穩(wěn)心湯的急性毒理實(shí)驗(yàn)研究

段　練　熊興江　李　軍

(中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院心內(nèi)科,北京,100053)

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穩(wěn)心湯的急性毒理實(shí)驗(yàn)研究

段練熊興江李軍

(中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院心內(nèi)科,北京,100053)

目的:穩(wěn)心湯是治療冠心病介入術(shù)后不穩(wěn)定性心絞痛的有效方劑。本研究旨在觀察穩(wěn)心湯的急性毒性,以評估其安全性。方法:以穩(wěn)心湯的最大給藥濃度(5.2 g/mL)及最大給藥體積(0.7 L/20 g·次)予小鼠灌胃,分別于24 h內(nèi)分3次灌胃,連續(xù)觀察2周。詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)小鼠的外觀、行為、一般狀態(tài)、呼吸、中毒反應(yīng)及死亡狀況;每天記錄存活實(shí)驗(yàn)小鼠的體重及飼料量。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后抽血檢測肝腎功能。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)小鼠灌胃穩(wěn)心湯3次/d,最大給藥量為425 g/kg,未發(fā)現(xiàn)顯著的急性毒性反應(yīng),肝腎功能檢測亦未有異常異常。結(jié)論：穩(wěn)心湯具有較好的安全性。

穩(wěn)心湯;急性毒性;小鼠

冠心病是心血管臨床的常見病、多發(fā)病,是致殘和死亡的重要原因之一,已成為全球重大公共衛(wèi)生問題。近30年來，隨著影像學(xué)及導(dǎo)管技術(shù)的不斷發(fā)展，冠狀動(dòng)脈介入治療已經(jīng)成為新的治療手段,并被廣泛應(yīng)用于冠心病的臨床治療,能夠較好地改善冠心病患者的不適主訴及遠(yuǎn)期預(yù)后。然而,介入術(shù)后的心絞痛復(fù)發(fā)、支架內(nèi)再狹窄、血栓形成等并發(fā)癥日益受到醫(yī)學(xué)界關(guān)注[1-2]。中醫(yī)學(xué)在冠心病介入術(shù)后并發(fā)癥的防治上具有一定的優(yōu)勢,大量的研究證實(shí)中醫(yī)藥能夠改善不穩(wěn)定性心絞痛患者介入術(shù)后的生活質(zhì)量及中醫(yī)學(xué)證候規(guī)律,促進(jìn)患者康復(fù)[3-6]。基于課題組10余年的理論與臨床研究,發(fā)現(xiàn)胸陽不振、心脈瘀阻是冠心病不穩(wěn)定性心絞痛介入術(shù)后的基本病機(jī)[7]。其中,陽虛、血瘀在冠心病不穩(wěn)定性心絞痛疾病中貫穿始終,而扶陽活血?jiǎng)t為其主要治則治法[8-11]。在臨床治療中,基于“扶陽活血”治則治法而成的“穩(wěn)心湯”是課題組治療介入術(shù)后并發(fā)癥的基本方劑,研究發(fā)現(xiàn)本方不僅能有效改善心絞痛癥狀,改善缺血心電圖,更能顯著調(diào)節(jié)血液流變學(xué)、血脂等[12-14]。本研究旨在觀察穩(wěn)心湯的急性毒性,以評估其安全性。

1　資料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)用藥穩(wěn)心湯由廣安門醫(yī)院煎藥室提供。穩(wěn)心湯組成：黨參15 g、肉桂3 g、細(xì)辛3 g、瓜蔞12 g、赤芍12 g、川芎10 g、莪術(shù)9 g、姜黃9 g、大黃8 g(后下)、全蝎9 g、麥冬12 g、山楂15 g、炙甘草6 g。在急性毒性實(shí)驗(yàn)研究中,用0.5%羧甲基纖維素鈉水溶液將受試藥配成最大給藥濃度(5.2 g/mL)。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選取SPF級昆明小鼠(KM小鼠)40只,由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供,體重19.0～21.0 g,按體重隨機(jī)分為2組,即治療組與對照組各20只(雌雄各半)。動(dòng)物雌雄分籠飼養(yǎng)于中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心觀察室的室溫保持20～25 ℃,相對濕度保持38%～41%,環(huán)境清潔。

1.3試劑試劑盒丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)：批號：8799；江萊生物；天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)：批號：9573；江萊生物；肌酐(CR)批號：231305；江萊生物；尿素氮(BUN)批號：7361；江萊生物。

1.4儀器全自動(dòng)生化分析儀(OLYMPUS AU2700);電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司,型號:BSA124S)；離心機(jī)(安新縣白洋離心機(jī)廠,型號:R5型醫(yī)用低速冷凍離心機(jī))。

1.5實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)研究之前,所有實(shí)驗(yàn)小鼠禁食不禁水,12 h后,將穩(wěn)心湯的最大給藥量予實(shí)驗(yàn)研究的小鼠進(jìn)行灌胃,即最大給藥濃度(5.2 g/mL)及最大給藥體積(0.7 mL/20 g·次),分別于24 h內(nèi)分3次進(jìn)行灌胃。得出最大給藥量為425 g/kg,經(jīng)計(jì)算小鼠的最大耐受量倍數(shù)71.5(倍),是人用臨床劑量159 g/50 kg，生藥的120倍左右。每間隔8 h即以同樣的劑量給藥1次,一共給藥3次。對照組給以相同劑量的0.5%羧甲基纖維素鈉水溶液。連續(xù)觀察14 d,細(xì)致觀察實(shí)驗(yàn)研究小鼠的外觀、行為、一般狀態(tài)、呼吸、中毒反應(yīng)及死亡狀況;詳細(xì)記載實(shí)驗(yàn)小鼠的體重及飼料量。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后抽血檢測肝腎功能。實(shí)驗(yàn)研究中,針對死亡的小鼠,及時(shí)進(jìn)行尸體解剖,肉眼觀察臟器病理改變。

表1　補(bǔ)腎降壓方對受試動(dòng)物體重的影響±s)

注:對照組與給藥組t檢驗(yàn),*P<0.05,給藥前(合計(jì))P>0.05;給藥后(合計(jì))P>0.05。

表2　給藥2周后小鼠ALT、AST、BUN、Cr的含量

注：對照組與給藥組t檢驗(yàn)，ALT:P>0.05；AST:P>0.05.BUN：P>0.05；Cr：P>0.05。

2　結(jié)果

2.1一般狀況所有實(shí)驗(yàn)研究的小鼠經(jīng)灌胃穩(wěn)心湯后,無震顫、驚厥、流涎、流淚、流涕、呼吸困難、便秘、腹瀉等異常生命體征。小鼠外觀皮毛光澤。2周內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究的小鼠無一死亡。觀察2周后,實(shí)驗(yàn)研究的小鼠無顯著異常。

2.2體重詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)研究的小鼠體重,統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn),穩(wěn)心湯對小鼠的體重?zé)o影響，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.3肝腎功能2周后摘眼球取血,離心,取血清,檢測生化中的ALT、AST、BUN、Cr,經(jīng)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

3　討論

穩(wěn)心湯由如下藥物組成：黨參15 g、肉桂3 g、麥冬12 g、細(xì)辛3 g、赤芍15 g、川芎10 g、莪術(shù)9 g，姜黃9 g、全蝎9 g、山楂15 g、大黃6 g后下、炙甘草6 g。方中黨參補(bǔ)益心氣、養(yǎng)血生津，肉桂溫陽補(bǔ)腎、散寒通經(jīng)，麥冬養(yǎng)陰生津。上藥合用，共奏溫陽散寒、益氣滋陰之功，為扶正治本之法。川芎、赤芍、山楂活血化瘀、行氣通陽，莪術(shù)、片姜黃破血行氣，通經(jīng)止痛，全蝎通絡(luò)散結(jié)，細(xì)辛散寒止痛、溫化痰飲，大黃通腸解毒、逐瘀通經(jīng)，瓜蔞清熱化痰、利氣寬胸，上藥合用，共奏理血行氣、通經(jīng)止痛、通陽化痰之功，為祛邪治標(biāo)之法。炙甘草補(bǔ)中益氣、調(diào)和諸藥?？v觀全方，攻補(bǔ)兼施、標(biāo)本兼治、寒熱并用，具有溫陽益氣、活血化瘀、化痰通絡(luò)之功，方證對應(yīng)，臨床使用，頗多效驗(yàn)。

但穩(wěn)心湯的臨床用藥安全性需要進(jìn)一步的探究。急性毒性試驗(yàn)是目前評價(jià)臨床試驗(yàn)用藥安全性的證據(jù)之一。本實(shí)驗(yàn)為穩(wěn)心湯系列研究的一部分。旨在研究穩(wěn)心湯的急性毒理作用，了解其對生存狀況，肝腎功能的損害。為將來進(jìn)入臨床運(yùn)用提供依據(jù)，為以后的臨床給藥做出很好的指導(dǎo)。在本研究中，以穩(wěn)心湯的最大給藥濃度(5.2 g/mL)及最大給藥體積(0.7 mL/20 g·次)給予實(shí)驗(yàn)研究的小鼠進(jìn)行灌胃，得出最大給藥量為425 g/kg，經(jīng)計(jì)算小鼠的最大耐受量倍數(shù)71.5(倍)，是人用臨床劑量159 g/50 kg生藥的120倍左右。在本研究中，灌胃給藥期間，治療組與對照組在飲水及攝入量方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。另外，我們觀察了大鼠的體重及生長狀況，并無致死致傷的情況出現(xiàn)，雌性與雄性分別觀察，也并無差異。我們又進(jìn)一步檢測了實(shí)驗(yàn)研究小鼠的血生化，發(fā)現(xiàn)對照組與給藥組在肝腎功能方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。研究提示，大劑量穩(wěn)心湯對實(shí)驗(yàn)研究的小鼠肝臟和腎臟沒有顯著影響。綜上可知，穩(wěn)心湯具有較好的安全性，這進(jìn)一步為臨床運(yùn)用穩(wěn)心湯治療冠心病介入術(shù)后陽虛血瘀證提供了重要的臨床與實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)，為揭示中醫(yī)學(xué)方證對應(yīng)的科學(xué)內(nèi)涵提供依據(jù)[15]。

[1]段練,熊興江,王階.冠心病的治療性血管新生與活血化瘀[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2013,33(11):1561-1566.

[2]王階,李敏,劉詠梅,等.miRNA在冠心病治療中的作用及與中醫(yī)藥的相關(guān)性[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2015,21(22):1-5.

[3]褚福永,王階,孫曉偉,等.血府逐瘀膠囊改善不穩(wěn)定型心絞痛介入術(shù)后血瘀證患者近期生活質(zhì)量的隨機(jī)雙盲對照試驗(yàn)[J].中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào),2009,7(8):729-735.

[4]褚福永,王階,邢雁偉,等.論證候動(dòng)態(tài)演變規(guī)律的復(fù)雜性及研究思路[J].中醫(yī)雜志,2009,50(10):936-938.

[5]褚福永,王階,姚魁武,等.冠心病不穩(wěn)定型心絞痛中醫(yī)辨證分型與血脂及冠脈造影結(jié)果的相關(guān)性研究[J].北京中醫(yī)藥,2009,28(12):918-921.

[6]褚福永,劉巍,劉紅旭.益氣逐瘀方對心肌梗死大鼠心肌損傷標(biāo)志物及miR-24基因表達(dá)的影響[J].北京中醫(yī)藥,2015,34(3):187-189.

[7]王階,熊興江,何慶勇,等.方證對應(yīng)內(nèi)涵及原則探討[J].中醫(yī)雜志,2009,50(3):197-199.

[8]馬曉昌,尹太英,陳可冀,等.冠心病中醫(yī)辨證分型與冠狀動(dòng)脈造影所見相關(guān)性比較研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2001,21(9):654-656.

[9]高嘉良,李軍,王階.“扶陽活血法”在冠心病不穩(wěn)定性心絞痛治療中的運(yùn)用[J].中國中藥雜志,2016,41(3):59-62.

[10]沈金玲.溫法治療老年冠心病探析[J].中醫(yī)研究,2008,21(6):6-8.

[11]李柳驥,嚴(yán)季瀾.試論扶陽在心絞痛治療中的地位及含義[J].中華中醫(yī)藥雜志,2009,24(7):840-842.

[12]李軍,張振鵬,熊興江,等.穩(wěn)心湯治療不穩(wěn)定性心絞痛的隨機(jī)對照研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2016,22(4):154-158.

[13]宋祥和,李軍,李長生.穩(wěn)心湯對不穩(wěn)定型心絞痛病人高敏C反應(yīng)蛋白及D-二聚體的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2008,6(6):635-637.

[14]李軍,程廣清,李長生.穩(wěn)心湯對不穩(wěn)定型心絞痛患者血漿Fib、IL-6、IL-8的影響[J].山東中醫(yī)雜志,2005,24(11):650-651.

[15]王階,熊興江.方證對應(yīng)特征探討[J].中醫(yī)雜志,2010,51(3):200-203.

(2016-03-10收稿責(zé)任編輯：張文婷)

Experimental Study of Acute Toxicity of the Wenxin Decoction

Duan Lian, Xiong Xingjiang, Li Jun

(Guang′anmenHospital,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100053,China)

Objective: Wenxin Decoction is an effective prescription for unstable angina pectoris after coronary heart disease. The aim of this study was to observe the acute toxicity of the decoction to evaluate its safety. Methods: The maximum administration volume(5.2 g/mL) and the maximum drug concentration (0.7 mL/20 g each time) were administered to mice by three hours in 24 hours and 2 weeks respectively. The appearance, behavior, general state, respiration, toxic reaction and death status of the experimental mice were recorded in detail. The body weight and feeding rate of the surviving mice were also recorded every day. Liver function was examined by blood test after the treatment. Results: No significant acute toxicity reaction was observed 3 times in 1 days in the experimental mice with the maximum dose 425 g/kg. And no abnormality was found in liver and kidney function examine. Conclusion: Wenxin decoction is relatively safe.

Wenxin decoction; Acute toxicity; Mice

國家中醫(yī)藥管理局行業(yè)專項(xiàng)(編號:201207001)——“全國中醫(yī)醫(yī)療與臨床科研信息共享的推廣應(yīng)用研究”

李軍(1971.10—),男,醫(yī)學(xué)博士,主任醫(yī)師,研究方向：主要從事中西醫(yī)結(jié)合心血管疾病防治和研究,Tel:(010)88001094,E-mail:doctorli1031@163.com

R285.5

A doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2016.07.041