壯陽作用藥酒中枸櫞酸西地那非非標(biāo)研究

何　濤　胡　佳　張　韜　于世海

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壯陽作用藥酒中枸櫞酸西地那非非標(biāo)研究

何濤1胡佳1張韜1于世海2

目的研究并建立高效液相色譜法及薄層色譜法測定壯陽作用藥酒中枸櫞酸西地那非非法添加方法。方法高效液相色譜法及薄層色譜法。結(jié)果薄層色譜法：GF254薄層板，以正己烷-乙醇-氨水(30∶70∶1)為展開劑，在碘蒸汽中熏5分鐘后，置254nm紫外燈下檢視。高效液相色譜法：C18柱，流動(dòng)相為0.05mol/L磷酸三乙胺(取7ml三乙胺用水稀釋至1000ml,用磷酸調(diào)至3.0)-甲醇-乙腈(58∶25∶17)，檢測波長290nm。結(jié)論此高效液相色譜法及薄層色譜法測定壯陽作用藥酒中枸櫞酸西地那非可靠有效。

枸櫞酸西地那非; 非法添加; 高效液相色譜法; 薄層色譜法

有壯陽作用藥酒，宣稱純中藥制成，無西藥添加，用過的人幾小時(shí)之內(nèi)起效居多，懷疑有西藥添加，所以首先選擇枸櫞酸西地那非進(jìn)行排查。枸櫞酸西地那非也叫萬艾可，中文簡稱“偉哥”，它是西地那非的枸櫞酸鹽，一種對環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)特異的5型磷酸二酯酶(PDE5)選擇性抑制劑[1]。 作用機(jī)制：陰莖勃起的生理機(jī)制涉及性刺激過程中陰莖海綿體內(nèi)一氧化氮(NO)的釋放。NO激活鳥苷酸環(huán)化酶導(dǎo)致環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)水平增高，使海綿體內(nèi)平滑肌松弛，血液充盈。西地那非(Sildenafil，Viagra,萬艾可) 是高度選擇性磷酸二酯酶5(PDE5)抑制劑，PDE5在陰莖海綿體中高度表達(dá)，而在其它組織中(包括血小板、血管和內(nèi)臟平滑肌、骨骼肌)表達(dá)低下。西地那非通過選擇性抑制PDE5，增強(qiáng)一氧化氮(NO)-cGMP途徑，升高cGMP水平而導(dǎo)致陰莖海綿體平滑肌松弛，使勃起功能障礙患者對性刺激產(chǎn)生自然的勃起反應(yīng)。勃起反應(yīng)一般隨西地那非劑量和血漿濃度的增加而增強(qiáng)[2]。實(shí)驗(yàn)顯示，藥效可持續(xù)至4小時(shí)，但反應(yīng)較2小時(shí)時(shí)弱[3]。本文通過高效液相色譜法及薄層色譜法鑒別及測定壯陽作用藥酒中枸櫞酸西地那非含量，證明此壯陽作用藥酒中有枸櫞酸西地那非非法添加。

1　儀器與試藥

CPA-225D型電子天平，LC-2010CHT型高效液相色譜，有壯陽作用藥酒，三乙胺(分析純)，磷酸(分析純)，甲醇(色譜純)，乙腈(色譜純)，甲酸(分析純),過氧化氫(分析純),氨水(分析純)，正己烷(分析純)，乙醇(分析純)，枸櫞酸西地那非對照品(中國藥品生物制品檢定研究院，批號(hào)101400-201301)，水為純化水。

2　方法與結(jié)果

2.1薄層色譜

2.1.1供試品溶液制備取本品，以每分鐘3000轉(zhuǎn)離心15分鐘，取10ml上清液，以混合制劑[甲醇-水-氨水(75∶25∶1)]稀釋至100ml搖勻，作為供試品溶液。

2.1.2對照品溶液制備另取枸櫞酸西地那非對照品約10mg,置20ml量瓶中，加上述混合制劑溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液，照薄層色譜試驗(yàn)，取上述兩種溶液各5μl,分別點(diǎn)于同一GF254薄層板上，以正己烷-乙醇-氨水(30∶70∶1)為展開劑，層析缸預(yù)先以展開劑飽和20分鐘。展開后晾干，在碘蒸汽中熏5分鐘后，置254nm紫外燈下檢視[4]。

2.1.3結(jié)果供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色和位置與對照品溶液的主斑點(diǎn)相同。(見圖1)

1.對照品　2.供試品圖1　薄層色譜圖

2.2高效液相色譜法

2.2.1色譜條件色譜柱為Symmetry C18柱(150mm ×4.6mm，54um)；流動(dòng)相為0.05mol/L磷酸三乙胺(取7ml三乙胺用水稀釋至1000ml,用磷酸調(diào)至3.0)-甲醇-乙腈(58∶25∶17)；檢測波長：290nm；流速：1.0ml/min；進(jìn)樣量：20μl；柱溫：25℃。

2.2.2供試品溶液制備[5]取本品，以每分鐘6000轉(zhuǎn)離心10分鐘，取上清液10ml，置于20ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.3對照品溶液制備精密稱取枸櫞酸西地那非對照品約10mg,置100ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，取2ml，置10ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

2.2.4方法學(xué)考察

2.2.4.1專屬性試驗(yàn)取2.2.2項(xiàng)下的供試品溶液和2.2.3項(xiàng)下的對照品溶液，按擬定色譜條件進(jìn)行測定，色譜圖見圖2、圖3。結(jié)果表明，藥酒中其他成分及輔料對枸櫞酸西地那非的測定無干擾，方法專屬性好，枸櫞酸西地那非的保留時(shí)間約為8.8分鐘，分離度為2.56，理論板數(shù)為5625。

圖2　對照品溶液色譜圖

圖3　供試品溶液色譜圖

2.2.4.2精密度考察取對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次20μl，測定峰面積積分值，結(jié)果RSD為0.5%。

2.2.4.3穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取上述對照品溶液，在0、2、4、6、8小時(shí)進(jìn)樣，共五次，每次20μl，測定峰面積積分值，結(jié)果RSD為0.7%，表明枸櫞酸西地那非在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.4.4重復(fù)性試驗(yàn)取樣品，按供試品溶液制備方法制備6個(gè)，測定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)(n=6)，按上述色譜條件測定，結(jié)果RSD為1.0%。

2.2.4.5回收率試驗(yàn)取已測含量樣品，平行6份，分別精密加入枸櫞酸西地那非對照品適量，按供試品溶液制備方法制備和測定，計(jì)算6次的回收率，分別為99.5%，99.4%，99.6%，99.4%，99.5%,99.5%，平均回收率為99.5%，RSD為0.1%。

2.2.5樣品含量測定按上述供試品之輩方法處理，進(jìn)樣分析，測定樣品中枸櫞酸西地那非的含量結(jié)果見表1。

表1　枸櫞酸西地那非含量

3　討論

通過薄層色譜法及高效液相色譜法，鑒別及測定壯陽作用藥酒中枸櫞酸西地那非含量，方法安全可靠。

[1]國家藥典委員會(huì).國家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2011.

[2]黃力,楊寧,劉海英,等.壯陽類中藥中枸櫞酸西地那非的檢出[J].中國中醫(yī)藥資訊,2010，2(2)：42.

[3]戚亮，崔琳.HPLC法測定枸櫞酸西地那非的含量[J].黑龍江醫(yī)藥，2013, 26(5)：755-757.

[4]魏尊喜.HPLC與TLC測定保健品中枸櫞酸西地那非含量[J].安徽醫(yī)藥, 2007，11(12):1097-1098.

[5]楊德忠，黃惠宏.HPLC法測定枸櫞酸西地那非片的含量[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào),2002，18(4):235-236.

1.遼寧省錦州市食品藥品檢驗(yàn)所(錦州 121000); 2.遼寧康辰藥業(yè)有限公司(丹東 118301)

10.3969/j.issn.1003-8914.2016.14.022

1003-8914(2016)-14-2039-02

(本文校對：李盈2015-12-03)