金銀花提取物的體外抑菌試驗(yàn)

阮武營(yíng)，張俊婷，黃宗梅，劉守川

（1.開封市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南　開封　470002；2.開封市第二人民醫(yī)院；3.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)；4.洛陽(yáng)普萊柯生物工程股份有限公司）

金銀花提取物的體外抑菌試驗(yàn)

阮武營(yíng)1，張俊婷2，黃宗梅3，劉守川4

（1.開封市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南開封470002；2.開封市第二人民醫(yī)院；3.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)；4.洛陽(yáng)普萊柯生物工程股份有限公司）

分別用藥敏片法、管碟法測(cè)定金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物對(duì)供試菌種的抑菌效果。結(jié)果表明：金銀花黃酮類、綠原酸類提取物對(duì)鴨巴氏桿菌、豬鏈球菌抑菌效果明顯，對(duì)豬沙門氏菌抑菌效果次之。

金銀花；黃酮類；綠原酸類；抑菌效果

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，特別是化學(xué)藥物，面臨著越來越多的問題，例如，毒副作用、抗藥性、病癥不能徹底根除等等。隨著人們醫(yī)療保健意識(shí)的增強(qiáng)，人們?cè)絹碓阶非缶G色食品，純天然制品。“回歸自然”，崇尚天然藥物，已經(jīng)成為一種世界性的潮流。金銀花的主要化學(xué)成分是綠原酸、異綠原酸、白果酸、咖啡酸、本樨草素、木樨草素-7-葡萄甙、β-谷甾醇、豆甾醇、p-谷甾醇-D-G甙、豆甾醇-D-D甙及揮發(fā)油等，這些化學(xué)成分均具有強(qiáng)的抗菌作用。據(jù)報(bào)道，銀花醇浸液對(duì)金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、肺炎桿菌、腦膜炎雙球菌、傷寒桿菌、副傷寒桿菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、變形桿菌、百日咳桿菌、綠膿桿菌、結(jié)核桿菌、霍亂桿菌等多種革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌均有一定的抑菌作用，服用后，具有無毒、無害、無殘留、無耐藥性的優(yōu)勢(shì)。試驗(yàn)分別采用了藥敏片法、管碟法來測(cè)定金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物對(duì)鴨巴氏桿菌、豬鏈球菌、豬沙門氏菌的抑菌環(huán)大小，來分析判定黃酮類、綠原酸類的抑菌效果，為應(yīng)用于臨床實(shí)踐，預(yù)防和治療幾種常見的細(xì)菌性疾病提供理論依據(jù)，現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下：

1　材料與方法

1.1黃酮類、綠原酸類

金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物由河南省動(dòng)物性食品安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，藥品均為無菌。

1.2供試菌種

豬鏈球菌（Porcine streptococcus）、豬沙門氏菌（PrcineSalmonella）、鴨巴氏桿菌（Duck pasteurella）均系開封市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心保存菌種。

1.3藥敏片法測(cè)定金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物對(duì)供試菌的抑菌作用

首先取15 ml瓊脂培養(yǎng)基倒入無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，冷卻后，將各種供試菌懸液取1 ml注入培養(yǎng)基內(nèi)搖均勻，再用酒精棉球吸取多余的菌懸液，制成含菌平板，然后用無菌鑷子夾取含有黃酮類、綠原酸類的藥敏片貼在含菌平板上，每皿貼4片，每菌作3次重復(fù)，細(xì)菌培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)24 h，測(cè)量藥敏片周圍抑菌圈直徑大小，比較抑菌效果。

1.4管碟法測(cè)定金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物對(duì)供試菌的抑菌作用

首先取15 ml瓊脂培養(yǎng)基倒入無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，冷卻后，將各種供試菌懸液取1 ml注入培養(yǎng)基內(nèi)搖均勻，再用酒精棉球吸取多余的菌懸液，制成含菌平板，然后用無菌鑷子夾無菌牛津杯放在含菌平板上，用鑷子輕按一下，每皿放3個(gè)牛津杯，每菌作3次重復(fù)，加入200 μl金銀花提取液（原液含量為200 μg/ml），放在4℃冰箱擴(kuò)散24 h后，在細(xì)菌培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)24 h，測(cè)量抑菌圈直徑大小，比較抑菌效果。

2　結(jié)果與分析

2.1藥敏片法測(cè)定金銀花黃酮類、綠原酸類提取物對(duì)供試菌種的抑菌效果

金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物對(duì)鴨巴氏桿菌、豬鏈球菌有明顯的抑菌作用；對(duì)豬沙門氏菌抑制作用次之；綠原酸類對(duì)細(xì)菌的抑菌作用略強(qiáng)于黃酮類對(duì)細(xì)菌的抑菌作用。結(jié)果見表1。

表1　藥敏片法測(cè)定金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物對(duì)供試菌種的抑菌環(huán)直徑（mm）

2.2管碟法測(cè)定金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物對(duì)供試菌種的抑菌效果

試驗(yàn)結(jié)果與藥敏片法基本一致，金銀花的黃酮類，綠原酸類提取物對(duì)鴨巴氏桿菌、豬鏈球菌有明顯的抑菌作用；對(duì)豬沙門氏菌抑制作用次之；綠原類對(duì)細(xì)菌的抑菌作用略強(qiáng)于黃酮類對(duì)細(xì)菌的抑菌作用，結(jié)果見表2。

表2　管碟法測(cè)定金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物對(duì)供試菌種的抑菌環(huán)直徑（mm）

3　小結(jié)與討論

金銀花的化學(xué)成分主要有黃酮類化合物、木樨草素、綠原酸、異綠原酸和一些揮發(fā)油。其中抗菌有效成分以綠原酸和異綠原酸以及黃酮類化合物為主?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，植物金銀花內(nèi)含有木樨草素、肌醇、皂貳IV等有效成分，因其含有大量的還原基團(tuán)，所以對(duì)多種致病菌具有抑制作用。抑菌試驗(yàn)證明，中藥金銀花提取物對(duì)巴氏桿菌、鏈球菌、沙門氏菌具有良好的抗菌活性，從各菌種的抑菌環(huán)大小來看，金銀花黃酮類、綠原酸類提取物對(duì)鴨巴氏桿菌、豬鏈球菌抑菌效果明顯，對(duì)豬沙門氏菌抑菌效果次之。標(biāo)準(zhǔn)綠原酸對(duì)供試菌周圍無抑菌環(huán)，經(jīng)查資料可知，金銀花提取物中抑菌成分除綠原酸和異綠原酸不耐高溫外，其他抑菌成分能耐高溫，因此，可能是由于保存或干燥過程中破壞了其有效成分。綠原酸類、黃酮類制成的藥敏片，用無真空干燥的比用真空干燥的抑菌效果明顯，說明溫度對(duì)綠原酸類、黃酮類有影響。

臨床資料表明，金銀花提取物對(duì)多種細(xì)菌所致的感染性疾病有良好的治療效果。現(xiàn)代試驗(yàn)研究顯示，金銀花提取物能抑制細(xì)菌的糖、蛋白質(zhì)、核酸代謝，抑制細(xì)菌繁殖，提高巨噬細(xì)胞、中性白細(xì)胞吞噬功能。該試驗(yàn)所用金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物具有清熱解毒作用，對(duì)試驗(yàn)提供的常見菌種都有不同程度的抑菌作用，可為預(yù)防和治療幾種常見的細(xì)菌性疾病提供理論依據(jù)，如傳染性漿膜炎是由鴨疫巴氏桿菌（PA）引起鴨或其他禽類的一種敗血性疾病，此病對(duì)2～3周齡的雛鴨易感性很強(qiáng)，感染率可達(dá)90%，死亡率在5%～8%，是造成養(yǎng)鴨業(yè)經(jīng)濟(jì)損失最主要的疾病之一；沙門氏菌引起的豬副傷寒，是腸道的重要致病菌，其侵害腸道，可引起腸炎。該試驗(yàn)結(jié)果也可為開發(fā)金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物作為治療鴨疫巴氏桿菌、豬副傷寒、豬鏈球菌感染的藥物提供基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)。

［1］劉輝，侯殿東.抗菌織品抑菌效果檢測(cè)及其方法研究［J］.中國(guó)消毒學(xué)雜志，2006，23（2）：143

［2］劉穎熠譯，王嘉德校.可填壓復(fù)合樹脂表面抗菌性能［J］.原載Quintessence Int，2004，35（5）；189-193（英文）

［3］林麗英，梁藝.濕熱片抑菌實(shí)驗(yàn)［J］.中藥材，2003，26 （lO）：748

［4］國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1998.1791-1794.

［5］Fayer R，Santin M，Xiao L.Cryptosporidium bovin.sp. （Apicomplexa：Cryptosporidiidae）in cattle（Bos taurus）［J］. J Parasitol.2005，91（3）：624～629.

S853.74

B

1004-5090（2016）07-0012-02

2016-05-13）