金銀木不同部位綠原酸的含量測定

朱成姣，陳　飛，姚梅悅，周祉延，周長征△山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東濟南50355；吉林大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院

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金銀木不同部位綠原酸的含量測定

朱成姣1，陳飛1，姚梅悅1，周祉延2，周長征1△
1山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東濟南250355；2吉林大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院

目的：提取并測定金銀木莖、葉、花及花蕾中綠原酸的含量，比較不同時期莖、葉、花及花蕾中綠原酸含量的變化。方法：以金銀木為材料，采用超聲波提取法提取金銀木莖、葉、花及花蕾中的綠原酸，用紫外分光光度法測定提取物中綠原酸含量。結(jié)果：金銀木幼葉中綠原酸含量為3.366%，莖1（與幼葉同時期）中為1.016%，花蕾中為6.175%，全開花中為7.471%，莖2（與花蕾同時期）中為2.416%，葉2（與花蕾同時期）中為10.735%。結(jié)論：莖、葉不同生長期中的綠原酸含量不同，并且隨著生長呈現(xiàn)增加的趨勢，故金銀木的莖、葉、花及花蕾均具有較高的開發(fā)利用價值。

金銀木；超聲提取法；綠原酸；紫外分光光度法

金銀木［Lonicer maakii（Rupr.）Maxim.］，別名金銀忍冬、木忍冬、雞骨頭，是忍冬科忍冬屬的落葉灌木，分布于全國各地，生于林緣、溝谷地帶、山坡陰濕處或雜木林中。金銀木全株可入藥，具有祛風(fēng)解毒、消腫止痛的作用。金銀忍冬含有綠原酸，綠原酸（chloro genicacid）是植物體在有氧呼吸過程中經(jīng)莽草酸途徑產(chǎn)生的一種苯丙素類化合物，為眾多藥材（如金銀花、茵陳、杜仲）中的主要有效成分，現(xiàn)代藥理研究表明，其除有抗菌抗病毒作用外，還有抗艾滋病毒、抗過敏、抗腫瘤等功能，具有保肝利膽、止血、抗氧化、抗生育等作用，由于其所具有的藥理和藥效作用而日益引起人們的重視［1］。為此，本實驗對金銀木莖、葉、花及花蕾中綠原酸進行提取及含量分析，并比較不同時期莖葉中綠原酸的含量變化，旨在為金銀木的開發(fā)和綜合利用提供理論依據(jù)。

1　材料

1.1藥材金銀木莖、葉、花蕾和全開花，采于山東中醫(yī)藥大學(xué)長清校區(qū)校園內(nèi)，經(jīng)鑒定為金銀木的莖、葉、花蕾及花，經(jīng)陰干、低溫烘干處理為干品，粉碎。

1.2儀器電子分析天平［AL204型，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司］；XD-6型熱風(fēng)循環(huán)烘箱（WMZK-02型，上海醫(yī)用儀表廠）；四兩裝高速萬能粉碎機（武義縣屹立工具有限公司）；KQ-250E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；紫外分光光度計（UV1100，上海天美科學(xué)儀器有限公司）；電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司，天平儀器廠制造）。

1.3試劑綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品，購自天津一方科技有限公司；甲醇（分析純），購自天津市廣成化學(xué)試劑有限公司；蒸餾水。

2　方法與結(jié)果

2.1標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備準(zhǔn)確稱取5.0mg綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品，用濃度50%的甲醇溶液在超聲條件下使其完全溶解［2］，并定容至25mL，得到濃度為0.200mg/m L的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別取0.5、1.0、1.5、2.0和2.5m L標(biāo)準(zhǔn)品溶液置于25m L棕色容量瓶中，用50%甲醇溶液定容至刻度，在吸收波長為327nm的紫外分光光度計中測定標(biāo)準(zhǔn)品溶液的吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)x，吸光度為縱坐標(biāo)y，作綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線，見表1。

表1　標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)

2.3精密度實驗取同一濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，在紫外分光光度計中測定其吸光度，平行測定5次，考察吸光度的變化情況，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差R S D為0.144%，精密度良好。

2.4供試品溶液制備金銀木幼葉中綠原酸提取。從山東中醫(yī)藥大學(xué)長清校區(qū)摘取一定數(shù)量的金銀木幼葉，經(jīng)烘干后粉粹，取粉末0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加50%甲醇50mL，稱定質(zhì)量，50℃下超聲處理30分鐘，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇補足質(zhì)量，搖勻，濾過［3］，濾液另存于250mL具塞容量瓶中，濾渣加50%甲醇50mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇補足質(zhì)量，搖勻，濾過，合并濾液，精密量取1.25mL置于25m L棕色容量瓶中，用濃度50%的甲醇溶液定容，放于冰箱內(nèi)待用，平行制備3次。

金銀木莖1（與幼葉同時期）、莖2（與花蕾同時期）、葉2（與花蕾同時期）、全開花及花蕾中綠原酸提取操作同“2.4.1”項，最后莖取5mL定容至25mL，全開花及花蕾取2mL定容至25mL。

2.5綠原酸含量測定根據(jù)文獻［3］選定吸收波長為327nm，以50%甲醇溶液為空白對照，在紫外分光光度計中測定各供試品溶液的吸光度，平行進樣3次，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算綠原酸的含量。取3份金銀木莖1（與幼葉同時期）的粉末各0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加50%甲醇50mL，稱定質(zhì)量，于50℃下分別超聲提取1、2、3次，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇補足質(zhì)量，搖勻，濾過，分別精密量取3種濾液各5mL，置25mL棕色容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得，于327nm波長處分別測定其吸光度。幼葉、全開花及花蕾分別超聲提取1、2、3次，操作如莖1（與幼葉同時期），最后幼葉精密量取3種濾液各1.25mL，置25mL棕色容量瓶中，全開花及花蕾精密量取3種濾液各2mL，均用50%甲醇定容至刻度，搖勻，即得，于327nm波長處分別測定其吸光度，見表2—4。

表2　各供試品溶液綠原酸含量測定

表3　莖1（與幼葉同時期）不同提取次數(shù)綠原酸含量測定

表4　幼葉、全開花及花蕾不同提取次數(shù)綠原酸含量測定

2.6線性關(guān)系考察計算繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y=64.65X-0.072，相關(guān)度R2=0.999（n=5），表明綠原酸在4.0～20.0μg/m L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，見圖1。

圖1　綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.7最佳提取次數(shù)的確定由表4—5可知，莖1（與幼葉同時期）提取1次所得含量比提取2次所得含量在數(shù)值上少0.2652，而提取2次比提取3次少0.0374，可以認(rèn)為提取2次就可將材料中的綠原酸提取完全，并且可以節(jié)省能源。

3　討論

3.1超聲提取法金銀木中綠原酸的提取方法主要有以下幾種：浸漬法、滲漉法、熱回流法、超聲波法、微波法和酶法［4］，理論分析認(rèn)為在綠原酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)中含有不穩(wěn)定的基團，因此不可采取熱提，另外從省時、操作簡單易行，提取效率高方面考慮，本實驗采用了超聲提取法［5-8］。

3.2紫外分光光度檢測法紫外分光光度法測定綠原酸含量，方法簡便易行，但準(zhǔn)確度不高。因為金銀木中主要有效成分為綠原酸、異綠原酸，紫外吸收圖譜最大吸收波長均為（327±1）nm。因此紫外分光度法所測數(shù)據(jù)為綠原酸、異綠原酸的總含量。高效液相法可將兩者分開，并能分別進行測定［2］。

3.3不同部位綠原酸含量本研究結(jié)果表明：金銀木各部位中都有一定的綠原酸，但含量高低不同，同時期的含量依次為葉＞花＞花蕾＞莖，且花、花蕾及葉中的綠原酸含量較高，由此可推斷金銀木的花和葉是一種可開發(fā)的新的藥用植物資源。

目前金銀木多為城市的綠化樹種，其花和葉目前都被廢棄，我國金銀木資源十分豐富。通過本實驗可為金銀木的花和葉的藥用開發(fā)提供理論依據(jù)，使之得到合理應(yīng)用。

［1］于加平，李海燕，孫博.HPLC法測定金銀木花和葉中綠原酸的含量［J］.吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院學(xué)報，2009，18（1）:1-2.

［2］肖文平，李娟.金銀花中綠原酸的提取和含量測定［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（35）:21675-21676.

［3］任貽軍，周菁麗，李紀(jì)元，等.HPLC法測定清血糖漿中綠原酸的含量［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報，2009，15（8）:71-72.

［4］于俊林，孫仁爽，呂紅，等.金銀忍冬和黃花忍冬花及花蕾中綠原酸的HPLC法測定［J］.中草藥，2008，39（11）:1738-1739.

［5］史克莉，許蠟英.不同提取方法對金銀花中綠原酸含量測定的影響［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2007，25（4）:820-822.

［6］何鋼，劉賢桂，李樊，等.金銀花葉片綠原酸提取及工藝參數(shù)優(yōu)化的研究［J］.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2008，30（1）:136-143.

［7］肖懷秋，李玉珍，蘭立新.超聲波輔助乙酸乙酯萃取金銀花中綠原酸［J］.食品與發(fā)酵科技，2009，45（2）:48-50.

［8］曹淵，李創(chuàng)舉，夏之寧，等.金銀花中綠原酸的超聲提取工藝優(yōu)化［J］.時珍國醫(yī)國藥，2008，19（12）:2857-2858.

Content Determination ofChlorogenic Acid Contained in Different Partsof Amur Honeysuckle

ZHU Chengjiao1，CHEN Fei1，YAOMeiyue1，ZHOU Zhiyan2，ZHOU Changzheng1△
1 Pharmacy School of Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China；2 College of OralMedicine of Jilin University

Objective:To compare the contents of chlorogenic acid in the stem s，leaves，flow ers and buds in differentperiods by extracting and determ ining chlorogenic acid contained in amur honeysuckle［Lonicera maackii（Rupr.）Maxim.］.Methods:By taking amur honeysuckle as the material，chlorogenic acid in the stems，leaves，flowers and buds of amur honeysuckle could be extracted by ultrasound extraction method，and the contents of chlorogenic acid were determ ined by ultravioletspectrophotometry.Results:The contents of chlorogenic acid in the young leavesheld 3.366%，itwas1.016%in the stem No.one（in the same period of young leaves），6.175%in the buds，7.471%in thewhole flowers，2.416%in the stem No.two（in thesame period of thebuds），and 10.735%in the leavesNo.two（in thesame period of thebuds）.Conclusion:The contentsof chlorogenic acid in the stemsand leaves in different periods are different，they increased as they grew up，therefore，the stems，leaves，flow ers and buds of amurhoneysucklepossessahigh valueofdevelopmentand utilization.

amurhoneysuckle；ultrasound extraction；chlorogenic acid；ultravioletspectrophotometry

R284.1

A

1004-6852（2016）03-0035-03

2015-02-17

朱成姣（1990—），女，在讀碩士研究生。研究方向：藥物新劑型與制藥新技術(shù)。

△周長征（1966—），男，碩士學(xué)位，教授。研究方向：藥物新劑型與制藥新技術(shù)。