子宮內(nèi)膜癌分子標(biāo)志物檢測及術(shù)前血清CA125的臨床價(jià)值*

陳　鈺　胡雪梅

( 1. 濱州醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室，山東 煙臺　264000；2. 蓬萊市人民醫(yī)院，山東 蓬萊　265600)

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子宮內(nèi)膜癌分子標(biāo)志物檢測及術(shù)前血清CA125的臨床價(jià)值*

陳鈺1,2胡雪梅1

( 1. 濱州醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室，山東 煙臺264000；2. 蓬萊市人民醫(yī)院，山東 蓬萊265600)

目的探討子宮內(nèi)膜癌中雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、第10號染色體同源缺失性磷酸酶—張力蛋白基因(PTEN)、抑癌基因(p53)、細(xì)胞增殖核抗原(Ki-67)的表達(dá)與意義，以及術(shù)前血清癌抗原125(CA125)對子宮內(nèi)膜癌的臨床意義。方法收集100例子宮內(nèi)膜癌患者臨床資料、組織病理學(xué)結(jié)果、免疫組織化學(xué)結(jié)果、術(shù)前血清CA125結(jié)果，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果患者發(fā)病年齡越大、組織學(xué)類型為非內(nèi)膜樣內(nèi)膜癌、手術(shù)—病理分期越晚、病理分級越高、肌層浸潤越深，ER、PR陽性表達(dá)率越低(P﹤0.05)；p53陽性表達(dá)率與患者發(fā)病年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、病理分級有關(guān)(P﹤0.05)；Ki-67陽性表達(dá)率與組織學(xué)類型、手術(shù)-病理分期、病理分級有關(guān)(P﹤0.05)；血清CA125陽性表達(dá)率與組織學(xué)類型、手術(shù)-病理分期、病理分級、肌層侵潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P﹤0.05)。結(jié)論術(shù)前診斷性刮宮標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測ER、PR、PTEN、p53、Ki-67有助于明確子宮內(nèi)膜癌的臨床病理特征；術(shù)后子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本免疫組織化學(xué)檢測分子標(biāo)志物聯(lián)合檢測血清CA125水平，有助于判斷子宮內(nèi)膜癌患者的預(yù)后，具有一定的臨床意義。

子宮內(nèi)膜癌；免疫組織化學(xué)；分子標(biāo)志物；預(yù)后

子宮內(nèi)膜癌，占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的20%～30%，是位列女性生殖系統(tǒng)常見三大惡性腫瘤第二位，約占女性癌癥的7%。近年來，國內(nèi)子宮內(nèi)膜癌呈現(xiàn)上升趨勢，且趨于年輕化[1]。本研究對100例子宮內(nèi)膜癌病例的臨床病理資料進(jìn)行回顧性分析，探討ER、PR、PTEN、p53、Ki-67表達(dá)、血清CA125水平與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。

1 　資料與方法

1.1臨床資料選取蓬萊市人民醫(yī)院婦科自2010年1月至2015年3月收治原發(fā)性子宮內(nèi)膜癌患者的完整資料100例。年齡32～71歲(平均年齡54.32±8.2)；絕經(jīng)后患者58例(平均絕經(jīng)年限11.86±3.45)，未絕經(jīng)患者42例；初潮年齡12～19歲(平均年齡14.32±3.2)，孕次0～7次(平均孕次3.3±1.23次)，產(chǎn)次0～6次(平均產(chǎn)次2.2±1.78次)。合并高血壓病36例，糖尿病22例，脂肪肝10例，冠心病5例，不孕癥3例，肝硬化1例，慢性腎功能不全2例，乳腺癌術(shù)后2例，結(jié)腸癌術(shù)后1例，甲狀腺癌術(shù)后1例。術(shù)前均未進(jìn)行放化療、內(nèi)分泌治療，病例均經(jīng)病理確診。

根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO，2009)推薦手術(shù)—病理分期的標(biāo)準(zhǔn)，100例患者中I期65例(65%)，Ⅱ期15例(15%)，Ⅲ期18例(18%)，Ⅳ期2例(2%)；組織類型：子宮內(nèi)膜樣腺癌92例(92%)，漿液性乳頭狀癌4例(4%)，透明細(xì)胞癌2例(2%)，移性細(xì)胞癌1例(1%)，混合性腺癌1例(1%)。組織學(xué)分級：G1(高分化)32例(32%)，G2(中分化)47例(47%)，G3(低分化)21例(21%)。肌層浸潤程度：無肌層浸潤患者9例(9%)，浸潤深度≤1/2患者69例(69%)，浸潤深度>1/2患者20例(20%)，不詳患者2例(2%)。盆腔或腹主動脈淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移6例。

1.2方法分子標(biāo)志物的檢測，采用免疫組化SP法。手術(shù)切除的標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林液體固定、脫水、常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片。所用單克隆抗體購自福州邁新試劑。腫瘤標(biāo)志物CA125的測定，采用化學(xué)發(fā)光法，液體試劑購自羅氏公司。

1.3 結(jié)果判定ER、PR、p53、Ki-67免疫組化陽性表達(dá)均位于細(xì)胞核，染色呈現(xiàn)棕黃色；在高倍鏡下隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野，陽性細(xì)胞數(shù)<10%為(-)，陽性細(xì)胞數(shù)在10%～25%為(+)，陽性細(xì)胞數(shù)在25%～50%為(++)，陽性細(xì)胞數(shù)在>50%為(+++)。本研究中，陽性細(xì)胞數(shù)在>10%即為陽性。為便于統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，陽性與強(qiáng)陽性均記為陽性。PTEN表達(dá)于細(xì)胞漿，細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為PTEN陽性細(xì)胞。隨機(jī)選取10個(gè)高倍鏡視野(40×10倍),計(jì)算陽性細(xì)胞數(shù):≤30%記為陰性(-); >30%記為陽性(+)。腫瘤標(biāo)志物CA125的測定，患者術(shù)前空腹采集靜脈血，分離血清，正常值<35 mIU/L。測定結(jié)果超過正常上限判定為陽性值[2]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采集的所有數(shù)據(jù)以Excel數(shù)據(jù)管理軟件錄入，輸入SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P≤0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　 結(jié)　果

2.1 免疫組化表達(dá)及血清水平檢測結(jié)果ER、PR、PTEN、p53、Ki-67陽性表達(dá)率分別為77%(77/100)，84%(84/100)、80%(80/100)、52%(52/100)、64%(64/100)，血清CA125陽性率為19%(19/100)。

2.2 免疫組化表達(dá)及血清水平與子宮內(nèi)膜癌病例特征的關(guān)系由表1可見，年齡與ER、PR陽性表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)(P=0.004，r=-0.236；P=0.004，r=-0.245)，與p53陽性表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)(P=0.004，r=0.226)，與PTEN、Ki-67陽性表達(dá)、血清CA125水平均無明顯差異(P=0.07，P=0.06，P=0.07，均不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。絕經(jīng)狀態(tài)與PR陽性表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)(P=0.015，r=-0.212)，與p53陽性表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)(P=0.014，r=0.201)，與ER、PTEN、Ki-67陽性表達(dá)、血清CA125水平均無明顯差異(P=0.17，P=0.36，P=0.45，P=0.86，均不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。有無合并癥與ER、PR、PTEN、p53、Ki-67陽性表達(dá)、血清CA125水平均無明顯差異(P=0.921，P=0.988，P=0.574，P=0.350，P=0.671，P=0.587，均不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。

由表2可見，子宮內(nèi)膜樣腺癌與其他類型子宮內(nèi)膜癌相比，ER、PR、p53陽性表達(dá)、血清CA125水平的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，與PTEN、Ki-67陽性表達(dá)無明顯差異(P=0.824，P=0.318，均不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。手術(shù)病理分期與ER、PR陽性表達(dá)負(fù)相關(guān)(P=0.018，r=-0.200；P=0.004，r=-0.188)，與Ki-67陽性表達(dá)、血清CA125水平呈現(xiàn)正相關(guān)(P=0.011，r=0.266；P=0.001，r=0.356)，與PTEN、p53陽性表達(dá)無明顯差異(P=0.267，P=0.16，均不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。腫瘤組織學(xué)分級與ER、PR陽性表達(dá)負(fù)相關(guān)(P=0.003，r=-0.221；P=0.001，r=-0.325)，與p53、Ki-67陽性表達(dá)、血清CA125水平呈現(xiàn)正相關(guān)(P=0.001，r=0.282；P=0.035，r=0.209；P=0.001，r=0.511)，與PTEN陽性表達(dá)無明顯差異(P=0.326，不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。肌層浸潤深度與ER、PR陽性表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)(P=0.004，r=-0.265；P=0.001，r=-0.213)，與血清CA125水平呈現(xiàn)正相關(guān)(P=0.001，r=0.486)，與PTEN、p53、Ki-67陽性表達(dá)無明顯差異(P=0.722，P=0.890，P=0.651，不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移與血清CA125水平呈現(xiàn)正相關(guān)(P=0.001，r=0.365)，與ER、PR、PTEN、p53、Ki-67陽性表達(dá)無明顯差異(P=0.634，P=0.712，P=0.433，P=0.217，P=0.326不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。

表1　 ER、PR、PTEN、p53、Ki-67、CA125與發(fā)病年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、合并癥的關(guān)系 [n，(%)]

表2　ER、PR、PTEN、p53、Ki-67、CA125與組織學(xué)類型和手術(shù)病理分期的關(guān)系 [n，(%)]

表3　 ER、PR、PTEN、p53、Ki-67、CA125與組織學(xué)類型和手術(shù)病理分期的關(guān)系 [n，(%)]

3　討　論

在本研究中，年齡是否大于60歲與PR陽性表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)(P=0.004，r=-0.236；P=0.004，r=-0.245)，年齡越大，ER、PR陽性表達(dá)率越低。ER在年齡大于60歲和小于60歲的患者表達(dá)無差異性。這與已有的研究報(bào)道[3]不一致，分析認(rèn)為與所選樣本中小于60歲患者中存在糖尿病或胰島素抵抗、肥胖合并癥的人數(shù)較其他研究群體多的原因。以后需細(xì)化分類環(huán)節(jié)，增加對比分析力度。年齡越大，病理組織類型分化低，存在較多的淋巴結(jié)侵犯。年齡是否大于60歲與p53陽性表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)(P=0.004，r=0.226)，與PTEN、Ki-67陽性表達(dá)、血清CA125水平均無明顯差異。ER表達(dá)和絕經(jīng)狀態(tài)無相關(guān)性(P=0.17)，考慮在研究組群中小于60歲未絕經(jīng)者占比例較大，大于60歲者屬于絕經(jīng)狀態(tài)，但存在肥胖、高體重指數(shù)以及存在高血壓、胰島素抵抗等并發(fā)癥有關(guān)。PR陽性表達(dá)與是否絕經(jīng)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)(P=0.015，r=-0.212)，絕經(jīng)者的PR陽性表達(dá)率低于未絕經(jīng)者。已有研究報(bào)道[3]，PR 缺失和增齡之間有統(tǒng)計(jì)相關(guān)性。本研究結(jié)果與之相符。PTEN、Ki-67表達(dá)、術(shù)前血清CA125水平在是否絕經(jīng)狀態(tài)上比較均無明顯差異(P=0.17，P=0.36，P=0.45，P=0.86，均不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。絕經(jīng)與否的狀態(tài)與p53陽性表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)(P=0.014，r=0.201)。提示我們，子宮內(nèi)膜癌發(fā)病年齡越大，p53 陽性率越高?？紤]P53基因?qū)儆谝职┗颍R床上我們能捕捉檢測到的是突變型p53。由此考慮，隨年齡增大，p53 基因突變的幾率增加，致使p53 蛋白失活加劇，易發(fā)生子宮內(nèi)膜癌。 有無合并癥與ER、PR、PTEN、p53、Ki-67陽性表達(dá)、血清CA125水平雖無明顯差異(P=0.921，P=0.988，P=0.574，P=0.350，P=0.671，P=0.587，均不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。這一統(tǒng)計(jì)結(jié)果，考慮可能與所選病例中已經(jīng)存在代謝綜合征表現(xiàn)(如胰島素抵抗或高胰島素血癥、高脂血癥)、尚未發(fā)展為高血壓和糖尿病有關(guān)。下一步應(yīng)細(xì)化研究分類，強(qiáng)化對比組間的細(xì)節(jié)分析。 PR陽性表達(dá)與絕經(jīng)狀態(tài)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)(P=0.004，r=0.245)，提示增齡后，PR缺失率增加。 PR在老年子宮內(nèi)膜癌患者中的表達(dá)水平顯著低于非老年患者，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這樣就影響孕激素在老年子宮內(nèi)膜患者中的治療效果，預(yù)后不良。

在本研究結(jié)果中，ER、PR在內(nèi)膜樣癌中的陽性表達(dá)率明顯高于非內(nèi)膜樣癌的表達(dá)率(P值分別為0.006和0.008,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)，提示ER、PR與子宮內(nèi)膜腺癌的病理類型相關(guān)。無孕激素保護(hù)、持續(xù)性的雌激素刺激可發(fā)生子宮內(nèi)膜樣腺癌；內(nèi)膜樣腺癌術(shù)后用孕激素治療的臨床效果好。有淋巴轉(zhuǎn)移者的雌孕激素受體表達(dá)與無淋巴轉(zhuǎn)移者的表達(dá)無顯著差異(P=0.634，P=0.712)，提示ER、PR與淋巴轉(zhuǎn)移無關(guān)。這與已有的研究結(jié)果不相符，李明珠等[4]研究發(fā)現(xiàn)，ER陽性表達(dá)與較少的淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)。分析可能與所選病例數(shù)少有關(guān)，日后需擴(kuò)發(fā)樣本研究量。研究結(jié)果中手術(shù)病理分期與ER、PR陽性表達(dá)負(fù)相關(guān)(P=0.018，r=-0.200；P=0.004，r=-0.188)，病理分期越晚，雌孕激素受體表達(dá)陽性率越低；腫瘤組織學(xué)分級與ER、PR陽性表達(dá)負(fù)相關(guān)(P=0.003，r=-0.221；P=0.001，r=-0.325)，提示分級越差，雌孕激素受體表達(dá)陽性率越低；肌層浸潤深度與ER、PR陽性表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)(P=0.004，r=-0.265；P=0.001，r=-0.213)，說明浸潤肌層越深，雌孕激素受體表達(dá)越低。PTEN與年齡、絕經(jīng)狀態(tài)和有無合并癥無明顯相關(guān)，在不同子宮內(nèi)膜癌的病理表達(dá)類型中無明顯差異。從病理分級的角度分析，本研究中PTEN在手術(shù)病理分期Ⅰ期的癌組織中的表達(dá)率略高于Ⅱ期，而在晚期(Ⅲ-Ⅳ期)癌組織中的陽性表達(dá)率均低于早期(Ⅰ期和Ⅱ期)。但在不同分期之間比較，無顯著差異。提示PTEN 陽性表達(dá)率隨著手術(shù)病理分期的增加而逐漸下降。從肌層浸潤深度的角度來看，PTEN在肌層浸潤深度 >1 /2 癌組織中的陽性表達(dá)率顯著低于無肌層浸潤和淺肌層浸潤癌組織中的陽性表達(dá)率；提示肌層浸潤深度越淺，PTEN表達(dá)率越高；肌層浸潤深度越深，PTEN表達(dá)率越低。從淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的角度來看， PTEN在淋巴轉(zhuǎn)移陽性癌組織中的表達(dá)率顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織的表達(dá)率；提示PTEN在子宮內(nèi)膜癌的轉(zhuǎn)移、病程進(jìn)展方面有抑制作用?；颊吣挲g≥60歲，處于已絕經(jīng)狀態(tài)，病理分級越高，p53陽性表達(dá)率越高(P<0.05)。p53突變陽性率在小于60歲的患者中較高。考慮可能與小于60歲的患者群中肥胖、體重指數(shù)超標(biāo)，繼而發(fā)生p53基因突變的幾率大有關(guān)。G2、G3病理分級中Ki-67表達(dá)陽性率較G1高，在早期內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)率較晚期高，這點(diǎn)與其他研究結(jié)果不相符，考慮與研究病例組中晚期病例數(shù)較少有關(guān)。Ki-67陽性表達(dá)率在不同手術(shù)病理分期中有顯著意義，手術(shù)分期越晚，其陽性表達(dá)率越高。這與后者的研究結(jié)果相符， k-i67與子宮內(nèi)膜癌的分級分期明顯相關(guān)。已有研究顯示，血清CA125水平與子宮內(nèi)膜癌的組織學(xué)類型、手術(shù)—病理分期、病理分級、肌層浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)聯(lián)(P<0.05)[5]。本研究中血清CA125水平與子宮內(nèi)膜癌的組織學(xué)類型、手術(shù)—病理分期、病理分級、肌層浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)聯(lián)(P<0.05)。本研究結(jié)果表明術(shù)前血清 CA125水平與子宮肌層受累程度相關(guān)。 分析認(rèn)為，隨著癌細(xì)胞的侵襲能力增加，子宮內(nèi)膜癌組織浸潤肌層越深；癌組織血運(yùn)豐富，癌細(xì)胞獲得充分的支持營養(yǎng)，細(xì)胞分泌并循環(huán)到血液中的CA125 就越多。術(shù)前血清 CA125的測定可以作為預(yù)測子宮內(nèi)膜癌肌層浸潤深度及宮外擴(kuò)散的指標(biāo)，為臨床醫(yī)生手術(shù)方式的選擇及術(shù)后評價(jià)放化療的療效提供重要參考。

通過研究表明，ER、PR、PTEN、p53、Ki-67表達(dá)、血清CA125均與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征有關(guān)聯(lián)。術(shù)前可以通過診斷性刮宮標(biāo)本，進(jìn)行免疫組化檢測，得到免疫組化信息，聯(lián)合檢測血清CA125水平，再經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，對于全面了解臨床病理特征和子宮內(nèi)膜癌的預(yù)后判斷，具有一定的臨床意義。

[1]姚遠(yuǎn)洋,王悅,沈丹華，等.子宮內(nèi)膜癌分子標(biāo)志物與臨床病理特征關(guān)系的研究[J].中國婦產(chǎn)科臨床雜志,2009，10(3):189-192.

[2]周穎,廖予妹.聯(lián)合檢測多種分子標(biāo)志物及血清CA125對子宮內(nèi)膜癌的臨床意義[J].中國婦幼保健,2014，12(12):1936-1940.

[3]呂 嘉，邢 峰，丘 瑾.ER、PR和 p53 在老年子宮內(nèi)膜癌患者中的表達(dá)及意義.中國老年學(xué)雜志，2015，11：6128-6129.

[4]李明珠，趙麗君，沈丹華.五種子宮內(nèi)膜癌分子標(biāo)志物檢測的臨床意義[C].中華醫(yī)學(xué)會第十次全國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議婦科腫瘤會場論文匯編.2012年.

[5]高新萍,趙麗君,沈丹華，等.子宮內(nèi)膜癌患者血清及病理分子標(biāo)志物與其病理特征關(guān)系的研究[J].中國婦產(chǎn)科臨床雜志,2014，15(6):519-522.

Clinical significances of molecular markers and serum in endometrial carcer

CHEN Yu HU Xue-mei

(1. Binzhou Medical University, Yantai 264000,China; 2. Penglai City People's Hospital,Penglai 265600,China)

Objective:To investigate the expressions and significances of estrogen receptor(ER),progestogen receptor(PR),PTEN,P53,Ki-67 in endometrial carcinoma, and the clinical significance of the level of serum CA125 preoperative in endometrial carcinoma.Methods:The clinical data,histopathological rssults,immunohistochemical staining results and preoperative serum CA125 levels of 100 patients with endometrial cancer were collected and analyzed statistically.Results：The positive expression rates of ER and PR decreased with the increase of onset age ,non-endometrioid carcinoma,late surgical-pathological staging,high pathological grading and increase of depth of myometrial invasion(P<0.05). The positive expression rate of p53 was correlated with onset age,menopausal ststus and pathological grade(P<0.05).The pasitive rate of Ki-67 was related to histological types,surgical-pathological staging and pathological grade(P<0.05).The positive rate of serum CA125 was correlated with histological types,surgical-pathological staging,pathlolgical grade,the depth of myometrial invasion and lympth node metastasis(P<0.05).Conclusion：Using the immunohistochenmical method to detect the expressions of ER,PR,PTEN,P53 and Ki-67 in specimens of diagnostic curettage in patients before surgery is helpful to make sure the clinical pathological characteristics of the endometrial cancer, and it with detecting preoperation serum CA125 level is helpful to predict the prognosis of patients,which has a certain singnificance in directing postoprerative treatment.

endometrial cancer; immunohistochenmical method; molecular markers; prognosis

陳鈺(1977—)，女，山東蓬萊人，主治醫(yī)師，在職碩士，主要從事臨床婦科工作。

胡雪梅，濱州醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室，電子郵箱：xue-mei-hu@163.com

R711

A

1004-7115(2016)04-0365-04

10.3969/j.issn.1004-7115.2016.04.002

2016-01-18)