桃葉中黃酮的提取及測定研究

陳建欣，王　琰，錢琳璐

(常州工學(xué)院數(shù)理與化工學(xué)院，江蘇　常州　213022)

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桃葉中黃酮的提取及測定研究

陳建欣，王琰，錢琳璐

(常州工學(xué)院數(shù)理與化工學(xué)院，江蘇常州213022)

探討了桃樹葉中黃酮的提取方法，研究了溶劑浸提溫度、時(shí)間、固液比、乙醇濃度，超聲波或微波輔助等對桃葉中黃酮提取效果的影響。研究結(jié)果表明：溶劑浸提中，影響因素依次為：料液比>乙醇濃度>浸提溫度>水浴時(shí)間；超聲波輔助提取中則為乙醇濃度>料液比>浸提溫度>超聲時(shí)間；微波提取中則又為微波時(shí)間>微波功率>料液比>乙醇濃度。用70%乙醇作為浸提溶劑，料液比1:25，溫度控制在30 ℃，1次浸提40 min，桃葉黃酮提取率1.81%；采用超聲波輔助提取，料液比為1:30，浸提溫度控制在50℃，提取30 min，用70%乙醇提取桃葉黃酮，提取率最高達(dá)3.98%；使用微波輔助提取時(shí)，料液比1:30，微波功率控制在200 W，用60%乙醇提取30 s，則黃酮提取率3.92%。由此可見，純粹用溶劑提取，提取率較低，不到2%，采用超聲波或微波輔助提取，可達(dá)近4.0%。

桃樹葉；黃酮；提??；乙醇；超聲波；微波

桃原產(chǎn)中國，全國栽培面積已超過900萬畝，居世界第一。桃葉具有很多藥效作用[1-2]，如它具有抗過敏、抗菌、消炎、止痛、通便的作用等。桃葉中的有效成分[3]有柚皮素、葉綠素、黃酮類化合物等，而黃酮類化合物具有緩解心腦血管疾病，保肝，鎮(zhèn)咳，祛痰、抗病毒，抗癌，抗氧化性，降低應(yīng)激反應(yīng)[4]等作用。

近年來，人們崇尚自然、綠色的健康理念，從天然的自然產(chǎn)物中獲得的功能性成分更為健康安全。而桃葉作為桃樹植物資源中數(shù)量較大的部分，卻沒有得到很好的開發(fā)和利用。所以研究桃葉有效成分的提取及測定，為桃葉的綜合利用提供技術(shù)參考就顯得尤為重要。

1　實(shí)　驗(yàn)

1.1主要藥品和儀器

儀器：F-80高速粉碎機(jī)，金壇市金城國勝實(shí)驗(yàn)儀器廠；721可見分光光度計(jì)，上海光譜儀器有限公司；KH-500B超聲波清洗器，昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司；XH-MC-1翔鵠實(shí)驗(yàn)室微波合成儀，北京翔鵠科技發(fā)展有限公司。

藥品：無水乙醇(AR)、亞硝酸鈉(AR)、氫氧化鈉(AR)，江蘇永豐化學(xué)試劑廠；硝酸鋁(AR)，上海科昌精細(xì)化學(xué)品公司；蘆丁(標(biāo)準(zhǔn)品)，上海源葉生物科技有限公司。

1.2桃葉預(yù)處理

選取新鮮完整的桃葉，用自來水、蒸餾水清洗干凈后晾干，置于60 ℃烘箱中烘干，冷卻至室溫后用高速粉碎機(jī)磨成粉末，密封之后保存在干燥器中備用。

1.3標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

取8只25.00 mL容量瓶,分別移取0.2 mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液0.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00mL,加5%NaNO22.00 mL，放置6 min，再加10%Al(NO3)32.00 mL，放置6 min后，加4% NaOH 10.00 mL，用50%乙醇定容，放置15 min后于510 nm下，以不加蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液的溶液為參比液，測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4桃葉中黃酮提取

準(zhǔn)確稱取1.000 g桃葉樣品粉末于錐形瓶中，按不同的料液比加入乙醇，置于水浴鍋、超聲波清洗機(jī)、微波合成反應(yīng)儀中，調(diào)節(jié)不同的溫度恒溫提取一定時(shí)間。提取液冷卻至室溫后，離心分離15 min，測量提取液體積V。

1.5黃酮含量測定

移取浸提液0.50 mL于25.00 mL容量瓶中，按1.3操作后在510 nm處測定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算黃酮含量，研究浸提溫度、時(shí)間、溶劑濃度等對浸提效果的影響。

2　結(jié)果與討論

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1,線性方程：A=12.73C+0.0201，相關(guān)系數(shù)r2=0.9998，線性良好。

2.2溶劑浸提正交實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取1.0000 g桃葉粉末，置于錐形瓶中，以水浴加熱時(shí)間、乙醇濃度、料液比、提取溫度為實(shí)驗(yàn)因素，按照正交試驗(yàn)料液比加入一定量的提取溶劑，錐形瓶固定于水浴鍋中，恒溫加熱浸提一定時(shí)間。取出冷卻后，離心分離，取上層清液，測量提取液體積。移取提取液0.50 mL于25 mL容量瓶中，按1.3操作后在510 nm處測定吸光度,研究溶劑浸提影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示。

表1　水浴浸提黃酮正交實(shí)驗(yàn)

根據(jù)極差分析，以黃酮浸提率為評價(jià)指標(biāo)，提取條件影響因素依次為：料液比>乙醇濃度>浸提溫度>水浴時(shí)間。料液比對浸提率影響最大，而水浴加熱時(shí)間影響最小，最佳條件為A3B3C2D1。

驗(yàn)證試驗(yàn)：在水浴加熱40 min、乙醇濃度70%(φ)、料液比1:25(W/V)、浸提溫度30 ℃的條件下提取，黃酮的浸提率達(dá)到1.81%，高于表中任意一組實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2.3超聲輔助正交實(shí)驗(yàn)

以超聲時(shí)間、乙醇濃度、料液比、提取溫度為研究實(shí)驗(yàn)條件因素，具體如表2所示，其他操作與2.2相同。

表2　超聲輔助提取黃酮正交實(shí)驗(yàn)

根據(jù)極差分析，以黃酮浸提率為評價(jià)指標(biāo)，提取條件影響因素依次為：乙醇濃度>料液比>浸提溫度>超聲時(shí)間。乙醇濃度對浸提率的影響最大，超聲時(shí)間影響最小，最佳條件為A2B3C3D3。

驗(yàn)證試驗(yàn)：選擇70%(φ)乙醇為溶劑，控制料液比為1:30(W/V)、溫度為50 ℃的條件下超聲浸提30 min，黃酮的浸提率達(dá)到3.98%，高于表中任意一組實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2.4微波輔助正交實(shí)驗(yàn)

以微波時(shí)間、乙醇濃度、料液比、微波功率為研究實(shí)驗(yàn)條件因素，具體如表3所示，其他操作與2.2相同。

表3　微波輔助提取黃酮正交實(shí)驗(yàn)

續(xù)表3

840601204002.92940701252003.29K19.399.879.4210.37K210.549.919.739.75K39.559.7010.339.36極差R1.150.210.911.01主次順序A>D>C>B優(yōu)水平/優(yōu)組合A2B2C3D1

根據(jù)極差分析，以黃酮浸提率為評價(jià)指標(biāo)，提取條件影響因素依次為：微波時(shí)間>微波功率>料液比>乙醇濃度。微波時(shí)間對浸提率的影響最大，乙醇濃度影響最小，最佳條件為A2B3C3D1。

驗(yàn)證試驗(yàn)：選擇60%(V/V)乙醇為溶劑，控制料液比為1:30(W/V)、微波功率為200 W，

微波浸提30min，黃酮的浸提率達(dá)3.92%，高于表中任意一組實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

3　結(jié)　論

本文設(shè)計(jì)了多因素正交實(shí)驗(yàn)，對桃葉中黃酮提取效果的影響進(jìn)行了深入研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：溶劑浸提中，影響因素依次為：料液比>乙醇濃度>浸提溫度>水浴時(shí)間；超聲波輔助提取則為乙醇濃度>料液比>浸提溫度>超聲時(shí)間；微波提取則又為微波時(shí)間>微波功率>料液比>乙醇濃度。用70%乙醇作為浸提溶劑，料液比1:25，溫度控制在30 ℃，1次浸提40 min，桃葉黃酮提取率1.81%；超聲波輔助提取，料液比1:30，浸提溫度控制在50 ℃，提取30 min，用70%乙醇提取率最高達(dá)3.98%；微波輔助提取，料液比1:30，微波功率控制在200 W，用60%乙醇提取30 s，黃酮提取率3.92%。由此可見，純粹用溶劑提取，提取率較低，不到2%，采用超聲波或微波輔助提取，可達(dá)近4.0%，考慮成本因素，它們是非常有前途的提取方法。

[1]強(qiáng)志鵬,時(shí)吉萍.桃葉藥用臨床研究及其開發(fā)前景[J].甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1994,11(3):47.

[2]陳業(yè)高.植物化學(xué)成分[M]．北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2004：20．

[3]陳月容,劉勝家.桃樹葉水浸膏中化學(xué)成分的研究[J]．西安醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1983,4(2):149-151．

[4]閻智勇.中藥標(biāo)準(zhǔn)提取物在中藥現(xiàn)代化中的地位[J]．中藥材，2001,24(12):34-37．

Study on Extraction of Flavonoids in Peach Leaves

CHENJian-xin,WANGYan,QIANLin-lu

(School of Science and Chemical Engineering, Changzhou Institute of Technology, Jiangsu Changzhou 213002, China)

The extraction of flavonoids in peach leaves was studied. The factors, such as extraction temperature, time, solid-liquid ratio, ethanol concentration, extraction under ultrasonic or microwave, were studied were. The results indicated that the ranking of influence was: solid-liquid ratio>ethanol concentration>extraction temperature>time. Under ultrasonic the ranking was: ethanol concentration>solid-liquid ratio>extraction temperature>time. Under microwave the ranking was: time>microwave power> solid-liquid ratio> ethanol concentration. With 70% ethanol as extraction solvent, solid-liquid ratio 1:25, temperature 30 ℃, extraction time 40 min, the extraction rate was 1.81%. Under ultrasonic the rate was 3.98%, when the extraction condition was solid-liquid ratio 1:30, the temperature 50 ℃, extraction time 30 min, 70% ethanol. Under microwave the rate was 3.92%, when the extraction condition was solid-liquid ratio 1:30, microwave power 200 W, 60% ethanol, time 30 s. So extracted only by solvent the extraction rate was less than 2%. Under ultrasound or microwave the rate was nearly 4.0%.

peach leaf; flavonoid; extract; ethanol; ultrasonic; microwave

TQ914.1

A

1001-9677(2016)07-0088-03