蘆丁-卵磷脂復(fù)合物的理化性質(zhì)研究

耿　升，張　敏，楊　麗，馬漢軍，莫海珍，婁文娟

（河南科技學(xué)院食品學(xué)院，河南新鄉(xiāng)　453003）

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蘆丁-卵磷脂復(fù)合物的理化性質(zhì)研究

耿升，張敏，楊麗，馬漢軍，莫海珍，*婁文娟

（河南科技學(xué)院食品學(xué)院，河南新鄉(xiāng)453003）

蘆丁具有較強的藥理活性、毒性低，廣泛存在于植物界，但其脂溶性低，使其應(yīng)用受限。采用溶劑法制備蘆丁-卵磷脂復(fù)合物，并采用紫外（UV）、紅外（IR）、掃描電子顯微鏡（SEM）、差示量掃描（DSC）、X-射線衍射（XRD）等波譜手段對該復(fù)合物理化性質(zhì)進行研究。結(jié)果表明，蘆丁與大豆磷脂復(fù)合后，其物相發(fā)生了重大改變，蘆丁以無定形狀態(tài)分散于卵磷脂中。在25℃正辛醇中，復(fù)合物的溶解度為31.240 μg/mL，而蘆丁單體的溶解度僅有0.097 μg/mL，溶解性有顯著提高。

蘆??；卵磷脂；復(fù)合物；理化性質(zhì)

蘆丁是廣泛分布在自然界植物中一種具有代表性的黃酮類化合物，具有消炎、抗氧化、延緩衰老、抗癌等多種生理功效［1-3］。研究表明，槐花具有的涼血止血、清肝瀉火、祛痰止咳等多種功效，都與其含有的蘆丁有很大關(guān)系［4］。這些特性使其在功能性食品、生物制藥方面等具有巨大發(fā)展前景。因此，蘆丁受到國內(nèi)外學(xué)者的廣泛研究，但脂溶性低成為限制其廣泛應(yīng)用的主要原因。

卵磷脂（Lecithin）是一類存在于生物界的含磷脂類物質(zhì)，其對細胞的維持生物活力至關(guān)重要，在人體新陳代謝、增強免疫力等方面更是不可或缺［5-8］。磷脂既具有親水性，又具有疏水性，其中親水部分是磷酸、膽堿，而疏水部分是脂肪酸的烴基，常被用作乳化劑、包埋劑［9-10］。目前，商業(yè)磷脂產(chǎn)品主要來源于蛋黃和大豆。蛋黃中磷脂雖然含量比大豆高，但高純度蛋黃卵磷脂的獲取成本較高，且大豆磷脂與蛋黃卵磷脂相比，不含膽固醇，含有大量不飽和脂肪酸，易于阻止膽固醇在血管中的沉積，所以在食品和藥品生產(chǎn)上多使用大豆磷脂［11-12］。

磷脂復(fù)合物一般指在非質(zhì)子傳遞體系溶劑中，藥物與磷脂以一定配比關(guān)系結(jié)合而形成的復(fù)合物。研究發(fā)現(xiàn)，多種黃酮類化合物和卵磷脂都有不一般的親和力，二者很容易形成復(fù)合物，并可能表現(xiàn)出與母體不同的理化性質(zhì)［13-15］，如脂溶性明顯增強，更便于在機體內(nèi)發(fā)揮作用，有效促進藥物的吸收，最大限度地發(fā)揮藥物的利用效率［16-19］。因此，本研究擬制備蘆丁-卵磷脂復(fù)合物，并通過多種手段對該復(fù)合物的理化性質(zhì)進行研究。

1　材料與儀器

1.1材料與試劑

蘆丁，上海阿拉丁試劑公司提供；卵磷脂，上海生工生物工程有限公司提供（來自大豆）；甲醇，上?；裟犴f爾貿(mào)易有限公司提供（色譜級）；其他試劑皆為分析純試劑。

1.2儀器

電子天平，上海梅特勒-托利多儀器有限公司產(chǎn)品；磁力加熱攪拌器，江蘇中大儀器廠提供；TU-1810PC型紫外-可見分光光度計，北京普析通用公司產(chǎn)品；TENSOR 27型傅立葉紅外光譜儀，德國Bruker公司產(chǎn)品；Quanta 200型掃描電子顯微鏡，美國FEI公司產(chǎn)品；Q200型差示量熱掃描分析儀，美國TA公司產(chǎn)品；D8型X-衍射，德國Bruker公司產(chǎn)品；WFJ-7200型可見光分光光度計，上海龍尼柯儀器有限公司產(chǎn)品；1260型高效液相色譜，美國Agilent公司產(chǎn)品；超純水機，鄭州金水儀器有限公司產(chǎn)品。

2　試驗方法

2.1蘆丁-卵磷脂復(fù)合物制備

精確稱取400 mg蘆丁和800 mg卵磷脂，并用300 mL四氫呋喃溶解，用封口膜將燒杯封住，在室溫下磁力攪拌24 h，靜置1 h，取上清液并在通風(fēng)櫥中進行70℃水浴，使溶劑完全揮發(fā)，移至干燥處冷卻至常溫，對燒杯底部淡黃色固體進行收集，即為所制備蘆丁-卵磷脂復(fù)合物。

2.2蘆丁及卵磷脂物理混合物制備

精密稱取500 mg蘆丁和1 000 mg卵磷脂，在研缽中均勻研碎，制得蘆丁與卵磷脂的物理混合物。

2.3紫外光譜

分別稱取蘆丁、卵磷脂、蘆丁與卵磷脂的復(fù)合物及其物理混合物各2 mg，配成10 mL溶液，稀釋一定倍數(shù)之后，于220～400 nm波長范圍內(nèi)進行掃描。

2.4紅外光譜

取適量蘆丁、卵磷脂、蘆丁與卵磷脂的復(fù)合物及物理混合物和溴化鉀混合壓片，在中紅外光譜區(qū)進行紅外光譜掃描。

2.5掃描電子顯微鏡

分別將蘆丁、卵磷脂、蘆丁與卵磷脂的復(fù)合物及物理混合物按掃描電子顯微鏡的要求制樣后，放入Quanta 200型掃描電子顯微鏡進行樣品觀察。

2.6差示掃描量熱分析方法

按DSC取樣要求對卵磷脂、蘆丁、蘆丁與卵磷脂的復(fù)合物及物理混合物進行取樣，在氮氣下進行DSC掃描分析，掃描起始溫度50℃，終止溫度300℃，每1 min升溫10℃。數(shù)據(jù)采用DSC Proteus Analysis軟件進行處理。

2.7X-衍射分析方法

按X-衍射取樣要求對卵磷脂、蘆丁、蘆丁與卵磷脂的復(fù)合物及物理混合物進行取樣，采用CuKa靶，石墨單色器衍射單色化，衍射角掃描范圍為5°～80°。

2.8蘆丁脂溶性測定

取蘆丁及蘆丁與卵磷脂的復(fù)合物于50 mL離心管中，加入5 mL正辛醇，將水浴振蕩器溫度設(shè)為25℃，振蕩1 d左右，取上清液合理稀釋并采用HPLC對蘆丁含量進行測定。色譜柱：DIKMA-C18（2）型反相柱（5 μm，250 mm×4.6 mm）；進樣量：10 μL；檢測波長：280nm；進樣溫度：25℃；流動相：甲醇和水（3∶2）；流量：1 mL/min。色譜數(shù)據(jù)的記錄和處理，采用Agilent OpenLAB ChemStation軟件。

3　結(jié)果與討論

3.1紫外光譜分析

紫外吸收光譜可以反映化合物不飽和鍵的變化情況。

蘆丁、卵磷脂、蘆丁與卵磷脂的物理混合物及復(fù)合物紫外圖譜見圖1。

圖1　蘆丁、卵磷脂、蘆丁與卵磷脂的物理混合物及復(fù)合物的紫外圖譜

由圖1可知，蘆丁、蘆丁與卵磷脂的物理混合物及復(fù)合物的紫外特征吸收峰都出現(xiàn)在260 nm，365 nm處，而卵磷脂沒有出現(xiàn)特征吸收峰。蘆丁、蘆丁與卵磷脂的物理混合物及復(fù)合物的吸收峰形狀相同，且復(fù)合物在掃描范圍內(nèi)沒有出現(xiàn)新的特征吸收峰。從紫外吸收光譜可以說明，蘆丁與卵磷脂在復(fù)合過程中并沒有形成新的不飽和鍵。

3.2紅外光譜分析

蘆丁、卵磷脂、蘆丁與卵磷脂的物理混合物及復(fù)合物紅外圖譜見圖2。

由圖2可知，蘆丁與卵磷脂的紅外色譜具有明顯差別。蘆丁與卵磷脂物理混合物的紅外光譜上蘆丁與卵磷脂特征吸收峰依然存在，紅外光譜表現(xiàn)為2種物質(zhì)紅外光譜的疊加，各峰只是信號強度發(fā)生變化，波數(shù)沒有大的變化，說明2種物質(zhì)之間沒有發(fā)生相互作用。復(fù)合物中卵磷脂大部分峰依然存在，但蘆丁的特征吸收峰有部分消失了，說明蘆丁與卵磷脂存在相互作用。但復(fù)合物的光譜沒有出現(xiàn)新吸收峰，說明復(fù)合物沒有形成新的共價鍵，蘆丁、卵磷脂化學(xué)結(jié)構(gòu)沒變化。

圖2　蘆丁、卵磷脂、蘆丁與卵磷脂的物理混合物及復(fù)合物的紅外圖譜

3.3掃描電鏡分析

蘆丁、卵磷脂、蘆丁與卵磷脂的物理混合物及復(fù)合物的掃描電鏡見圖3。

圖3　蘆丁、卵磷脂、蘆丁與卵磷脂的物理混合物及復(fù)合物的掃描電鏡

由圖3可知，蘆丁放大倍數(shù)為2 000倍，卵磷脂放大倍數(shù)為800倍，其混合物放大倍數(shù)為1 000倍，復(fù)合物放大倍數(shù)為1 000倍。從圖3（1） 中可以看見蘆丁呈現(xiàn)小針狀晶體；圖3（2）卵磷脂呈現(xiàn)大的無定形狀態(tài)，其明顯大于蘆??；在圖3（3）中，2種物質(zhì)狀態(tài)都有；圖3（4）復(fù)合物為無定形狀，與蘆丁和卵磷脂的狀態(tài)明顯不同。

3.4差示掃描量熱分析

蘆丁、卵磷脂、蘆丁與卵磷脂的物理混合物及復(fù)合物的DSC圖譜見圖4。

圖4　蘆丁、卵磷脂、蘆丁與卵磷脂的物理混合物及復(fù)合物的DSC圖譜

由圖4可知，在165℃處蘆丁出現(xiàn)吸熱峰，即為該物質(zhì)的熔融峰；卵磷脂無定沒有明顯的吸熱峰，是因為其為一種無固定熔點的無定型物質(zhì)；混合物DSC圖譜為蘆丁和卵磷脂圖譜的疊加，蘆丁熔融峰仍能觀察到；而復(fù)合物中熔融峰消失，圖譜與卵磷脂的DSC圖譜相似，表明蘆丁已完全分散于卵磷脂中。

3.5X-衍射分析方法

蘆丁、卵磷脂、蘆丁與卵磷脂的物理混合物及復(fù)合物的X-衍射見圖5。

由圖5（1）可知，蘆丁尖銳的衍射峰有許多，揭示其內(nèi)部為結(jié)晶狀態(tài)；由圖5（2）可知，卵磷脂僅在20℃附近有出現(xiàn)寬大的吸收峰，說明其具有不定形狀態(tài)［20］；由圖5（3） 可知，混合物中既有尖銳的結(jié)晶衍射峰，也有寬大吸收峰；由圖5（4）可知，復(fù)合物衍射圖中尖銳的峰消失，寬大吸收峰依然存在，與卵磷脂衍射圖譜類似，表明在復(fù)合物中，蘆丁已完全分散于卵磷脂中，與卵磷脂形成了一種無定形物質(zhì)。

3.6溶解度分析

取50 mg蘆丁加入到甲醇中配成100 mL溶液，再從其中分別取1，2，4，8，10 mL到10 mL玻璃管中，用甲醇定容至10 mL。取上述不同質(zhì)量濃度溶液按照液相色譜分析的進樣條件處理后進樣，所得蘆丁標準品不同質(zhì)量濃度與波峰面積的標準曲線方程為Y=15 260X-481.17，R2=0.999。經(jīng)HPLC分析得蘆丁在25℃正辛醇中的溶解度僅為0.097 μg/mL；而與卵磷脂復(fù)合后，其溶解度達到31.240 μg/mL，其脂溶性得到了顯著提高。

蘆丁、蘆丁-卵磷脂復(fù)合物在正辛醇中溶解度的比較見圖6。

4　結(jié)論

圖5　蘆丁、卵磷脂、蘆丁與卵磷脂的物理混合物及復(fù)合物的X-衍射

圖6　蘆丁、蘆丁-卵磷脂復(fù)合物在正辛醇中溶解度的比較

本研究采用溶劑法制備了蘆丁和卵磷脂的復(fù)合物。紫外吸收光譜說明，蘆丁與卵磷脂在反應(yīng)中并沒有形成新的不飽和鍵；紅外吸收光譜說明，蘆丁與卵磷脂發(fā)生了相互作用，但復(fù)合物并沒有生成新的共價鍵；電鏡、X-射線衍射、差示掃描量熱分析表明，復(fù)合物的形態(tài)與蘆丁、卵磷脂及其物理混合物有明顯的不同，且蘆丁已完全分散在卵磷脂中，與卵磷脂形成了一種無定形物質(zhì)。HPLC分析表明，蘆丁的脂溶性得到顯著提高。蘆丁在自然界中易于獲得，且含量豐富，并具有良好的生物活性。20世紀90年代以來，世界范圍內(nèi)的藥物化學(xué)和現(xiàn)代制劑技術(shù)飛速發(fā)展，功能性食品研究如火如荼，在這些有利的大環(huán)境推動下，相信蘆丁在功能性食品和藥物開發(fā)等方面會有更大的發(fā)展及應(yīng)用，本研究能為其發(fā)展提供一定參考。

［1］Agustin Salazar S，Medina Juárez L A，Soto Valdez H，et al.Influence of the solvent system on the composition of phenolic substances and antioxidant capacity of extracts of grape（Vitis vinifera L）. marc［J］.Australian Journal of Grape&Wine Research，2014，20（2）：208-213.

［2］Araújo M E M B D，F(xiàn)ranco Y E M，Alberto T G，et al. Enzymatic deglycosylation of rutin improves its antioxidant and antiproliferative activities［J］.Food Chemistry，2013，141（1）：266-273.

［3］Rohn S，Buchner N，Driemel G，et al.Thermal degradation of onion quercetin glucosides under roasting conditions［J］.Journal of Agricultural&Food Chemistry，2007，55（4）：1 568-1 573.

［4］王勝利，孫金香，席改卿，等.槐花中蘆丁超聲輔助提取工藝優(yōu)化及抗氧化活性研究 ［J］.食品工業(yè)科技，2012，33（18）：306-308.

［5］馬挺軍，秦曉健，賈昌喜.大豆卵磷脂增強免疫活性的研究 ［J］.中國農(nóng)學(xué)通報，2010，26（15）：97-99.

［6］楊艷暉，焦廣宇.大豆卵磷脂對高脂血癥人群血脂的影響 ［J］.中華臨床營養(yǎng)雜志，2008，16（3）：172-174.

［7］Zheng C， Houweling M.Phosphatidylcholine and cell death［J］.BiochimicaetBiophysicaActa，2003（2）：87-96.

［8］常平安，秦文珍，魏進民.卵磷脂與細胞周期 ［J］.中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報，2006，22（12）：947-952.

［9］Ma Q，Davidson P M，Zhong Q.Nanoemulsions of thymol and eugenol co-emulsified by lauric arginate and lecithin［J］. Food Chemistry，2016（10）：167-173.

［10］代忠波，丁卓平.卵磷脂的研究概況 ［J］.中國乳品工業(yè)，2006，34（1）：48-51.

［11］顧霞敏.高含量大豆卵磷脂的制備工藝研究 ［D］.杭州：浙江大學(xué)，2006.

［12］李揚.高純度蛋黃卵磷脂制備工藝的研究 ［D］.長春：吉林大學(xué)，2007.

［13］廉潔，王伯初.藥物磷脂復(fù)合物工藝評價標準及應(yīng)用研究進展 ［J］.生物技術(shù)通訊，2006，17（5）：830-833.

［14］徐承水.磷脂的生物學(xué)特性及保健功能 ［J］.臨沂師范學(xué)院學(xué)報，2000（3）：39-40.

［15］董銀卯，王瑤.穩(wěn)定化蘆薈的生產(chǎn)技術(shù)研究 ［J］.中國科技產(chǎn)業(yè)，1998（9）：49-49.

［16］馮年平，范廣平.天然藥物傳遞系統(tǒng)——磷脂復(fù)合物 ［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2001，8（3）：34-35.

［17］吳建梅，陳大為，孫波，等.天然活性成分磷脂復(fù)合物藥學(xué)研究概述 ［J］.中國藥學(xué)雜志，1998，33（1）：9-11.

［18］Bombardelli E，Patri G，Pozzi R.Complexes of saponins and their aglycons with phospholipids and pharmaceutical and cosmetic compositions containing them：US，US5166 139［P］.1992.

［19］Bombardelli E，Sabadie M.Phospholipid complexes of extracts of vitis vinifera，their preparation process and pharmaceutical and cosmetic compositions containing them：US，US4963527［P］.1990.

［20］劉本國，張瑞婷，吳曉楠，等.橙皮苷羥丙基-β-環(huán)糊精包合物的理化性質(zhì)研究 ［J］.現(xiàn)代食品科技，2013（10）：2 349-2 352.◇

Research on Phyemical Properties of Rutin-lecithin Complex

GENG Sheng，ZHANG Min，YANG Li，MA Hanjun，MO Haizhen，*LOU Wenjuan
（School of Food Science，He'nan Institute of Science and Technology，Xinxiang，He'nan 453003，China）

Rutin，with strong pharmacological activity and low toxicity，exist widely in plant kingdom.But its application is limited because of its low solubility in fat.This paper prepares rutin-lecithin complex by a solvent method and its physicochemical properties are analyzed by ultraviolet-visible spectrometry， infrared spectrometry， scanning electron microscopy，differential scanning calorimetry，and X-ray diffractometry.Results show that the physical phase of rutin significantly changed after forming a complex with lecithin，where it remained in an amorphous state and completely dispersed in lecithin.In 25℃isoctanol，the solubility of the complex is 31.240 μg/mL，and the solubility of rutin monomer is only 0.097 μg/mL，shows that the soluble of rutin-lecithin complex is improved significantly.

rutin；lecithin；complex；physicochemical property

O69

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2016.07.043

1671-9646（2016）07b-0047-04

2016-06-07

河南省高校科技創(chuàng)新團隊支持計劃項目（13IRTSTHN006，16IRTSTHN007）。

耿升（1990— ），男，碩士，研究方向為食品化學(xué)。

婁文娟（1989— ），女，碩士，助理實驗師，研究方向為功能性食品與食品安全性。