血清Chemerin水平與甲狀腺癌臨床病理特征及預后的相關性研究

曹芹 崔捷 劉衛(wèi)平

血清Chemerin水平與甲狀腺癌臨床病理特征及預后的相關性研究

曹芹 崔捷 劉衛(wèi)平

目的 觀察甲狀腺癌患者血清脂肪細胞因子（Chemerin）的水平變化，并探討其與甲狀腺癌臨床病理特征及預后的相關性。方法 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）測定55例甲狀腺癌患者、50例甲狀腺良性腫瘤患者及20例健康對照患者的血清Chemerin水平。分析其表達水平與臨床病理特征和生存預后的相關性。結果 血清Chemerin水平甲狀腺癌組（2302.64±235.32）ng/L，良性甲狀腺腫瘤組（1643.82±204.65）ng/L，健康對照組（1013.17±144.52）ng/L，三組比較差異有統(tǒng)計學意義（F=14.156，P＜0.05）。血清Chemerin在甲狀腺癌中的表達與TNM分期、淋巴結轉移有關（P＜0.05）；術后復發(fā)患者血清Chemerin水平（2562.73±251.35）ng/L明顯高于未復發(fā)患者（2101.32±244.25）ng/L，（P=0.0013）。Chemerin低表達組患者生存時間明顯高于高表達組（P=0.0001）；多因素分析顯示，Chemerin水平和TNM分期是影響甲狀腺癌生存的獨立預后因素。結論 甲狀腺癌患者外周血Chemerin水平顯著升高，與術后復發(fā)和生存預后密切相關，可能成為指導治療和判斷復發(fā)和預后的一個參考指標。

脂肪細胞因子 甲狀腺癌 預后

甲狀腺癌約占所有癌癥的1%，各種類型的甲狀腺癌以乳頭狀腺癌最多見，可發(fā)生于＜10歲兒童至百歲老人。甲狀腺結節(jié)包括結節(jié)性甲狀腺腫、腺瘤等，其發(fā)病率約為4%。Chemerin是新發(fā)現(xiàn)的一種刺激先天免疫系統(tǒng)的脂肪細胞因子，與機體炎癥、免疫、代謝綜合征、肥胖等有關［1］。Wittamer等［2］認為其能通過與其受體ChemR23結合對樹突細胞和巨噬細胞發(fā)揮免疫趨化作用。研究發(fā)現(xiàn)，Chemerin可能通過多種機制參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展［3，4］。作者通過檢測Chemerin在甲狀腺癌患者外周血中的表達，分析其與甲狀腺癌臨床病理特征及預后的相關性，探討Chemerin在甲狀腺腫瘤疾病進展和預后判斷的價值。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2011年4月至2015年5月手術或穿刺活檢病理診斷為甲狀腺癌患者55例，術前均未接受過放療、化療等相關治療。臨床資料包括患者年齡、性別、既往史、用藥史、病理學資料和隨訪資料等。55例中男 19例，女36例；年齡32～73歲，中位年齡51.5歲。甲狀腺乳頭狀癌（PTC）37例，濾泡狀癌（FEC）8例，未分化癌（MTC）6例，髓樣癌（UTC）4例。根據(jù)國際抗癌協(xié)會聯(lián)盟（UICC）和美國癌癥聯(lián)合協(xié)會（AJCC2002）對甲狀腺癌的TNM 分期，分為Ⅰ期22例、 Ⅱ期13例、Ⅲ期12例、Ⅳ期8例。甲狀腺腫瘤患者50例中男15 例，女35例；年齡30～76歲，中位年齡53.4歲。結節(jié)性甲狀腺腫26例、甲狀腺腺瘤24例。另選同期健康體檢者20例為對照組，其中男10例，女10例；年齡35～70歲，中位年齡47.6歲。

1.2 方法 （1） 標本采集：空腹采集靜脈血5ml，肝素抗凝，于4℃條件下2500r/min，離心10min，分離血清，取上清液裝于EP管中，置-70℃冰箱保存，集中待測。（2）血清Chemerin檢測：采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血清Chemerin。人Chemerin試劑盒購自美國R&D公司，操作嚴格按照說明書進行。分別設空白孔、標準孔和待測樣品孔。采用酶標儀（450nm）測量各孔的吸光度（OD值）。通過標準曲線計算樣品濃度。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示，組間比較采用方差分析，采用Kaplan-Meier 法繪制生存曲線，生存曲線的比較采用Log-rank 檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組血清Chemerin水平比較 血清Chemerin水平甲狀腺癌組（2302.64±235.32）ng/L，良性甲狀腺腫瘤組（1643.82±204.65）ng/L，健康對照組（1013.17±144.52）ng/L，三組比較差異有統(tǒng)計學意義（F=14.156，P＜0.05）。

2.2 甲狀腺癌患者血清Chemerin水平與臨床病理特征的關系 血清Chemerin在甲狀腺癌中的表達與患者年齡、性別、病理類型、分化程度差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；而與TNM分期、淋巴結轉移差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05） 見表1。

表1 甲狀腺癌患者血清Chemerin水平與臨床病理特征的關系（s）

表1 甲狀腺癌患者血清Chemerin水平與臨床病理特征的關系（s）

參數(shù)n血清Chemerin水平（ng/L）P值年齡＜45歲342235.17±243.620.235 ≥45歲212389.28±226.37性別男性192246.31±251.320.587女性362368.43±231.79病理類型PTC372176.58±262.020.648 FEC82243.23±259.39 MTC62296.78±249.52 UTC42393.27±254.31分化程度高分化272267.18±246.320.739中分化132395.18±257.33低分化152235.97±272.54 TNM分期Ⅰ期221875.24±231.760.0164Ⅱ期132115.78±242.59Ⅲ期122538.43±257.44Ⅳ期82843.27±261.03淋巴結轉移有202765.21±246.520.0041 無352247.33±239.83

2.3 甲狀腺癌患者血清Chemerin水平與術后復發(fā)的相關性 45例術后患者中，19例（42.2%）患者在隨訪過程中腫瘤復發(fā)。復發(fā)患者血清Chemerin水平（2562.73±251.35）ng/L明顯高于未復發(fā)患者（2101.32±244.25）ng/L（P=0.0013）。

2.4 血清Chemerin水平與患者生存預后的相關性 以2300ng/L為界（平均水平取整數(shù)），將55例甲狀腺癌患者分為Chemerin高水平組（＞2300ng/L，n=18）和低水平組（≤2300ng/L，n=27）。Chemerin高水平組生存時間（29.38個月），明顯低于Chemerin低水平組患者（46.67個月）（P=0.001）。見圖1。

圖1 Chemerin不同表達水平分組患者生存曲線

2.5 甲狀腺癌患者預后的多因素分析 將患者年齡、病理類型、TNM分期、分化程度Chemerin水平等因素全部納入COX回歸模型進行多因素分析，采用前進法逐步篩選因子。結果顯示，TNM分期及Chemerin水平是影響甲狀腺癌預后的獨立危險因素。見表2。

表2 甲狀腺癌患者預后的多因素分析

3 討論

Chemerin是一種脂肪細胞因子，在脂肪組織中高表達，調(diào)節(jié)脂肪細胞分化。人類Chemerin編碼基因全長3289bp，位于染色體7q36.1，由3個內(nèi)含子和4個外顯子組成。在人體多種組織如脂肪組織、肺、肝臟、胰腺、卵巢、皮膚等均有表達［5］。正常狀態(tài)下，Chemerin以前體Chemerin形式分泌到細胞外，炎癥早期通過有關蛋白酶激活，成為有活性的Chemerin，與其配體ChemR23一起對抗原遞呈細胞有征募和遷移作用，使未成熟樹突狀細胞和NK細胞向炎癥部位聚集。因此，Chemerin在天然性免疫和被動性免疫之間起到重要的橋梁作用［6］。研究發(fā)現(xiàn)，在骨關節(jié)炎、胰腺炎等炎性疾病患者中血清Chemerin水平增高，表明炎癥局部反應增強［7，8］。

目前有關Chemerin在腫瘤中的表達及其作用機制的研究較少，主要集中在胃癌、肝癌、肺癌等，尚無甲狀腺癌的相關研究。其Chemerin主要是通過其活化的配體ChemR23，趨化未成熟樹突狀細胞和巨噬細胞到達腫瘤部位，參與腫瘤的細胞免疫過程。Wang等［9］研究發(fā)現(xiàn)，在口腔鱗狀細胞癌中，Chemerin的過度表達與腫瘤血管生成和臨床療效不佳有關。曲曉翰等［10］研究認為，肺癌患者外周血Chemerin水平較正常人明顯增高，具有作為肺癌診斷指標的潛力。殷宗寶等［11］研究顯示，bag-1和Chemerin的靈敏度與CEA在肺癌的診斷靈敏度相似，兩者聯(lián)合檢測診斷早期肺癌漏診率少，有較高的臨床意義。陳立武等［12］研究認為，胃癌患者血清Chemerin水平明顯升高，與腫瘤的TNM分級有關，可能成為診斷胃癌發(fā)病和預測胃癌進展程度的重要血清標記物。Wang等［13］研究認為，胃癌患者血清Chemerin水平明顯高于健康者（P＜ 0.01）。血清Chemerin水平增高與臨床疾病進展和非腸型胃癌相關。Chemerin增加胃癌細胞的侵襲性。Chemerin能誘導P38和ERK1/2 MAPKs磷酸化和上調(diào)VEGF、MMP-7和IL - 6的表達。上述研究結果表明，血清Chemerin水平增高與腫瘤的進展密切相關。

本資料結果顯示，甲狀腺癌患者的血清Chemerin水平顯著高于良性甲狀腺腫瘤和正常人群，這可能與癌組織局部免疫作用增強有關。Zhang等［14］采集196例胃癌術前患者血清，檢測Chemerin水平明顯增高。表明腫瘤組織局部細胞免疫反應增強，產(chǎn)生趨化因子，局部樹突狀細胞和巨噬細胞增多。此外腫瘤組織的局部炎癥反應使前體Chemerin活化，繼而導致釋放入血液的Chemerin濃度增加。Chemerin高水平表達與胃癌患者長期預后不良和生存有關，可能是胃癌患者生存預后的生物標志物［15］。Lin等［16］研究結果顯示，在124例肝癌患者中，Chemerin蛋白在腫瘤組織中的表達顯著低于腫瘤旁肝臟組織。Chemerin表達水平與腫瘤大小、組織學分級和樹突狀細胞及NK細胞侵襲有關。生存分析顯示，低水平Chemerin表達與預后不良有關，COX回歸分析顯示Chemerin水平是影響預后的獨立因素。表明Chemerin在肝癌的發(fā)展過程中起到重要的作用，同時也表明血清Chemerin水平在腫瘤中的作用還存在著爭議的地方。

本資料顯示，術后復發(fā)甲狀腺癌患者中Chemerin水平明顯高于無復發(fā)患者。血清Chemerin水平隨著TNM分期的增加而增加，且淋巴結轉移患者血清Chemerin水平高于無淋巴結轉移患者。這些指標均與復發(fā)和預后相關，表明隨著腫瘤的進展及局部免疫反應的增強，甲狀腺癌患者的血清Chemerin水平也明顯增高。血清Chemerin水平增高在甲狀腺癌的進展和復發(fā)轉移中起到重要作用。為評價血清Chemerin水平對預后的作用，作者對血清Chemerin水平和術后復發(fā)及生存率之間的相關性進行分析，發(fā)現(xiàn)復發(fā)患者血清Chemerin高水平組明顯高于低水平組。這表明，血清Chemerin水平與甲狀腺癌復發(fā)密切相關，可以作為術后復發(fā)轉移的預測指標。在生存預后分析中，血清Chemerin低水平組的生存時間比高水平組明顯延長。為進一步驗證血清Chemerin水平在甲狀腺癌生存預后中的作用，作者采用COX回歸模型進行多因素分析，發(fā)現(xiàn)TNM分期及Chemerin水平是影響甲狀腺癌預后的獨立危險因素。因此，聯(lián)合應用Chemerin水平和TNM分期可為甲狀腺癌復發(fā)和預后的預測提供更為準確的信息。

目前關于外周血Chemerin的來源及其病理學作用仍然存在爭議，其促進腫瘤發(fā)展的具體機制仍不明確，本資料證實血清Chemerin水平對甲狀腺癌的復發(fā)和預后有一定的預測作用，但由于該研究樣本量小，屬于單中心橫斷面研究，因此仍需大樣本量、多中心的前瞻性研究來進一步證實。

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Objective To investigate the change of serum Chemerin levels and its relation with clinicopathological characteristics in papillary thyroid carcinoma patients. Methods The expression of Chemerin was determined by ELISA in 55 papillsry carcinoma cases，50 benign thyroid tumor cases and 20 normal persons. The association of serum Chemerin level with the clinicopathological charactersistics，overall survival and prognosis were analyzed. Result s The level of Chemerin was the highest in papillary thyroid carcinoma cases ［（2302.64±235.32）ng/L］，higher in benign throid tumors［（1643.82±204.65）ng/L］，and low in normal persons［（1013.17±144.52）ng/L］，showing signifi cant difference among three groups （F=14.156，P＜0.05）. The serum level of Chemerin in papillary thyroid carcinoma were positively correlated with TNM stage and lymph node metastasis（P＜0.05）.A signifi cantly higher Chemerin level was found in patients with recurrence during the follow-up ［（2562.73±251.35）ng/L］compared with those without recurrence［（2101.32±244.25）ng/L，（P=0.0013）］. A higher serum Chemerin level was signifi cantly associated with a poorer overall survival （P=0.0001）.Multivariate analysis revealed that Chemerin level and TNM stage were independent predictors for overall survival. Conclusion The expression of Chemerin in patients with papillary thyroid carcinoma is increased. Chemerin may be used as a reference indicator to judge direction therapy and to predict the reccurrence and prognosis.

Chemerin Papillary thyroid carcinoma Prognosis

100096 中國人民解放軍61741部隊門診部（曹芹）

100029總參謀部大氣環(huán)境研究所衛(wèi)生所（崔捷）

100091中國人民解放軍總參謀部總醫(yī)院（劉衛(wèi)平）