N-cadherin、E-cadherin及p63在宮頸癌中的表達及相關性

楊宏櫻

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·論著·

N-cadherin、E-cadherin及p63在宮頸癌中的表達及相關性

楊宏櫻

目的研究N-cadherin、E-cadherin以及p63在宮頸癌中的表達及其與臨床病理因素之間的相關性。方法采用免疫組化檢測正常宮頸15例、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)30例、50例宮頸癌組織中的N-cadherin、E-cadherin及p63的表達。結果N-cadherin在正常宮頸組織、CIN以及宮頸癌中的陽性表達率逐漸升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。而E-cadherin和p63在正常宮頸組織、CIN以及宮頸癌中的陽性表達率則逐漸降低差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，N-cadherin的表達與腫瘤的分期、病理分級以及淋巴結轉移等密切相關(P<0.05)。結論N-cadherin的高表達及E-cadherin、p63的低表達與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉移密切相關，對上述因子的調(diào)控有可能成為宮頸癌治療的新的靶點。

宮頸腫瘤；N-cadherin；E-cadherin；p63

宮頸癌是婦科臨床上的常見病，目前仍居女性惡性腫瘤中的第二位，是女性腫瘤防治的重點疾病之一。宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程較為復雜，目前多數(shù)研究認為其與機體內(nèi)基因及分子水平的變化有密切的關聯(lián)[1]。同時宮頸癌細胞對組織的侵襲以及轉移是目前導致宮頸癌患者病情惡化的主要原因之一[2]。上皮間質(zhì)轉化是指在一定的病理生理狀態(tài)下上皮細胞轉分化為間充質(zhì)細胞的一種現(xiàn)象。文獻報道上皮間質(zhì)轉化參與了上皮細胞起源惡性腫瘤的侵襲以及轉移等病理過程[3,4]。鈣黏蛋白(cadherin)轉換是目前發(fā)現(xiàn)的上皮間質(zhì)轉化的重要機制之一，其表現(xiàn)為上皮型鈣黏蛋白(E-cadherin)向神經(jīng)型鈣黏蛋白(N-cadherin)進行轉化[5,6]。而p63已被證實可在細胞分化的過程中通過Wnt信號通路對EMT過程發(fā)揮一定的調(diào)控作用[7-9]。筆者所見目前關于宮頸癌的上皮間質(zhì)轉化的研究不多，本研究通過研究N-cadherin、E-cadherin和p63在宮頸癌中的表達，進一步探討上皮間質(zhì)轉化在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1　資料與方法

1.1一般資料宮頸癌組：收集2009至2014年我院宮頸鱗狀細胞癌石蠟包埋標本50例，患者年齡24～80歲，中位年齡54歲。術前均未經(jīng)放、化療或其他治療。按2009年國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)的分期標準，Ⅰ期33例，Ⅱ期17例；按有無淋巴結轉移情況分為：有淋巴結轉移12例，無淋巴結轉移38例；按腫瘤細胞分化級別分為低分化、中分化、高分化，分別為21、19、10例。宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)石蠟包埋標本30例，其中CINⅡ級和Ⅲ級各15例，患者年齡38～66歲，中位年齡48歲。另取同期在我院因子宮肌瘤切除子宮患者的正常宮頸標本15例，患者年齡32～53歲，中位年齡為40歲。所有診斷均由兩位以上病理醫(yī)師確診。

1.2免疫組化采用Envision二步免疫組化染色法。N-cadherin、E-cadherin抗體購于福州邁新生物技術開發(fā)有限公司，鼠抗人p63單克隆抗體購于Santa Cruz 公司。Envision二步法免疫組化檢測試劑盒(PV-6000)和DAB酶底物顯色試劑盒等相關試劑購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司。按Envision二步法免疫組化檢測試劑盒(PV-6000)說明操作，DAB顯色，蘇木精復染。已知的陽性對照片作陽性對照，PBS代替第一抗體作陰性對照。所有切片均采用同一批試劑完成。

1.3結果判斷標準N-cadherin著色部位為細胞質(zhì)，E-cadherin為細胞膜，p63為細胞核，呈棕黃色或棕褐色。上述部位如有棕黃色顆粒即判定為陽性。在隨機雙盲的條件下，兩名高年資病理科醫(yī)師對切片觀察，每張切片隨機選擇5個高倍鏡(×400倍)，200個細胞/視野，共計1 000個細胞并取其平均數(shù)。根據(jù)目前應用較為廣泛的免疫組化積分標準判斷[3]：(1)染色強度：無色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，黃褐色3分，陽性細胞數(shù)：陰性0分，陽性細胞數(shù)≤10%1分，11%～50%2分，51%～80%3分，>80%4分。(2)采用半定量積分對各組織行陽性/陰性劃分。半定量積分=染色強度評分×陽性細胞數(shù)評分。其中半定量積分0～2分定位陰性(-)，3～4分定位弱陽性(+)，4～6分定為中陽性(++)，>6分定為強陽性(+++)。+～+++均為陽性，++～+++為過表達，-～+為表達缺失或低表達。

1.4統(tǒng)計學分析應用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料的兩兩比較采用χ2檢驗，多組計數(shù)資料間的比較采用秩和檢驗，P<0．05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1N-cadherin、E-cadherin和p63在3組宮頸組織的表達情況

2.1.1N-cadherin在3組宮頸組織中的表達情況:在15例正常宮頸組織中N-cadherin的陽性表達率為6.67%，在30例CIN組織中的陽性表達率為33.33%，在50例宮頸癌組織中的陽性表達率為52.00%，三者呈逐漸遞增趨勢。正常宮頸組織組與CIN組的陽性率差異有統(tǒng)計學意義(χ2=3.22，P<0.05)，宮頸癌組的陽性表達率與正常宮頸組織組及CIN組均差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.06、4.95，P<0.05)。見表1,圖1～3。

2.1.2E-cadherin在3組宮頸組織中的表達情況:E-cadherin在正常宮頸組織及CIN中陽性率分別為73.3%、40.00%，而宮頸癌組織中E-cadherin的陽性率為8.0%，陽性表達率逐漸降低。宮頸癌與正常宮頸組織以及CIN陽性表達率間差異有統(tǒng)計學意義(χ2=11.10、9.13，P<0.05)，正常宮頸組和CIN組織中N-cadherin的表達差異也有統(tǒng)計學意義(χ2=4.06，P<0.05)。見表2,圖4～6。

表1　N-cadherin在3組宮頸組織中的表達情況　例

注：與正常宮頸比較，*P<0.05；與CIN比較，#P<0.05

圖1 正常宮頸組織N-cadherin表達陰性(免疫組化×100) 圖2 宮頸CINⅢ級N-cadherin少部分上皮細胞表達陽性(免疫組化×200)圖3 宮頸癌N-cadherin大部分癌細胞表達陽性(免疫組化×200)

表2　E-cadherin在3組宮頸組織中的表達情況　例

注：與正常宮頸比較，*P<0.05；與CIN比較，#P<0.05

圖4 正常宮頸組織E-cadherin大部分表達陽性(免疫組化×200)圖5 宮頸CINⅢ級E-cadherin少部分上皮細胞表達陽性(免疫組化×200)圖6 宮頸癌E-cadherin幾乎不表達(免疫組化×100)

2.1.3p63在3組宮頸組織中的表達情況：在正常宮頸、CIN及宮頸癌組織中，p63的陽性表達率分別為60.00%、43.33%、6.00%，呈逐漸降低趨勢。正常宮頸組與CIN組、宮頸癌組的陽性率比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.68、14.13，P<0.05)，而CIN組與宮頸癌組間比較差異無統(tǒng)計學意義(χ2=2.64，P>0.05)。見表3,圖7～9。

表3　p63在3組宮頸組織中的表達情況　例

注：與正常宮頸比較，*P<0.05

2.2N-cadherin、E-cadherin和p63表達與子宮內(nèi)膜腺癌臨床病理特征的關系N-cadherin在宮頸癌組織中的表達與腫瘤的分期、病理分級及淋巴結轉移密切相關(P<0.05)，而E-cadherin和p63在宮頸癌組織中的表達與腫瘤的分期、病理分級以及淋巴結轉移等無關(P>0.05)。見表4。

圖7 正常宮頸組織p63大部分表達陽性(免疫 組化×100)圖8 宮頸CINⅢ級p63少部分上皮細胞表達陽性(免疫組化×200)圖9 宮頸癌p63幾乎不表達(免疫組化×100)

表4　N-cadherin、E-cadherin和p63表達與子宮內(nèi)膜腺癌臨床病理特征的關系　例

3　討論

上皮間質(zhì)轉化確切的定義是在某些特定因素的作用下上皮細胞的極性、緊密連接等逐漸喪失而細胞骨架出現(xiàn)重構,從而使其變形、遷移以及運動等能力增強,轉化成與間質(zhì)細胞的形態(tài)及特性相似的一類細胞、上皮間質(zhì)轉化主要分為三種類型：(1) 胚胎發(fā)育過程中的上皮間質(zhì)轉化；(2)炎癥、創(chuàng)傷、組織纖維化等因素作用下的上皮間質(zhì)轉化；(3)上皮細胞起源腫瘤在侵襲以及轉移過程中的上皮間質(zhì)轉化。參與上皮間質(zhì)轉化的標記物包括：(1)上皮細胞標記蛋白如E-cadherin、β-catenin等；(2)間質(zhì)細胞標記蛋白如N-cadherin、Vimentin；(3)介導細胞骨架重構的Rho小GTP酶以及轉錄因子如Snail、Twist和Slug等[10]。

宮頸癌的侵襲以及轉移是一個復雜、多步驟、多基因作用下的過程，包括癌細胞的失控性增殖，從其原發(fā)病灶的脫離,進一步結合并溶解其細胞外的基質(zhì),最后經(jīng)細胞間的裂隙中擴散,通過淋巴管、血管最終出現(xiàn)遠處轉移。本研究結果表明E-cadherin在正常宮頸組織、CIN以及宮頸癌中的表達卻逐漸降低，而N-cadherin在正常宮頸組織、CIN以及宮頸癌中的表達逐漸升高，N-cadherin的表達與腫瘤的分期、病理分級以及淋巴結轉移等密切相關。E-cadherin是維持上皮細胞之間黏附功能的主要分子標記物，其在正常生理活性下應該是維持一種正常的表達水平。在上皮細胞間通過E-cadherin與β-catenin的相互結合形成分子復合體，能夠防止癌細胞的侵襲和轉移，在上皮間質(zhì)轉化的過程中，E-cadherin分子低表達或者缺失不僅可使細胞間黏附能力下降，而且還能夠促進β-catenin進入細胞質(zhì)，進一步激活與上皮間質(zhì)轉化相關的信號轉導途徑，并最終提高癌細胞的侵襲以及遷移能力[11]。Li等[12]研究發(fā)現(xiàn)E-cadherin的表達在CIN組織中較正常宮頸組織的表達明顯減少，而且隨著CIN級別的不斷增高其表達亦呈明顯降低趨勢。呂紅梅等[13]證實E-cadherin在正常宮頸組織、CIN以及宮頸癌中的表達逐漸降低，與本研究結果一致。而在上皮間質(zhì)轉化的過程中N-cadherin起的作用卻與E-cadherin的作用相反，其可提高細胞的粘附力促進腫瘤細胞的侵襲和轉移能力。N-cadherin是一類跨膜糖蛋白，其依賴鈣在細胞黏附中發(fā)揮作用，具有親同種抗原的特性。N-cadherin的作用之一是提高細胞的移動能力，因此當腫瘤細胞中的N-cadherin的表達升高，就意味著其獲得了更強的侵襲以及轉移能力。此外，N-cadherin的高表達還可促進原癌基因c-erbB1蛋白產(chǎn)物-生長因子受體的表達。當生長因子與其結合后促進細胞的增殖和分化，從而促進腫瘤的生長。這也可以解釋本研究中N-cadherin在宮頸癌組織的表達較CIN和正常宮頸組織中高，同時有轉移以及高分期的宮頸癌組織其N-cadherin較無轉移的宮頸癌組織表達明顯升高。王國平等[14]研究發(fā)現(xiàn)在正常宮頸組織、CIN以及宮頸癌中的N-cadherin陽性表達率逐漸上升，且其表達與臨床分期以及組織學分級有關。張儒英等[15]報道E-cadherin在CIN和宮頸癌組織中的表達減弱，而N-cadherin表達增強，E-cadherin與N-cadherin的表達呈明顯的負相關。上述研究與本研究結果相似，進一步證實了本研究的可信度。

p63是P53家族的一個成員，其對上皮細胞結構的形成起著一定的調(diào)節(jié)作用，廣泛表達與人體各組織上皮中的基底層細胞內(nèi)，促進間葉以及上皮組織的正常分化以及形態(tài)學的發(fā)生。本研究結果表明p63在正常宮頸組織、CIN以及宮頸癌中的陽性表達率逐漸降低，提示p63對宮頸癌的分化以及增殖也起著一定的調(diào)節(jié)作用[16]。有文獻報道Snail以及Slug轉錄因子能夠通過下調(diào)p63基因的表達以到達促進癌細胞的上皮間質(zhì)轉化進程[17]。江文靜等[18]聯(lián)合檢測N-cadherin、E-cadherin和p63在宮頸癌中的表達，發(fā)現(xiàn)正常宮頸組織不表達N-cadherin，而E-cadherin和p63反而呈強陽性表達，N-cadherin強陽性表達的宮頸癌患者其生存期較陰性者短，而E-cadherin和p63陰性表達的患者其生存期較強陽性者長。提示宮頸癌組織中N-cadherin的高表達以及E-cadherin、p63的低表達與其侵襲和轉移可能存在一定的關聯(lián)。嚴浩等[19]證實宮頸癌組織中N-cadherin、E-cadherin和p63表達兩兩具有相關性，且與宮頸癌的分化、臨床分期、淋巴結是否轉移以及預后等因素有一定相關性。但是上述研究僅檢測宮頸癌組織和正常宮頸組織，但是與其不同之處在于本研究中在正常宮頸組織、CIN、宮頸癌組織中均進行了上述三個指標的檢測，所得出的結果仍然與上述研究一致，具有更高的可信度。但是本研究有E-cadherin和p63在宮頸癌組織中檢測的表達過低，加之樣本量有限故而無法進一步分析兩者與臨床病理因素之間的相關性。

綜上所述，N-cadherin在正常宮頸組織、CIN以及宮頸癌中的陽性表達率逐漸升高，而E-cadherin和p63則逐漸降低，N-cadherin的表達與腫瘤的分期、病理分級以及淋巴結轉移等密切相關。上述結果提示上皮間質(zhì)化在宮頸癌中的發(fā)生、發(fā)展、侵襲以及轉移過程中發(fā)揮著重要的作用，因此上皮間質(zhì)化過程的調(diào)控有可能成為宮頸癌治療新的靶點，這需要后期更加深入的分子、基因水平的研究。

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Expressions of N-cadherin, E-cadherin and p63 in cervical squamous cell carcinoma and their correlation

YANGHongying.

CentralHospitalofDazhouCity,Sichuan,Dazhou635000,China

ObjectiveTo observe the expressions of N-cadherin, E-cadherin and p63 protein in cervical spuamous cell carcinoma, and to explore the correlation between their expressions and clinicopathological factors.MethodsThe expression levels of N-cadherin,E-cadherin and p63 were detected by immunohistochemisty in 15 normal cervical tissues, 30 cases of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) and 50 cases of cervical spuamous cell carcinoma.ResultsThe positive expression rates of N-cadherin in normal cervical tissues, CIN and cervical spuamous cell carcinoma were gradually increased in order, there were significant differences among them (P<0.05). However the positive expression rates of E-cadherin and p63 in normal cervical tissues, CIN and cervical spuamous cell carcinoma were gradually decreased in order, there were significant differences among them (P<0.05).The expression levels of N-cadherin were closely correlated to staging of tumor,pathological fractionation and lymph node metastasis.ConclusionThe high-expression of N-cadherinh and low-expression of E-cadherin, p63 may play an important role in the pathogenesis,development, invasion and metastasis of cervical cancer, thus, the regulation of these factors may become an new target for cervical cancer therapy.

cervix neoplasms; N-cadherin; E-cadherin; p63

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.17.001

635000四川省達州市中心醫(yī)院

R 711.74

A

1002-7386(2016)17-2565-04

2016-03-11)