副豬嗜血桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

趙美盈

（青海省西寧市大通縣黃家寨鎮(zhèn)獸醫(yī)站，青?！∥鲗?10000）

副豬嗜血桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

趙美盈

（青海省西寧市大通縣黃家寨鎮(zhèn)獸醫(yī)站，青海西寧810000）

近些年，由副豬嗜血桿菌引起的豬多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎及腦膜炎在我縣時(shí)有發(fā)生，給養(yǎng)豬場(chǎng)造成極大經(jīng)濟(jì)損失。為此，筆者結(jié)合生產(chǎn)實(shí)踐，對(duì)患有多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎及腦膜炎的病豬進(jìn)行了致病菌的分離鑒定，同時(shí)通過藥敏試驗(yàn)進(jìn)行了耐藥性分析，以指導(dǎo)臨床合理用藥。

1　材料與方法

1.1病料采集

病料均來自我縣多個(gè)患有多發(fā)性漿膜炎、纖維素性關(guān)節(jié)炎及腦膜炎的豬場(chǎng)。

1.2細(xì)菌分離培養(yǎng)

無菌采集患病豬只的腦組織、關(guān)節(jié)液、心血、心包液、胸腹腔積液、胸膜、肺臟和鼻腔等作為病料，分別接種在含煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）的胰蛋白大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）平板，置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)24～48h后對(duì)菌落形態(tài)進(jìn)行觀察，將較為典型的菌落挑選出來進(jìn)行純培養(yǎng)。

1.3分離菌株革蘭染色鏡檢

將上述純培養(yǎng)菌落挑取出進(jìn)行涂片和革蘭氏染色，通過鏡檢對(duì)細(xì)菌形態(tài)特征進(jìn)行觀察。

1.4生化鑒定

將純培養(yǎng)菌落接種在麥芽糖、果糖、核糖、葡萄糖、硝酸鹽還原、接觸酶、氧化酶以及脲酶等微量生化鑒定管，根據(jù)說明書操作并觀察結(jié)果。

1.5藥敏試驗(yàn)

挑取分離菌株，在含NAD鮮血瓊脂平板或TSA平板均勻劃線，采用無菌鑷子將相關(guān)的抗菌紙片貼在平板上，放在37℃恒溫箱培養(yǎng)24h后通過游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑。（判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：抑菌圈直徑大于15mm為高度敏感；抑菌圈直徑在10～15mm為中度敏感；抑菌圈直徑小于10mm為不敏感）

2　結(jié)果分析

2.1通過細(xì)菌分離培養(yǎng)可見無色透明、直徑約1～2mm以及圓形光滑的菌落形態(tài)。

2.2將分離菌株染色鏡檢可見革蘭氏陰性細(xì)小桿菌，具有多形態(tài)性，多呈纖細(xì)桿狀，個(gè)別呈球桿狀（兩極染色），間有長(zhǎng)而彎曲的絲狀菌體。

2.3分離菌株生化鑒定結(jié)果為硝酸鹽還原試驗(yàn)陽性、接觸酶試驗(yàn)陽性、氧化酶試驗(yàn)陰性、脲酶試驗(yàn)陰性，并發(fā)酵麥芽糖、果糖、核糖、葡萄糖等碳水化合物，同副豬嗜血桿菌的生化特性相符合。

2.4藥敏試驗(yàn)結(jié)果：將分離到的13株副豬嗜血桿菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。具體結(jié)果詳見表1。

表1　副豬嗜血桿菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果（株）

通過表1可看出，13株副豬嗜血桿菌大多數(shù)對(duì)環(huán)丙沙星、恩諾沙星、氧氟沙星、先鋒霉素V、頭孢噻肟具有較高的敏感性，而對(duì)丁胺卡那霉素、卡那霉素、四環(huán)素、鏈霉素、復(fù)方新諾明、甲氧芐胺嘧啶不敏感，呈現(xiàn)嚴(yán)重的耐藥性。

3　小結(jié)與討論

3.1對(duì)患有多發(fā)性漿膜炎、纖維素關(guān)節(jié)炎及腦膜炎的病豬進(jìn)行細(xì)菌分離和鑒定，確定為副豬嗜血桿菌，總共分離出13株副豬嗜血桿菌，對(duì)這13株副豬嗜血桿菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果表明，對(duì)環(huán)丙沙星、恩諾沙星、氧氟沙星、先鋒霉素V、頭孢噻肟具有較高的敏感性，特別是對(duì)先鋒霉素V和頭孢噻肟高度敏感；對(duì)丁胺卡那霉素、卡那霉素、四環(huán)素、鏈霉素、復(fù)方新諾明、甲氧芐胺嘧啶有耐藥性。

3.2鑒于我縣不同豬場(chǎng)使用的抗菌藥物不一，加之分離出的菌株對(duì)同一藥物的敏感性亦有所差異，臨床上治療用藥時(shí)最好在藥敏試驗(yàn)下指導(dǎo)進(jìn)行，避免盲目用藥。

3.3豬場(chǎng)長(zhǎng)期大量使用抗菌藥，會(huì)增多耐藥菌株，加重藥物殘留，影響食品安全。生產(chǎn)中防控副豬嗜血桿菌病的理想措施是疫苗免疫。采用副豬嗜血桿菌菌苗，不論豬只大小，按肌注2mL/頭：仔豬于14日齡首免，35日齡二免；初產(chǎn)母豬于產(chǎn)前8～9周首免，產(chǎn)前4～5周二免；經(jīng)產(chǎn)母豬于產(chǎn)前4～5周免疫一次；種公豬每6個(gè)月免疫一次。

從略）

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.06.012