CD24蛋白表達(dá)在術(shù)后放療宮頸癌患者預(yù)后中的意義

周發(fā)為，楊年紅，游文忠（湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院.檢驗(yàn)科，.婦科，.病理科，湖北 恩施 445000）

CD24蛋白表達(dá)在術(shù)后放療宮頸癌患者預(yù)后中的意義

周發(fā)為1，楊年紅2，游文忠3
（湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院1.檢驗(yàn)科，2.婦科，3.病理科，湖北 恩施 445000）

目的評(píng)價(jià)CD24蛋白表達(dá)在術(shù)后放療宮頸癌患者中的預(yù)后意義。方法免疫組織化學(xué)法檢測(cè)140例術(shù)后放療的宮頸癌患者癌組織中CD24蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果59例（42%）宮頸癌患者中CD24蛋白表達(dá)陽(yáng)性，單因素分析表明，CD24陽(yáng)性表達(dá)與局部區(qū)域無(wú)失敗生存率（P=0.022）、無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移生存率（P=0.000）和總生存率（P=0.005）呈顯著相關(guān)性。多元回歸分析發(fā)現(xiàn)CD24陽(yáng)性表達(dá)與無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移生存率（P=0.025）和總生存率（P=0.045）呈顯著相關(guān)性。單獨(dú)R T組CD24表達(dá)與LR FFS（P=0.020）呈顯著相關(guān)性，CR T組CD24表達(dá)與DMFS（P=0.000）呈顯著相關(guān)性。結(jié)論CD24表達(dá)是術(shù)后放療宮頸癌患者的獨(dú)立預(yù)后標(biāo)志物，且在術(shù)后輔助CR T和單獨(dú)R T治療中預(yù)后意義不同。制定宮頸癌患者個(gè)性化治療方案需參考患者CD24表達(dá)情況。

宮頸癌；放療；化療；手術(shù)；CD24

宮頸癌是全球女性第2大最常見(jiàn)的惡性腫瘤，其治療方案主要是外科切除結(jié)合放療（radiotherapy，RT）和放化療（chemoradiotherapy，CRT）[1]。盡管子宮切除術(shù)能夠控制盆腔疾病進(jìn)展，提高患者生存率，但仍有難以治愈的病例，出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)和或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致患者死亡。因此，早期篩選難以治愈宮頸癌患者，并進(jìn)行針對(duì)性處理，這對(duì)宮頸癌治療具有十分重要的意義。p53狀態(tài)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)、人乳頭狀瘤病毒DNA狀態(tài)、c-Met/HGF受體過(guò)表達(dá)、環(huán)氧合酶-2過(guò)表達(dá)、磷酸化AKT表達(dá)、腫瘤內(nèi)氧化（tumor oxygenation）狀態(tài)和低氧誘導(dǎo)因子1α等因素均與宮頸癌預(yù)后密切相關(guān)[2-4]。

CD24最初被認(rèn)為是人體內(nèi)連接糖基化磷脂肪酰肌醇的B細(xì)胞相關(guān)抗原，也被用作B細(xì)胞和胸腺細(xì)胞標(biāo)志物。隨后研究發(fā)現(xiàn)CD24在卵巢癌、食道癌、結(jié)腸癌、膽管癌、肺癌、胃癌、腎癌、膀胱癌、子宮內(nèi)膜癌和乳腺癌等多種人類癌癥中異常表達(dá)，且與患者生存率較短相關(guān)[5-6]。Kwon等[7]研究表明，CD24蛋白表達(dá)是單獨(dú)接受根治性放療的子宮頸鱗狀細(xì)胞癌（cervical squamous cell carcinoma，CSCC）患者無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移生存率（distant metastasis-free survival，DMFS）的獨(dú)立預(yù)后因子。但目前尚未見(jiàn)CD24蛋白表達(dá)在術(shù)后放療的宮頸癌患者預(yù)后中意義的研究報(bào)道。

1　資料與方法

1.1研究對(duì)象

2005年1月-2012年12月間在湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院住院治療的早期宮頸癌患者177例?；颊咝懈涡宰訉m切除術(shù)后進(jìn)行RT或CRT治療。37例患者石蠟塊因保管不善而不能使用，其余140例患者組織均被納入本次研究。所有患者均行根治性子宮切除術(shù)及雙側(cè)盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)。術(shù)后54例患者(39%)接受CRT，86例患者(61%)接受RT治療（見(jiàn)表1）。

1.2術(shù)后治療

子宮切除術(shù)后，所有患者均接受全盆腔放療（whole pelvic radiotherapy，WpRT）。WpRT采用盆腔四野(前/后及左/右野)盒式照射，共照射25～28次，總劑量45.0～50.4Gy。盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、切緣癌陽(yáng)性、宮旁受累和腫塊直徑大的患者接受輔助化療。54例接受CRT的患者中，15例在RT過(guò)程中每周服用順鉑，連續(xù)6個(gè)療程；17例每3周服用氟尿嘧啶和順鉑，持續(xù)3個(gè)療程；22例在RT治療前每4周服用氟尿嘧啶加環(huán)磷酰胺，持續(xù)3個(gè)療程。

1.3免疫組織化學(xué)

CD24鼠抗人單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司，免疫組織化學(xué)Sp試劑盒和DAB顯色劑購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。采用辣根-過(guò)氧化酶連接（Sp二步法）法對(duì)140例宮頸癌組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測(cè)，DAB免疫組織化學(xué)顯色試劑盒顯色。CD24一抗稀釋濃度為1∶50，以PBS代替1抗作為陰性對(duì)照，以已知陽(yáng)性宮頸癌切片為陽(yáng)性對(duì)照。以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。按照細(xì)胞著色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)建立評(píng)定方法，隨機(jī)計(jì)數(shù)5個(gè)高借視野，每例標(biāo)本至少評(píng)價(jià)1000個(gè)細(xì)胞，染色強(qiáng)度：輕度著色1分，中度著色2分，強(qiáng)染色3分，陽(yáng)性細(xì)胞<10%為1分；l0%≤陽(yáng)性細(xì)胞<50%為2分；50%≤陽(yáng)性細(xì)胞<80%為3分；≥80%為4分。將染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比率相乘得到每個(gè)病例染色的總分，總分1~3分為陰性，總分4~12分為陽(yáng)性。

表1　子宮切除術(shù)后CRT治療組和RT治療組患者一般資料

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，χ2檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)計(jì)算統(tǒng)計(jì)顯著性。數(shù)據(jù)用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或Mann-WhitneyU檢驗(yàn)比較組間平均值差異。局部復(fù)發(fā)是指局部或區(qū)域性復(fù)發(fā)和/或因腫瘤而死亡。Kaplan-Meier法預(yù)測(cè)生存率，并使用時(shí)序檢驗(yàn)法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。所有統(tǒng)計(jì)均為雙側(cè)檢驗(yàn)，P<0.05為有差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1免疫組織化學(xué)結(jié)果

140例宮頸癌患者中，59例(42%)患者CD24陽(yáng)性表達(dá)（圖1）。CD24表達(dá)與宮旁受累（P=0.022）及盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.031）顯著相關(guān)，而與患者年齡（P=0.473），腫瘤直徑（P=0.582），F(xiàn)IGO分期(P= 0.367)，切緣受累（P=0.266）或淋巴管浸潤(rùn)（P= 0.315）無(wú)相關(guān)性（見(jiàn)表2）。

圖1　CD24蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá) （×100）

2.2患者生存率

表2　不同臨床特征CD24表達(dá)陽(yáng)性率的比較　例（%）

表3　宮頸癌患者預(yù)后影響因素的單因素分析

隨訪期間共16例患者死亡（平均84.1月；范圍14～161個(gè)月）。9例(6%)患者局部復(fù)發(fā)，20例患者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（14%）。10年局部區(qū)域無(wú)失敗生存率（improve locoregional failure-free survival，LRFFS）、DMFS率和總生存率（overall survival，OS）分別為93%、84%和86%。宮旁受累（P=0.000）、切緣（P= 0.001）和CD24陽(yáng)性（P=0.022）與LRFFS呈顯著相關(guān)性。宮旁受累（P=0.000）、淋巴管浸潤(rùn)（P=0.013）、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.000）及CD24陽(yáng)性（P=0.000）與DMFS顯著相關(guān)。宮旁受累（P=0.011），盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.021）及CD24陽(yáng)性（P=0.005）與OS呈顯著相關(guān)性（見(jiàn)表3）。Cox多元回歸分析表明CD24陽(yáng)性與DMFS（P=0.025）和OS（P=0.045）呈顯著相關(guān)性，但CD24陽(yáng)性與LRFFS（P=0.253）之間無(wú)相關(guān)性（見(jiàn)表4）。

2.3CD24蛋白表達(dá)在不同術(shù)后治療方式患者中預(yù)后價(jià)值的比較

根據(jù)術(shù)后治療方式（CRT與單獨(dú)RT）將患者分為兩組。CRT組中26例（48%）患者CD24陽(yáng)性表達(dá)，單獨(dú)RT組中33例（38%）患者CD24陽(yáng)性表達(dá)，CRT組和單獨(dú)RT組間CD24表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.254）。Kaplan-Meier生存曲線分析表明，CRT組CD24表達(dá)與DMFS（P=0.000，圖2A）呈顯著相關(guān)性，但與LRFFS（P=0.442）無(wú)相關(guān)性；單獨(dú)RT組CD24表達(dá)與LRFFS（P=0.020，圖2B）呈顯著相關(guān)性，而與DMFS（P=0.527）無(wú)相關(guān)性。

表4　COX多元回歸分析影響宮頸癌患者預(yù)后的因素

圖2　CD24蛋白表達(dá)與不同術(shù)后治療方式患者生存期的關(guān)系

3　討論

宮頸癌根治術(shù)是早期宮頸癌治療的首選方法，根治術(shù)后患者預(yù)后與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、手術(shù)切緣癌陽(yáng)性、宮旁受累、淋巴管浸潤(rùn)、間質(zhì)浸潤(rùn)深度和腫瘤大小等因素有關(guān)[8]。研究證明與術(shù)后無(wú)進(jìn)一步治療或單獨(dú)RT治療相比，輔助RT和CRT可以改善術(shù)后預(yù)示預(yù)后不佳患者局部控制和生存率[9]。RT療法聯(lián)合順鉑為主的化療可以明顯改善切緣癌陽(yáng)性及盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間和總體生存時(shí)間，在宮旁受累的高風(fēng)險(xiǎn)患者中尤為明顯。但即使經(jīng)術(shù)后輔助治療，仍有約16%的患者發(fā)生局部和遠(yuǎn)處復(fù)發(fā)。研究表明，宮旁受累和切緣狀態(tài)是宮頸癌局部復(fù)發(fā)和盆腔淋巴結(jié)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的重要預(yù)后因素。

目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種與宮頸癌患者預(yù)后有關(guān)的標(biāo)志物。CD24最初被認(rèn)為是人體內(nèi)聯(lián)接糖基化磷脂肪酰肌醇的B細(xì)胞相關(guān)抗原，也被稱為p選擇素配體，主要表達(dá)于血小板和內(nèi)皮細(xì)胞上。在多種人類腫瘤中，CD24呈異常高表達(dá)，與患者存活時(shí)間較短有關(guān)。CD24/p選擇素結(jié)合通路在腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散中非常重要，可以促進(jìn)血小板和內(nèi)皮細(xì)胞相互作用[10]。CD24表達(dá)的腫瘤細(xì)胞更容易2次擴(kuò)散，形成血小板活化血栓，或通過(guò)p選擇素黏附到內(nèi)皮細(xì)胞[11]。

多因素分析表明，行子宮切除術(shù)的宮頸癌患者CD24表達(dá)與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)，但與局部復(fù)發(fā)不相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CD24表達(dá)與宮旁受累和盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，提示CD24表達(dá)可能與局部侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移都有關(guān)。Choi等[12]指出CD24高表達(dá)和缺少頂端定位分布是尿道癌患者間質(zhì)浸潤(rùn)和腫瘤等級(jí)較高的標(biāo)志。Chou等[13]表明細(xì)胞質(zhì)CD24表達(dá)與彌漫型胃癌侵襲性和較差預(yù)后有關(guān)。

此外，本研究還分析了CD24表達(dá)在不同術(shù)后治療方式患者中預(yù)后價(jià)值的比較。Kaplan-Meier分析表明CRT治療組CD24表達(dá)與DMFS呈顯著相關(guān)性，但與LRFFS無(wú)相關(guān)性。而單獨(dú)RT組CD24表達(dá)與LRFFS呈顯著相關(guān)性，但與DMFS無(wú)相關(guān)性。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、宮旁受累或切緣癌陽(yáng)性患者通常使用術(shù)后輔助CRT療法。本組CRT治療患者宮旁受累及盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率更高，且不良預(yù)后因素比單獨(dú)RT組更多。癌癥轉(zhuǎn)移需要腫瘤細(xì)胞最初侵入間質(zhì)，滲透至脈管，然后黏附到靶器官等多個(gè)步驟。研究發(fā)現(xiàn)表明CD24表達(dá)涉及宮頸癌進(jìn)展的多個(gè)步驟，包括侵襲發(fā)生和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。此外，CD24也是單獨(dú)RT組LRFFS預(yù)測(cè)因子，或CRT組DMFS預(yù)測(cè)因子，但每組中都有一些例外。因此，雖然這些研究結(jié)果差異明顯，但在應(yīng)用到臨床實(shí)踐之前仍需進(jìn)行大樣本研究。

總之，CD24表達(dá)是術(shù)后放療宮頸癌患者的獨(dú)立預(yù)后標(biāo)志物，本研究揭示了CD24表達(dá)在術(shù)后輔助CRT和單獨(dú)RT治療組中不同的預(yù)后意義。因此，根據(jù)CD24表達(dá)情況對(duì)患者進(jìn)行分組，并制定針對(duì)性治療方案可能具有重要臨床意義。

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（張西倩編輯）

Prognostic significance of CD24 protein expression in cervical carcinoma patients treated with adjuvant radiotherapy after radical hysterectomy

Fa-wei Zhou1，Nian-hong Yang2，Wen-zhong You3
（1.Department of Clinical Laboratory，2.Department of Obstetrics and Gynecology，3.Department of Pathology，Minda Hospital，Hubei Institute for Nationalities，Enshi，Hubei 445000，China）

Objective To evaluate the prognostic significance of CD24 protein overexpression in patients treated with post-operative radiotherapy（RT）after surgery.Methods We determined the CD24 expression status of 140 patients with cervical carcinoma treated with RT alone or with chemoradiotherapy（CRT）after radical hysterectomy procedures.Results CD24 expression was detected in 59 patients（42%）and was significantly associated with locoregional failure-free survival（LRFFS）（P=0.022），distant metastasis-free survival（DMFS）（P=0.000），and overall survival（OS）（P=0.005）.In the multivariate analysis，CD24 positivity was also significantly associated with DMFS（P=0.025）and OS（P=0.045）.CD24 expression was associated with DMFS（P=0.000）in the CRT group. However，CD24 expression was associated with LRFFS（P=0.020）in the RT alone group.Conclusions CD24 expression is an independent prognostic marker in patients with cervical squamous cell carcinoma，even with post-hysterectomy adjuvant treatment.This study revealed a different prognostic role for CD24 expression in adjuvant CRT and RT alone treatment groups after surgery.New therapeutic strategies targeting CD24 expression stratified by subgroups might have important clinical implications.

cervical carcinoma；radiotherapy；chemotherapy；surgery；CD24

R 737.33

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.04.008

1005-8982（2016）04-0039-05

2015-10-12

游文忠，E-mail：744377523@qq.com，Tel：18907263868