蒙古族生物樣本庫(kù)的標(biāo)準(zhǔn)化建立及質(zhì)量鑒定

房 君，斯琴，沙日耐，白薩日娜，納貢畢力格

?

·轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)·

蒙古族生物樣本庫(kù)的標(biāo)準(zhǔn)化建立及質(zhì)量鑒定

房 君，斯琴，沙日耐，白薩日娜，納貢畢力格

目的 建立規(guī)范的蒙古族生物樣本庫(kù)，收集高質(zhì)量的樣本用于牛皮癬、高血壓、失眠、抑郁及腫瘤心身疾病的機(jī)制研究。方法 籌備建立樣本庫(kù)所需資金并通過(guò)倫理委員會(huì)審查，建立樣本收集、儲(chǔ)存的標(biāo)準(zhǔn)操作流程；收集相應(yīng)臨床患者信息及符合實(shí)驗(yàn)要求的血液樣本并進(jìn)行低溫儲(chǔ)存；對(duì)生物樣本進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制。結(jié)果 建立了標(biāo)準(zhǔn)的血液庫(kù)操作流程，2015年1月開(kāi)始建庫(kù)。建庫(kù)6個(gè)月共收集患者血液樣本562例。隨機(jī)抽取樣本質(zhì)量控制良好。結(jié)論 血液樣本質(zhì)量可靠并附有完整的臨床資料，可以充分滿足科學(xué)研究的需要。

心身疾?。簧飿颖編?kù)；標(biāo)準(zhǔn)化；質(zhì)量鑒定

［Abstract］Objective The estab1ishment of standardized Mongo1ia peop1e's biobank，the co11ection of high qua1ity specimens used in psoriasis，hypertension，insomnia，depression and cancer，and other psychosomatic diseases.Methods Biobank funds needed for the estab1ishment of the preparatory and got the ethics committee a11owed.To estab1ish the standard operation procedure of samp1e co11ection and so on and to co11ect the information of the corresponding c1inica1 patients and the b1ood samp1es for fina11y frozen storage are needed strict1y qua1ity contro1 on bio1ogica1 samp1es. Results This study estab1ished a standard b1ood biobank operation process，construction began in January 2015.We have co11ected the b1ood samp1es of a tota1 of 562 patients for more than 6 months. Conclusion Random1y se1ected samp1e to undergo a qua1ity contro1 test.The resu1t showed that the co11ected b1ood samp1es with re1iab1e qua1ity and comp1ete c1inica1 data.It can fu11y meet the needs of scientific research.

［Key words］Psychosomatic diseases；Biobank；Standardization；Qua1ity identification

生物樣本庫(kù)又稱生物銀行，主要是指收集和保存用于各種研究而非用于器官移植的人類各種生物樣本，包括組織、全血、血漿、血清、DNA、RNA、生物體液，或經(jīng)初步處理過(guò)的生物樣本，以及與這些生物樣本相關(guān)的各種臨床資料、病理、治療與隨訪等信息數(shù)據(jù)，是按嚴(yán)格的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)化收集、運(yùn)輸、存儲(chǔ)、管理和使用的資源庫(kù)［1-2］。自20世紀(jì)80年代以來(lái)，生物樣本庫(kù)在全球范圍內(nèi)得到了空前發(fā)展，廣泛用于臨床與基礎(chǔ)研究、相關(guān)藥物靶點(diǎn)與個(gè)體化治療方面［3-4］。目前，許多研究是以規(guī)范化診治的多中心臨床隊(duì)列建立為基礎(chǔ)，以獲得高質(zhì)量樣本和系統(tǒng)臨床隨訪資料為核心。而轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)已成為基礎(chǔ)研究與臨床實(shí)踐兩者之間的紐帶，以臨床需求為指引，通過(guò)研究探討發(fā)病機(jī)制和疾病相關(guān)基因，進(jìn)一步篩選診斷和治療靶點(diǎn)從而應(yīng)用于臨床［5］。內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院的蒙古族生物樣本庫(kù)的建立，更是為發(fā)展具有我國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的綜合性轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究提供資源。作者介紹該生物樣本庫(kù)在建立過(guò)程中所積累的經(jīng)驗(yàn)與不足。

1　資料與方法

1.1資金、設(shè)備與人員培訓(xùn) 通過(guò)文獻(xiàn)查閱以及赴上海市參加生物樣本庫(kù)研討會(huì)議后，建立生物樣本庫(kù)流程，購(gòu)買樣本處理設(shè)備及液氮罐和-80℃冰箱；聘用生物學(xué)專業(yè)人員，經(jīng)技術(shù)培訓(xùn)，專職負(fù)責(zé)樣本庫(kù)的運(yùn)轉(zhuǎn)和維護(hù)。生物樣本庫(kù)初步建立后，由內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院心身醫(yī)學(xué)科提供日常運(yùn)行資金和管理負(fù)責(zé)日常工作。

1.2政策與患者知情同意 建立生物樣本庫(kù)及知情同意書(shū)需通過(guò)內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院臨床機(jī)構(gòu)倫理委員會(huì)審查，嚴(yán)格按照赫爾辛基宣言保護(hù)患者利益及隱私。本生物樣本庫(kù)建立的原則是非盈利性的，樣本及臨床資料信息以醫(yī)學(xué)研究為目的，使用樣本過(guò)程中要求研究者保證合法和合理。患者知情同意書(shū)主要是征求患者同意采取血液樣本及相關(guān)臨床信息。

1.3臨床信息收集 收集對(duì)象為內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院心身醫(yī)學(xué)科就診的心身疾病患者，收集患者臨床信息包括年齡、性別、民族、住址、聯(lián)系方式、家族史、心身互動(dòng)治療前的治療情況、心身互動(dòng)治療開(kāi)始及截止日期、治療反應(yīng)、轉(zhuǎn)歸及近期檢查結(jié)果和后期的隨訪報(bào)告。

1.4血液樣本標(biāo)準(zhǔn)化操作流程 在接受蒙醫(yī)心身互動(dòng)治療前、后分別收集患者血液。采集患者早晨空腹血液，每個(gè)患者根據(jù)病種采集含抗凝劑1～2管和不含抗凝劑1～2管，每管3～4 mL經(jīng)2 100 r/min離心15 min后分裝血漿和血清，并通過(guò)細(xì)胞裂解液提取白細(xì)胞后分別裝入凍存管并保存在-80℃冰箱，整個(gè)過(guò)程要求在2 h內(nèi)完成。

1.5質(zhì)量控制 生物樣本庫(kù)的質(zhì)量保證體現(xiàn)在樣本采集、處理的每一步驟中，如果能夠嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作流程操作，則能夠保證樣本質(zhì)量。生物樣本質(zhì)量控制主要包括：①取樣—分裝—存儲(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)化流程的控制；②存儲(chǔ)溫度24 h動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)及記錄；③存儲(chǔ)樣本定期抽檢。對(duì)在庫(kù)的樣本質(zhì)量控制鑒定采用隨機(jī)抽樣方式，并分別進(jìn)行臨床資料復(fù)查和樣本的DNA、RNA質(zhì)量檢測(cè)。使用血液DNA提取試劑盒［天根生化科技（北京）有限公司］按照說(shuō)明書(shū)提取DNA，在1%瓊脂凝膠上進(jìn)行電泳檢測(cè)其完整性；使用生物基因通用RNA提取分離試劑盒提取RNA并檢測(cè)完整性。

1.6樣本資源的使用 申請(qǐng)使用者在申請(qǐng)時(shí)需填寫申請(qǐng)書(shū)，要求申請(qǐng)樣本的研究者必須有一定的資質(zhì)，有能力妥善使用樣本，減少不必要的浪費(fèi)。樣本庫(kù)的資源屬于重要的臨床和基礎(chǔ)研究資源，主要提供給內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院心身醫(yī)學(xué)科科研組及其他一些研究機(jī)構(gòu)。

2　結(jié)果

2.1通過(guò)知情同意書(shū)并建立標(biāo)準(zhǔn)操作流程 本研究的建庫(kù)申請(qǐng)及知情同意書(shū)通過(guò)了內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院臨床機(jī)構(gòu)倫理委員會(huì)審查；根據(jù)國(guó)內(nèi)外血液庫(kù)經(jīng)驗(yàn)，并結(jié)合本院實(shí)際情況，建立了標(biāo)準(zhǔn)的收集工作流程（圖1），2015年1月開(kāi)始建庫(kù)。

圖1　生物樣本庫(kù)工作流程

2.2收集心身疾病血液樣本 生物樣本庫(kù)建庫(kù)6個(gè)月共收集562例的血液樣本，其中牛皮癬295例（52.5%）、高血壓35例（6.2%）、食管癌82例（14.6%）、胃癌52例（9.3%）、失眠32例（5.7%）和抑郁66例（11.7%）。根據(jù)各個(gè)病種科研目的不同，又將血液樣本分類收集，其中全血562份、血清428份、血漿295份、白細(xì)胞562份，血漿倒去后剩余血細(xì)胞159份。所有樣本收集前患者均簽署了知情同意書(shū)。

2.3樣本質(zhì)量檢測(cè) 收集6個(gè)月后對(duì)樣本進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，隨機(jī)選取20例入庫(kù)樣本病例，對(duì)病例中的臨床資料進(jìn)行復(fù)查（表1），病例資料中均含有所查的重要臨床資料。生物質(zhì)量檢測(cè)中隨機(jī)選取6例全血及白細(xì)胞樣本，選擇入庫(kù)儲(chǔ)存6個(gè)月、5個(gè)月、4個(gè)月、3個(gè)月、2個(gè)月和1個(gè)月的全血和白細(xì)胞分別提取DNA 和RNA。DNA電泳圖顯示無(wú)明顯拖尾現(xiàn)象（圖2），RNA電泳圖顯示28 s、18 s條帶清晰可見(jiàn)（圖3）。

表1　20例生物樣本庫(kù)臨床信息復(fù)查

圖2　DNA電泳圖

圖3　RNA電泳圖

3　討論

冰島健康數(shù)據(jù)庫(kù)是全球建設(shè)最早的生物樣本庫(kù)，始于1996年，擁有一半以上成年人口的基因型和醫(yī)療數(shù)據(jù)，目的在于鑒別常見(jiàn)病的遺傳成分；英國(guó)生物樣本庫(kù)則正式啟動(dòng)于2005年，主要收集普通人群樣本用于研究“遺傳和復(fù)雜環(huán)境下的患病危險(xiǎn)”［6］；人類癌癥生物樣本庫(kù)由美國(guó)國(guó)立癌癥研究所資助，專供研究使用的高質(zhì)量生物樣本［7］。目前我國(guó)的生物樣本庫(kù)建設(shè)工作也開(kāi)展得如火如荼：由深圳華大基因研究院運(yùn)營(yíng)的國(guó)家基因庫(kù)，從事收集和保存高質(zhì)量、可溯源的生物資源樣本［8］；泰州人群隊(duì)列樣本庫(kù)已經(jīng)搜集15萬(wàn)人的健康數(shù)據(jù)庫(kù)，并開(kāi)展了相關(guān)分子流行病學(xué)調(diào)查，特別關(guān)注中國(guó)人群易患的重大慢性疾?。?］。隨著社會(huì)發(fā)展，生物樣本庫(kù)在現(xiàn)代生物科技領(lǐng)域中已經(jīng)占據(jù)了非常重要的地位。

近年來(lái)，蒙醫(yī)心身互動(dòng)療法在治療各種疑難雜癥方面有非常好的療效，它以蒙醫(yī)理論為指導(dǎo)，以國(guó)學(xué)傳統(tǒng)文化為背景，按照東方人的文化特點(diǎn)和思維模式制訂本土化心理治療技術(shù)，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)、心理學(xué)知識(shí)的同時(shí)運(yùn)用現(xiàn)代光電聲像技術(shù)手段，在潛移默化中對(duì)患者群體進(jìn)行催眠、暗示、分析、認(rèn)知、行為、音樂(lè)、疏導(dǎo)的“多維立體”“綜合調(diào)理”。治療方法獨(dú)特，作為廉價(jià)而本土化綠色治療方法，深受患者的認(rèn)可［10］，但其作用的科學(xué)機(jī)制仍不清楚。因此，建立以心身疾病為主的樣本庫(kù)可最大限度地保護(hù)利用接受該療法的心身疾病患者的血液樣本，從而對(duì)促進(jìn)蒙醫(yī)心身互動(dòng)療法的研究具有重要意義。高質(zhì)量、標(biāo)準(zhǔn)化收集樣本是生物樣本庫(kù)的核心［11-12］。要保證高質(zhì)量就要建立嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)的收集過(guò)程和標(biāo)準(zhǔn)化的質(zhì)量檢測(cè)。樣本庫(kù)自建庫(kù)以來(lái)一直秉承這一原則，并于建庫(kù)6個(gè)月后隨機(jī)選取了6例全血及白細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，提取的DNA電泳圖完整清晰無(wú)明顯拖尾現(xiàn)象，說(shuō)明保存完好，無(wú)降解；RNA條帶清晰可見(jiàn)，說(shuō)明完整性好，無(wú)明顯降解，可滿足大部分實(shí)驗(yàn)要求。對(duì)20例入庫(kù)病例資料復(fù)查結(jié)果顯示，一些重要的臨床信息記錄完整。樣本庫(kù)質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果顯示，蒙古族生物樣本庫(kù)儲(chǔ)存的血液樣本是高質(zhì)量的，而且附有完整的臨床資料可充分滿足科研需求，具有豐富臨床信息的樣本有利于分子信息與臨床意義之間的研究。但是，根據(jù)腫瘤生物樣本收集的標(biāo)準(zhǔn)和要求［13-14］，結(jié)合現(xiàn)在科室建設(shè)的特殊性和局限性導(dǎo)致組織樣本很難收集；而且樣本庫(kù)軟件系統(tǒng)沒(méi)有和醫(yī)院信息系統(tǒng)對(duì)接，因此資料查詢比較困難。作為一個(gè)以少數(shù)民族為特色的生物樣本庫(kù)，也采取一些特殊措施，將臨床信息采集表以及相關(guān)的心理專業(yè)測(cè)試題目翻譯為蒙古文以便患者閱讀和配合。心身疾病的患者容易激動(dòng)或者產(chǎn)生抵觸心理，所以要求接診的醫(yī)生應(yīng)具備一定的心理咨詢能力。為了防止患者治療后的脫落情況，科室推行一系列方便患者就診的策略。目前，蒙古族生物樣本庫(kù)的建設(shè)處于起步階段，還有許多需要完善和改進(jìn)的地方，繼續(xù)努力使之成為全國(guó)乃至全球認(rèn)可的高質(zhì)量和標(biāo)準(zhǔn)化的生物樣本庫(kù)。

［1］Ass1aber M，Zat1ouka1 K.Biobanks：transnationa1，European and g1oba1 networks［J］.Brief Funct Genomic Proteomic，2007，6（3）：193-201.

［2］Sgaier SK，Jha P，Mony P，et a1.Pub1ic hea1th.Biobanks in deve1oping countries：needs and feasibi1ity［J］.Science，2007，318（5853）：1074-1075.

［3］Meir K，Gaffney EF，Simeon-Dubach D，et a1.The human face of biobank networks for trans1ationa1 research［J］. Biopreserv Biobank，2011，9（3）：279-285.

［4］Compton CC.The surgica1 specimen is the persona1ized part of persona1ized cancer medicine［J］.Ann Surg Onco1，2009，16（8）：2079-2080.

［5］陳志南.分子醫(yī)學(xué)與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)的未來(lái)［J］.轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)雜志，2012，1（2）：65-68.

［6］Cassidy S，Chau JY，Catt M，et a1.Cross-sectiona1 study of diet，physica1 activity，te1evision viewing and s1eep duration in 233 110 adu1ts from the UK Biobank；the behavioura1 phenotype of cardiovascu1ar disease and type 2 diabetes［J］.BMJ Open，2016，6（3）：e010038.

［7］李怡，張換敬，劉國(guó)彥，等.生物樣本信息資源庫(kù)的國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展［J］.中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)，2012，7（5）：369-372.

［8］張勇，李啟沅，王縣，等.國(guó)家基因庫(kù)概述［J］.轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究：電子版，2014，4（4）：111-117.

［9］鄭培永，楊佳泓，范錦立，等.生物樣本庫(kù)［J］.科學(xué)，2014，66（3）：26-29.

［10］納貢畢力格，阿茹娜，包淑芝，等.蒙醫(yī)心身醫(yī)學(xué)互動(dòng)療法應(yīng)用研究［J］.世界中醫(yī)藥，2012，7（增刊）：74-75.

［11］季加孚.生物樣本庫(kù)的能力建設(shè)與最佳實(shí)踐［M］.北京：科學(xué)出版社，2013：2-4.

［12］Shabihkhani M，Lucey GM，Wei B，et a1.The procurement，storage，and qua1ity assurance of frozen b1ood and tissue biospecimens in patho1ogy，biorepository，and biobank settings［J］.C1in Biochem，2014，47（4/5）：258-266.

［13］林旋豪，王少洪，吳智勇，等.潮汕沿海地區(qū)食管癌樣本庫(kù)的建立及其應(yīng)用［J］.中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)，2015，10 （6）：503-504，521.

［14］于穎彥.我國(guó)胃腸道腫瘤生物樣本庫(kù)建設(shè)與發(fā)展15年回顧［J］.中國(guó)腫瘤臨床，2016，43（1）：6-10.

Standardization establishment and quality identification of the biobank of Mongolia PeoPle

FANG Jun1，Siqin2，Sharinai1，BAI Sarina1，Nagongbilige1
（1.Department of Psychosomatic Medicine，Inner Mongo1ia Internationa1 Mongo1ian Hospita1，Huhot Inner Mongo1ia 010065，China；2.Department of Research，Inner Mongo1ia Internationa1 Mongo1ian Hospita1，Huhot Inner Mongo1ia 010065，China）

R-05

B

2095-3097（2016）03-0134-04

10.3969/j.issn.2095-3097.2016.03.002

國(guó)家民族醫(yī)藥重點(diǎn)?？平ㄔO(shè)項(xiàng)目（ZP0503MZ022）；內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)項(xiàng)目（GJMY-201512）

010065內(nèi)蒙古呼和浩特，內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院心身醫(yī)學(xué)科（房 君，沙日耐，白薩日娜，納貢畢力格），科研部（斯琴）

納貢畢力格，E-mai1：781871909@qq.com

（2016-03-19 本文編輯：張?jiān)谖模?/p>