負相關(guān)。故LN患者外周血中Chemerin表達水平與炎癥指標及LN病情活動程度密切相關(guān)，可作為評價LN病情活動的一個指標。

IL-22是T細胞自分泌和旁分泌的細胞因子，參與多種自身免疫性疾病，和腫瘤的免疫耐受有關(guān)，如銀屑病，炎癥性腸病等［11］。IL-22分泌過多，可以使B細胞自發(fā)性過度興奮，從而直接導致由漿細胞產(chǎn)生的自身抗體增多，循環(huán)免疫復合物堆積，引起組織和器官損傷，這在SLE發(fā)病機制中可能起重要作用。

研究報道，在SLE患者血清中IL-22的水平顯著低于正常人［12］，Cheng等［13］認為IL-22水平與SLEDAI評分呈正相關(guān)。Qin等［14］研究發(fā)現(xiàn)分泌IL-22的CD4+T細胞的數(shù)量與SLE患者SLEDAI評分呈顯著正相關(guān)。而Pan等［15］認為活動期SLE患者與非活動期SLE患者間IL-22水平無差異，IL-22水平與SLEDAI評分無相關(guān)性。目前研究認為SLE患者外周血IL-22水平下降，但IL-22與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的活動性關(guān)聯(lián)仍存在爭議。因此IL-22是否參與SLE發(fā)病，其在SLE受損組織中局部表達如何，目前并不清楚。本資料顯示，活動期LN患者血清IL-22含量顯著高于靜止期患者，且LN患者血清IL-22含量均顯著高于正常對照組?；顒悠贗L-22水平與ESR和SLEDAI評分呈正相關(guān)，與Cr、24h尿蛋白、補體C3均無相關(guān)。趙令等［16］研究認為，與健康對照組比較，SLE患者血漿中IL-17和IL-22的表達水平明顯升高（P＜0.05）；SLE患者IL-22+CD4+T和IL-22-Th17細胞的比例隨SLEDAI的升高而升高。這些研究結(jié)果提示細胞因子IL-22可能在SLE的發(fā)病中起致病性作用，并可作為監(jiān)測疾病嚴重程度的生物指標。

總之，LN患者外周血Chemerin和IL-22水平較正常對照人群明顯增高，且與炎癥指標和疾病活動度明顯相關(guān)，提示Chemerin和IL-22在LN發(fā)病中起重要的作用。

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Objective To investigate the relationship between level of serum Chemerin and IL-22 and disease activity in lupus nephritis patients. Methods 30 patients with lupus nephritis were enrolled in the study（active stage 17 cases，resting stage 13 cases），and 15 healthy individuals as a normal control. Chemerin and IL-22 levels in serum were examined with enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. And their relations to other related indicators at different stages were studied. Results Serum Chemerin level in active patients with LN（139.55±21.36）μg/L and resting patients（132.03±20.14）μg/Lwere signifi cantly higher than that of healthy controls（98.60±12.25）μg/L（P＜0.05），but there was no difference in active stage and resting stage（P＞0.05）. serum IL-22 level in active patients with LN（328.37±15.86）pg/mL was signifi cantly higher than that of resting patients（239.18±16.75）pg/mL（P＜0.05），and serum IL-22 level in patients with LN was signifi cantly higher than that of healthy controls（P＜0.01）；The level of serum Chemerin in active patients with LN was positively correlated with ESR and SLEDA score（r=0.431，r=0.557，P＜0.05），and were negatively correlated with C3 levels（r=-0.473，P＜0.05）.The level of serum IL-22 in active patients with LN were positively correlated with ESR and SLEDA score（r=0.381，P＜0.05；r=0.658，P＜0.01）.Conclusion The levels of serum Chemerin and IL-22 expression in patients with LN are high，and positively correlated with disease activity，and can be used as a monitoring disease severity and effi cacy of biological indicators.

Chemerin IL-22 lupus nephritis

·診治分析·

430070 廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院（周璇）

430033 湖北省武漢市第一醫(yī)院（寇沛）