miR-126對(duì)急性心肌梗死大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響

高　威，鐘　鋒

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬普愛醫(yī)院心胸外科，武漢　430030)

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miR-126對(duì)急性心肌梗死大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響

高威，鐘鋒*

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬普愛醫(yī)院心胸外科，武漢430030)

目的探討miR-126對(duì)急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響。方法通過冠狀動(dòng)脈左前降支結(jié)扎大鼠建立AMI模型，隨機(jī)分為AMI組、miR-126 mimics negative control (NC)組及miR-126組，其中NC組及miR-126組分別采用心肌組織局部注射慢病毒轉(zhuǎn)染miR-126 mimics NC及miR-126 mimics，另外假手術(shù)組采用冠狀動(dòng)脈左前降支穿線不結(jié)扎。記錄大鼠心臟功能，TCC法及原位末端凋亡法(TUNEL)檢測(cè)心肌凋亡指數(shù)及梗死面積，比色法檢測(cè)天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase 3)及Caspase 8活性，Western-blot法檢測(cè)Bax及Bcl-2表達(dá)，同時(shí)RT-PCR法檢測(cè)Fas及Fas-L mRNA表達(dá)。結(jié)果與假手術(shù)組比較，AMI組及NC組左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)及左室長(zhǎng)軸縮短分?jǐn)?shù)(FS)升高，左室舒張末期內(nèi)徑(LVDd)及左室收縮末期內(nèi)徑(LVDs)降低，心肌凋亡指數(shù)提高，心肌梗死面積增大，Caspase 3及Caspase 8活性上升，Bax蛋白表達(dá)量上調(diào)，Bcl-2蛋白表達(dá)量下調(diào)，F(xiàn)as及Fas-L mRNA水平上升，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.01)。與AMI組及NC組比較，miR-126組能扭轉(zhuǎn)此變化，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.01)。結(jié)論miR-126能顯著抑制AMI大鼠心肌細(xì)胞凋亡，與調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)有關(guān)。

miR-126；急性心肌梗死(AMI)；細(xì)胞凋亡

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)是臨床常見冠心病的一種，主要表現(xiàn)為心肌極度缺血，使得急性血栓從而導(dǎo)致了血管閉塞。近年來其發(fā)病率顯著上升，目前因AMI死亡人數(shù)占全球死于心血管疾病中人數(shù)的一半，是危害人類死亡的頭號(hào)殺手[1]。AMI起病急驟，病情變化迅速，在大多數(shù)老年人中心肌梗死容易導(dǎo)致心肌重構(gòu)，最終導(dǎo)致心力衰竭。目前研究顯示，在心肌梗死早期，心肌細(xì)胞凋亡在心梗后所引起的心室重構(gòu)及心力衰竭中起重要作用，通過阻斷AMI心肌梗死對(duì)于抑制心梗后心肌損傷具有重要意義[2-4]。miRNAs是一類進(jìn)化上高度保守的非編碼小分子RNA，以往對(duì)其研究主要集中于機(jī)體發(fā)育的調(diào)控及腫瘤形成中，近些年研究陸續(xù)發(fā)現(xiàn)有數(shù)十種miRNA能特異性表達(dá)于心肌細(xì)胞，并與心肌肥大，心肌重塑，心力衰竭，心肌缺血再灌注，心肌梗死等心血管疾病過程密切相關(guān)[5-6]。如Fichtlscherer等[7]發(fā)現(xiàn)AMI患者心肌來源miRNAs中包括miR-126表達(dá)量下調(diào)，此觀點(diǎn)也陸續(xù)被Long等[8]，Hsu等[9]證實(shí)。上述報(bào)道說明miR-126在AMI患者中低表達(dá)，并與AMI的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。此外研究也表明miR-126是一種內(nèi)皮特異性miRNA，在內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)豐富，同時(shí)過表達(dá)的miR-126對(duì)于AMI動(dòng)物的血管再生具有顯著促進(jìn)作用，從而修復(fù)心肌梗死損傷[10-11]。而過表達(dá)miR-126是否可以通過抑制心肌細(xì)胞凋亡從而抑制心肌細(xì)胞凋亡尚未見報(bào)道，因而本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建AMI大鼠心肌模型，并通過慢病毒轉(zhuǎn)染局部心肌組織注射miR-126，從而探討miR-126過表達(dá)對(duì)于AMI大鼠心肌細(xì)胞凋亡的作用及相關(guān)機(jī)制。

1　材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD清潔級(jí)雄性大鼠52只，2月齡，體重(180～220)g，購(gòu)于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司[SCXK(滬)2012-0002]。所有大鼠均在華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院[SYXK(鄂)2013—0044]的清潔環(huán)境下飼養(yǎng)觀察，室內(nèi)溫度控制在(21～ 25) °C，大鼠自由飲食和攝水。并按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物3R原則給予人道的關(guān)懷。

1.2試劑及儀器

兔抗Bax及Bcl-2單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Eptimics公司；Caspase 3、Caspase 8活性檢測(cè)試劑盒，BCA試劑盒購(gòu)，小鼠抗GAPDH單克隆抗體自碧云天生物技術(shù)有限公司；TUNEL檢測(cè)試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物技術(shù)有限公司；miR-126 mimics及miR-126 mimics negative control(NC)由廣州市銳博生物科技有限公司訂購(gòu)合成。迷你雙垂直電泳儀，迷你轉(zhuǎn)印電泳儀，ChemiDocTM XRS凝膠成像系統(tǒng)購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司；PHILIPS ATL-HDI5000多普勒心臟彩超儀購(gòu)自美國(guó)ATL公司；Tecan Infinite F200/M200型多功能酶標(biāo)儀購(gòu)自瑞士TECAN集團(tuán)公司。

1.3AMI模型建立與分組給藥[3, 12]

40只大鼠腹腔注射10%水合氯醛麻醉，剔除大鼠頸部和胸部毛發(fā)并碘伏消毒頸部皮膚，做切口1 cm，暴露頸部氣管，連接呼吸機(jī)。調(diào)整呼吸機(jī)參數(shù)為呼吸頻率為120次/min，潮氣量為7～8 mL，呼吸時(shí)間比為1∶2。胸部皮膚碘伏消毒后，以胸部左側(cè)第4根肋骨為手術(shù)切口，逐層剝離皮膚，使心臟充分暴露，在左心耳與肺動(dòng)脈圓錐之間找到冠狀動(dòng)脈左前降支，并結(jié)扎，當(dāng)觀察到心電圖記錄儀上ST段背向上抬高，心律較為緩慢，同時(shí)左心室變白，說明AMI制作成功，最終AMI制作成功并存活大鼠36只，即隨機(jī)分為AMI組，NC組，miR-126組，每組12只。而假手術(shù)組冠狀動(dòng)脈左前降支僅僅穿線但不結(jié)扎(12只)。其中NC組：攜帶GFP的慢病毒空載體(miR-126 mimics NC)以4×107病毒數(shù)量進(jìn)行心肌組織局部注射轉(zhuǎn)染，miR-126組：攜帶miR-126 mimics慢病毒以4×107病毒數(shù)量進(jìn)行心肌組織局部注射轉(zhuǎn)染，而AMI組與假手術(shù)組每天給予等量生理鹽水。于第7天處死大鼠，并將心肌組織置于-80℃冰箱待測(cè)。

1.4心臟功能檢測(cè)

大鼠治療2周后，腹腔注射10%水合氯醛進(jìn)行麻醉，進(jìn)而對(duì)大鼠行心臟彩超檢查，并記錄相關(guān)指標(biāo)：左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)，左室長(zhǎng)軸縮短分?jǐn)?shù)(FS)，左室舒張末期內(nèi)徑(LVDd)，左室收縮末期內(nèi)徑(LVDs)。

1.5心肌梗死面積的測(cè)量

沿著心臟橫軸方向在心尖到結(jié)扎點(diǎn)間進(jìn)行切片，每片1 mm，后經(jīng)1%TCC進(jìn)行染色，正常心肌染成紅色，AMI導(dǎo)致的缺血心肌染成白色。拍照后經(jīng)IMAGE PRO圖像分析，并計(jì)算得到心肌梗死面積占左心室的百分?jǐn)?shù)。

1.6TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡

采用TUNEL試劑盒檢測(cè)心肌組織凋亡，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，在200倍光鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行觀察，陽性細(xì)胞被染成棕黃色，凋亡細(xì)胞數(shù)與總細(xì)胞數(shù)的比值，并以百分比記做細(xì)胞凋亡指數(shù)。

1.7Caspase 3及Caspase 9活性檢測(cè)

按照Caspase 3及Caspase 9活性檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行操作，于酶標(biāo)儀405 nm處檢測(cè)Caspase活性。

1.8Western-blot檢測(cè)心肌組織中Bax及Bcl-2蛋白表達(dá)

取各組心肌標(biāo)本，用勻漿器處理后，加入適量的RIPA裂解液裂解，獲得總蛋白。采用BCA試劑盒測(cè)定蛋白濃度。蛋白變性，上樣，進(jìn)行SDS凝膠電泳，后濕法轉(zhuǎn)膜。在一抗溶液(Bcl-2及Bax，稀釋濃度為1∶100)4℃過夜孵育；次日二抗溶液中室溫孵育1～2 h。滴加曝光液，在凝膠成像系統(tǒng)中曝光。用“Quantity one”軟件統(tǒng)計(jì)各抗體條帶灰度值。

1.9RT-PCR檢測(cè)檢測(cè)心肌組織中Fas及Fas-L mRNA表達(dá)

參考trizol試劑盒說明書提取心肌組織中總RNA，接著紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA純度。進(jìn)一步采用一步法RT-PCR試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，并擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物用于2%的瓊脂糖膠電泳。反應(yīng)體系為：變性95℃，15 s，退火60℃，20 s，延伸70℃，60 s，共36個(gè)循環(huán)。引物如下。miR-126上游引物：5’- GGCTTCGTACCGTGAGTAAT-3’，下游引物：5’- GTGCAGGGTCCGAGGT-3’，長(zhǎng)度145 bp，F(xiàn)as上游引物：5’- GTGAAACCGACAAC AACTGCT-3’，下游引物：5’- CAAGGCTCAAGG ATGTCTTCA-3’， 長(zhǎng)度349 bp； Fas-L上游引物：5’- ATAGAGCTGTG GCTACCGGT-3’，下游引物：5’- CTCCAGAGATCA AAGCAGTTCC-3’， 長(zhǎng)度285 bp；GAPDH上游引物：5’-GCTTCGGCAG CACATATAC TAAAAT-3’，下游引物：5’-CGCTTCACGAATTTG CGTGTCAT-3’，長(zhǎng)度314 bp(基因由上海生工生物工程有限公司合成)。

1.10統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2　結(jié)果

2.1各組大鼠心肌組織中miR-126的表達(dá)

與假手術(shù)組比較，AMI組及NC組中miR-126表達(dá)量顯著降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.01)；與AMI組及NC組比較，miR-126組中miR-126表達(dá)量顯著提高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.01)。見圖1。

注：與假手術(shù)組比較，**P < 0.01；與AMI組及NC組比較，##P < 0.01。圖1　各組大鼠心肌組織中miR-126的表達(dá)Note. Compared with sham operation group, **P < 0.01; Compared with AMI group and NC group, ##P < 0.01.Fig.1　Expression of miR-126 in each group

2.2miR-126對(duì)AMI大鼠心臟功能的影響

與假手術(shù)組比較，AMI及NC組中LVEF及FS明顯降低，LVDd及LVDs明顯提高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.01)；與AMI組及NC組比較，miR-126組中LVEF及FS明顯提高，LVDd及LVDs明顯降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.01)。見表1。

2.3miR-126對(duì)AMI大鼠心肌凋亡指數(shù)及梗死面積的影響

與假手術(shù)組比較，AMI組及NC組中心肌凋亡指數(shù)提高，梗死面積增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與AMI組及NC組比較，miR-126組中心肌凋亡指數(shù)顯著降低，梗死面積減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見圖2，表2。

表1　miR-126對(duì)AMI大鼠心臟功能的影響

注：與假手術(shù)組比較，**P< 0.01；與AMI組及NC組比較，##P< 0.01。

Note. Compared with sham operation group,**P< 0.01; Compared with AMI group and NC group,##P< 0.01.

表2　miR-126對(duì)AMI大鼠心肌凋亡指數(shù)及梗死面積的影響(×20)

注：與假手術(shù)組比較，**P< 0.01；與AMI組及NC組比較，##P< 0.01。

Note. Compared with sham operation group,**P< 0.01; Compared with AMI group and NC group,##P< 0.01.

2.4miR-126對(duì)AMI大鼠心肌組織中Bax及Bcl-2蛋白表達(dá)量的影響

與假手術(shù)組比較，AMI組及NC組中心肌組織中Bax表達(dá)量上調(diào)，Bcl-2表達(dá)量下調(diào)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.01)；與AMI組及NC組比較，miR-126組心肌組織中Bax表達(dá)量下調(diào)，Bcl-2表達(dá)量上調(diào)，見圖3。

2.5miR-126對(duì)AMI大鼠心肌組織中Fas及Fas-L mRNA水平的影響

與假手術(shù)組比較，AMI組及NC組中心肌組織中Fas及Fas-L mRNA水平提高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.01)；與AMI組及NC組比較，miR-126組心肌組織中Fas及Fas-L mRNA水平降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.01)。見圖4。

2.6miR-126對(duì)AMI大鼠心肌組織中Caspase 3及Caspase 8活性的影響

與假手術(shù)組比較，AMI組及NC組中心肌組織中Caspase 3及Caspase 8活性提高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.01)；與AMI組及NC組比較，miR-126組心肌組織中Caspase 3及Caspase 8活性降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.01)。見表3。

表3　miR-126對(duì)AMI大鼠心肌組織中Caspase 3及Caspase 8活性的影響

注：與假手術(shù)組比較，**P< 0.01；與AMI組及NC組比較，##P< 0.01。

Note. Compared with sham operation group,**P< 0.01; Compared with AMI group and NC group,##P< 0.01.

注：(A)假手術(shù)組；(B)AMI組；(C)NC組；(D)miR-126組。圖2　miR-126對(duì)AMI大鼠心肌凋亡指數(shù)及梗死面積的影響(×20)Note.(A)sham operation group;(B)AMI group;(C)NC group;(D)miR-126 group.Fig.2　Effect of miR-126 on apoptosis index and myocardial infarction area in rats with AMI(×20)

注：(A)Bax及Bcl-2蛋白表達(dá)圖譜；(B)Bax及Bcl-2蛋白表達(dá)分析圖。與假手術(shù)組比較，**P < 0.01；與AMI組及NC組比較，##P < 0.01。圖3　miR-126對(duì)AMI大鼠心肌組織中Bax及Bcl-2蛋白表達(dá)量的影響Note.(A)Bax and Bcl-2 protein expression profiles;(B)Expression analysis of Bax and Bcl-2 protein.Compared with sham operation group, **P < 0.01; Compared with AMI group and NC group, ##P < 0.01.Fig.3　Effect of miR-126 on the expression of Bax and Bcl-2 in myocardial tissue of rats with AMI

注：(A)Fas及Fas-L mRNA表達(dá)圖譜；(B)Fas及Fas-L mRNA表達(dá)分析圖。與假手術(shù)組比較，**P < 0.01；與AMI組及NC組比較，##P < 0.01。圖4　miR-126對(duì)AMI大鼠心肌組織中Fas及Fas-L mRNA水平的影響Note.(A)Fas and Fas-L mRNA expression profiles;(B)Expression analysis of Fas and Fas-L mRNA.Compared with sham operation group, **P < 0.01; Compared with AMI group and NC group, ##P < 0.01.Fig.4　Effect of miR-126 on the expression of Fas and Fas-L in myocardial tissue of rats with AMI

3　討論

miRNAs是一類長(zhǎng)度約為18～25 nt高度保守的小RNA，能結(jié)合于其靶基因3’-UTR區(qū)域，進(jìn)而抑制靶基因的翻譯，從而參與細(xì)胞生長(zhǎng)，增值，分化與凋亡的調(diào)控。近些年研究發(fā)現(xiàn)miRNAs與心肌梗死，心力衰竭，心臟重構(gòu)，心肌缺血再灌注等心血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。miR-126 不僅是心肌特異性miRNA，也廣泛表達(dá)于肺臟、心臟及肝臟等血管高度豐富的組織中[11]。Hsu等[9]證實(shí)ST段抬高性心肌梗死患者血清中有12個(gè)miRNA表達(dá)量上調(diào)，13個(gè)miRNA表達(dá)量下調(diào)，其中包括miR-126，miR-26a，miR-191等miRNA。Long等[8]采用ELISA法也證實(shí)AMI患者血清中miR-126表達(dá)量下調(diào)。Fichtlscherer等[7]發(fā)現(xiàn)AMI患者心肌來源miRNAs中包括miR-126表達(dá)量下調(diào)。上述研究充分說明了miR-126在AMI患者中低表達(dá)，并與AMI的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。此外Huang等[10]發(fā)現(xiàn)過表達(dá)miR-126的骨髓干細(xì)胞能恢復(fù)AMI雌性C57BL/6小鼠心肌梗死血流，增加微血管密度，促進(jìn)未成熟血管增生。Wang等[13]研究表明過表達(dá)miR-126能通過提高VEGF等血管生長(zhǎng)因子表達(dá)，抑制Spred-1表達(dá)而促進(jìn)血管生成，若敲除miR-126基因，新生小鼠血管增生及遷移受到限制。進(jìn)而說明了miR-126對(duì)于AMI動(dòng)物心肌梗死具有修復(fù)作用，不過是通過促進(jìn)血管增生。而心肌細(xì)胞凋亡對(duì)于心梗后心肌重塑，心肌重構(gòu)及心力衰竭等病理生理過程具有重要作用，因此本研究將探討過表達(dá)miR-126對(duì)于AMI大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響及具體機(jī)制。

所以，本研究在此基礎(chǔ)上，首先采用冠狀動(dòng)脈左前降支結(jié)扎構(gòu)建AMI模型，通過檢測(cè)大鼠心肌功能，證實(shí)有36只AMI大鼠構(gòu)建成功并存活，成功率達(dá)90%。接著通過參考相關(guān)文獻(xiàn)及預(yù)實(shí)驗(yàn)[3, 10]，通過心肌組織局部注射慢病毒轉(zhuǎn)染miR-126 mimics NC及miR-126 mimics，結(jié)果發(fā)現(xiàn)AMI組及NC組心肌組織中miR-126表達(dá)量顯著低于假手術(shù)組，與李國(guó)達(dá)等[14]研究結(jié)果一致，而miR-126組較AMI組及NC組心肌組織中miR-126表達(dá)量上調(diào)。所以本研究接下來探討過表達(dá)miR-126對(duì)于AMI心肌細(xì)胞凋亡的影響，首先通過檢測(cè)心臟功能miR-126對(duì)AMI大鼠心肌功能的改善作用，結(jié)果表明過表達(dá)miR-126能顯著提高LVEF及FS，降低LVDd及LVDs，從而說明miR-126能通過改善大鼠心臟功能，進(jìn)而抑制AMI損傷。接著通過TUNEL法及TCC法檢測(cè)心肌凋亡指數(shù)及心肌梗死面積，結(jié)果表明過表達(dá)miR-126能顯著的降低AMI大鼠心肌凋亡指數(shù)及心肌梗死面積，說明過表達(dá)miR-126能通過抵抗心肌細(xì)胞凋亡從而抑制大鼠AMI損傷。

細(xì)胞凋亡是一類由基因控制的程序性死亡方式，主要由內(nèi)源性途徑及外源性途徑介導(dǎo)，其中外源性途徑由細(xì)胞表面死亡受體Fas所介導(dǎo)，F(xiàn)as/Fas-L系統(tǒng)能直接啟動(dòng)凋亡信號(hào)，進(jìn)而結(jié)合于Fas相關(guān)死亡區(qū)域(FADD)，使FADD激活，并與Caspase 8激活，進(jìn)而介導(dǎo)Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終將凋亡信號(hào)傳遞給凋亡執(zhí)行者Caspase 3，從而使DNA降解斷裂，細(xì)胞凋亡。研究已經(jīng)證實(shí)AMI大鼠心肌組織中凋亡指數(shù)提高的同時(shí)伴隨著Fas及Fas-L mRNA水平及蛋白表達(dá)量顯著上調(diào)[2, 8]。Caspase 3及Caspase 8在AMI大鼠心肌梗死區(qū)活性或蛋白表達(dá)量顯著提高，當(dāng)抑制Caspase 3及Caspase 8活性或下調(diào)其表達(dá)都能使心肌細(xì)胞凋亡受到抑制[15-16]。所以本研究通過RT-PCR及比色法分別檢測(cè)了AMI大鼠心肌組織中Fas、Fas-L mRNA水平及Caspase 3及Caspase 8活性，結(jié)果表明AMI組心肌組織中Fas、Fas-L mRNA水平及Caspase 3及Caspase 8活性顯著提高，而miR-126組Fas、Fas-L mRNA水平及Caspase 3及Caspase 8活性顯著降低，說明過表達(dá)miR-126能通過Fas/Fas-L介導(dǎo)的信號(hào)途徑從而抑制心肌細(xì)胞凋亡。而細(xì)胞凋亡還受Bcl-2家族蛋白的調(diào)控，抑凋亡蛋白Bcl-2能與促凋亡蛋白Bax結(jié)合形成異二聚體，或者Bax自身形成寡聚體，從而將凋亡信號(hào)傳遞給Caspase 3，使其發(fā)揮凋亡執(zhí)行作用。研究表明AMI大鼠心肌組織中Bax表達(dá)量上調(diào)，而Bcl-2表達(dá)量下調(diào)，通過遏制此變化，能顯著的抑制心肌細(xì)胞凋亡[15-16]。所以本研究繼續(xù)探討各組心肌組織中Bax及Bcl-2表達(dá)，結(jié)果表明過表達(dá)miR-126能上調(diào)Bcl-2表達(dá)，下調(diào)Bax表達(dá)，從而抑制心肌細(xì)胞凋亡。

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Effect of miR-126 on apoptosis of myocardial cells in rats with acute myocardial infarction

GAO Wei， ZHONG Feng*

(Department of Cardiothoracis Surgery, Puai Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430030，China)

ObjectiveTo explore effect of miR-126 on apoptosis of myocardial cells in rats with acute myocardial infarction (AMI). Methods AMI model was established by ligation of left anterior descending branch of coronary artery. The survivors were randomly divided into 3 groups:AMI group, NC group and miR-126 group. the NC group and miR-126 group were injection of lentiviral transfection of miR-126 mimics NC and miR-126 mimics. The sham operation group was left anterior descending coronary artery without ligation. The rats’ cardiac function was recorded. Apoptosis index and infarct size of myocardium was detected by TCC method and in situ end method (TUNEL), respectively. The activity of cysteinyl aspartate specific proteinase 3 (Caspase 3) and Caspase 8 were determinated by colorimetry. The expression of Bcl-2, Bax was assayed by Western-blot. The expression of Fas and Fas-L mRNA was detected by RT-PCR. ResultsCompared with sham operation group, left ventricular ejection fraction (LVEF) and left ventricular long axis shortening fraction (FS) was increased, left ventricular end diastolic diameter (LVDd) and left ventricular end systolic diameter (LVDs) was decreased, apoptosis index was increased, myocardial infarction area increased, the activity of Caspase 3 and Caspase 8 was increased, the expression of Bax protein was upregulated, the expression of Bcl-2 protein was downregulated, the expression of Fas and Fas-L mRNA was increased in AMI and NC group, the difference was statistically significant (P< 0.01). Compared with AMI and NC group, miR-126 could reverse the change, the difference was statistically significant (P< 0.01). Conclusions miR-126 could inhibit apoptosis of myocardial cells in rats with AMI, which related to regulation of expression of cell apoptotic related protein.

MiR-126; Acute myocardial infarction (AMI); Cell apoptosis

高威(1981-)男，碩士生，住院醫(yī)師，研究方向：心胸外科疾病的基礎(chǔ)與臨床。E-mail：gw_0504@163.com。

鐘鋒(1968-)男，本科，副主任醫(yī)師，研究方向：心胸外科疾病的基礎(chǔ)研究及外科治療。E-mail:zhongfeng871586@163.com。

研究報(bào)告

R-332

A

1671-7856(2016)07-0057-07

10.3969.j.issn.1671-7856.2016.07.010

2016-04-06