川芎對(duì)大鼠心肌缺血再灌注NF-κB的影響作用

饒李亮

(廣東省惠州市中醫(yī)醫(yī)院，廣東　惠州　516001)

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川芎對(duì)大鼠心肌缺血再灌注NF-κB的影響作用

饒李亮

(廣東省惠州市中醫(yī)醫(yī)院，廣東惠州516001)

目的探討川芎治療心肌缺血再灌注的作用機(jī)理。方法將SD大鼠50 只，隨機(jī)分為5 組，每組各10只、以及空白組10只。共60只大鼠。即空白對(duì)照組(生理鹽水20 mL/kg)、模型組(生理鹽水20 mL/kg)、川芎高劑量(100 mg/kg)、川芎中劑量(50 mg/kg)、川芎低劑量(25 mg/kg)組。采用放免法檢測血清TNF-α含量，免疫組化法測定心肌組織中核因子κB 的表達(dá)。結(jié)果川芎對(duì)各組及治療組血清TNF-α含量與正常組比較顯著降低(P<0.01), NF-κB的活化程度正常組比較顯著降低(P<0.01)。其中以中劑量治療組效果最為顯著。結(jié)論川芎可降低血清中TNF-α含量，減少心肌組織中NF-κB活化程度，達(dá)到對(duì)心肌缺血再灌注作用。

心肌缺血；再灌注；TNF-α；NF-κB

川芎為常用的活血化瘀中藥之一， 始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。藥用部分為傘形科植物川芎(Liggusticum chuanxion Hort)的干燥根莖。其化學(xué)成分主要有四甲基毗嗦即川芍嚓、阿魏酸、川芍酚、川芍內(nèi)酷、維生素A、維生素E、葉酸、街醇等。味辛、微苦、性溫，有活血化瘀，理氣止痛作用。常用于頭痛、胸脅痛、腹痛、風(fēng)濕痹痛等癥。近年來很多研究表明川芍有降壓、擴(kuò)張血管、抗血栓、鎮(zhèn)靜及解痙等作用，臨床中廣泛用于心腦血管等疾病的治療。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD級(jí)大鼠50只，雌雄各半，體質(zhì)量為(200±20) g，每組10只。

1.1.2藥物藥物購于惠州市中醫(yī)醫(yī)院中藥房，取30 g川芎置容器中，加10倍量水浸泡20 min，加熱至沸，改用文火煎煮30 min，趁熱濾過，濾渣另加8倍量水，同法煎煮30 min，濾過，合并兩次濾液于燒杯中備用。

1.1.3儀器手術(shù)器械由南方醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室提供；AvantiTM230型超速冷凍離心機(jī)( 美國BECKMAN 公司)；PL303 型電子天平[梅特勒托利多儀器(上海)有限公司]；BCD-216B型冰箱(合肥容事達(dá)有限公司)。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1動(dòng)物分組造模成功的雄性SD大鼠50 只，隨機(jī)分為5 組，每組各10只、以及空白組10只。共60只大鼠。即空白對(duì)照組(生理鹽水20 mL/kg)、模型組(生理鹽水20 mL/kg)、川芎高劑量(100 mg/kg)、THP組(中)：川芎中劑量(50 mg/kg)、THP組(低)：川芎低劑量(25 mg/kg)組。每天灌胃給相應(yīng)藥物1次，持續(xù)2周。

1.2.2動(dòng)物模型制備3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，大鼠四肢固定于手術(shù)臺(tái)上，將心電圖機(jī)置于大鼠四肢皮下(用注射器針頭替代扎于大鼠皮下)，觀察記錄術(shù)前Ⅱ?qū)?lián)心電圖。頸前正中切開皮膚、筋膜，逐層分離至氣管，在3～4氣管軟骨環(huán)之間切開氣管，插入自制氣管插管(20 mL一次性無菌注射針，前端剪粗鈍，保持管腔通暢)，連接小型動(dòng)物呼吸機(jī)，呼吸頻率調(diào)至100 次/分，呼氣吸氣的比率為1:2，潮氣量1.0，靜觀5 min，待小鼠呼吸抵抗消失、呼吸平穩(wěn)后開胸。剪開左側(cè)皮膚，逐層分離后在4～5助骨間鈍性分離，撐開肋骨，打開心包，暴露心臟，沿室間溝仔細(xì)找尋左冠狀動(dòng)脈前降支，在左心耳與肺動(dòng)脈圓錐處結(jié)扎血管，結(jié)扎線處套一聚乙烯管，仔細(xì)觀察II導(dǎo)聯(lián)心電圖，可發(fā)現(xiàn)隨著缺血時(shí)間延長，心電圖上會(huì)出現(xiàn)ST段抬高，心尖處可見心肌發(fā)白、水腫明顯，心尖搏動(dòng)減弱，缺血30 min后，放開結(jié)扎線，恢復(fù)血流灌注，再次監(jiān)測Ⅱ?qū)?lián)心電圖可見ST段逐漸回落，缺血心肌恢復(fù)為正常心肌色，可證明心肌缺血再灌注模型制備成功，再灌注2 h后，摘除心肌及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取血。

1.2.3給藥方法每日清晨空腹灌胃給藥1 次，連續(xù)7日。單純?nèi)毖俟嘧⒛Ｐ徒M: 生理鹽水2 mL/次，末次灌藥后1 h 行左主冠狀動(dòng)脈結(jié)扎30 min，再灌注2 h?？瞻捉M: 生理鹽水2 mL/次，末次灌藥后1 h于左主冠狀動(dòng)脈只穿線不結(jié)扎2 h。治療組: 藥物原液2 mL/次，末次灌藥后1 h 行左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎0.5 h，再灌注2 h。

1.2.4指標(biāo)檢測

(1)血清TNF-α含量測定，采用放射免疫法測定，按試劑盒說明書嚴(yán)格操作。

(2) 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均于心肌梗死模型復(fù)制成功0.5 h，再灌2 h 后，取下心臟，以結(jié)扎線為參考點(diǎn)剪取缺血區(qū)左室前壁心肌約0.2 g，運(yùn)用免疫組化法測定心肌組織中核因子κB 的表達(dá)。

1.2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用(x±s)表示，組間數(shù)據(jù)比較用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組比較用單因素方差分析，采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2　結(jié)　果

(1)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)缺血再灌注模型組中含量顯著高于其余各組(P<0.01), 川芎各治療組TNF-α含量與正常組均有所下降，而中劑量組顯著降低(P<0.01)，可發(fā)現(xiàn)川芎均可以減少大鼠炎性因子的生成，對(duì)炎癥損傷有保護(hù)和干預(yù)作用。見表1。

表1　各組大鼠血清TNF-α的含量(x±s)

注：與模型組比較，▲P<0.01，●P>0.05；與正常對(duì)照組比較，★P>0.05。

(2)空白組僅于心肌細(xì)胞的胞漿中有少量表達(dá)；模型組于胞漿和胞核中均有明顯表達(dá)；治療組均在NF-κB在胞漿和/或胞核中的表達(dá)有不同程度的減少，而于中劑量治療表達(dá)顯著減少。見心肌細(xì)胞切片圖(圖1)。

圖1　心肌細(xì)胞切片圖

3　討　論

心肌缺血炎癥時(shí)NF-κB的激活心肌缺血能誘導(dǎo)NF-κB的激活，參與心肌缺血后的炎癥反應(yīng)。多種炎癥遞質(zhì)基因的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子中包含κB位點(diǎn)[1]，如細(xì)胞間黏附分子-1、E-選擇素、血管細(xì)胞黏附分子-1、白細(xì)胞介素-1、IL、8、IL-6、腫瘤壞死因子-α和環(huán)氧合酶-2[2]，這些促炎因子促進(jìn)缺血區(qū)白細(xì)胞浸潤，進(jìn)一步誘導(dǎo)缺血性心肌損傷。抑制NF-κB活化是減輕心肌缺血炎癥損傷的重要途徑,NF-κB是心肌缺血炎癥反應(yīng)的中心環(huán)節(jié)[3]，所以拮抗NF-κB的活化，可能起到有效的抗炎效果，從而發(fā)揮心肌保護(hù)作用。心肌缺血啟動(dòng)一系列炎癥反應(yīng)，加重缺血性損傷，導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)病變，因此干預(yù)炎癥反應(yīng)是較有效的治療途徑。目前中藥在治療心肌缺血炎癥方面已有許多研究，但針對(duì)中藥作用于NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的研究還較少，到底中藥是否作用于這條途徑，又是如何作用于這條途徑起到心肌保護(hù)作用的還需要更深一步的研究。

目前復(fù)方研究甚多，川藥經(jīng)大量臨床證實(shí)有較強(qiáng)的抗心肌缺血再灌注損傷作用，但中醫(yī)單一藥物功效不是簡單的單味藥效，中藥具多靶向及多作用。本實(shí)驗(yàn)擬通過觀察川芎不同配伍對(duì)大鼠心肌缺血- 再灌注損傷因子-κB表達(dá)和TNF-α含量的影響，從而探討成方對(duì)心肌缺血- 再灌注損傷的療效以及是否優(yōu)于心肌缺血-再灌注損傷，并為以后川芎有效物質(zhì)的提取打下基礎(chǔ)，為新藥的發(fā)現(xiàn)提供科學(xué)依據(jù)。

[1] FENG Y, LIU Y M, LEBLANC M H, et al. Grape seed extract given three hours after injury suppresses lipid peroxidation and reduces hypoxic-ischemic brain injury in neonatal rats[J]. Pediatr Res, 2007 ,61(3):295-300.

[2]TOMOBE K, FUJII H, SUN B, et al. Modulation of infection-induced inflammation and locomotive deficit and longevity in senescence-accelerated mice-prone (SAMP8) model by the oligomerized polyphenol oligonol[J]. Biomed Pharmacother, 2007 ,61(7):427-434.

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Chuanxiong on Myocardial Ischemia Reperfusion Role of NF-κB

RAO Liliang

(Huizhou City of Guangdong Province Traditional Chinese Medicine Hospital, Guangdong Huizhou 516001, China)

ObjectiveTo investigate the mechanism of chuanxiong myocardial ischemia reperfusion therapy. Methods50 SD rats were randomly divided into five groups, each group 10, and the control group 10. A total of 60 rats. Blank control group (saline 20 mL/kg), model group (saline 20 mL/kg), Chuanxiong high dose (100 mg/kg), Chuanxiong dose (50 mg/kg), Chuanxiong low dose (25 mg/kg )group. Radioimmunoassay of serum TNF-α content in myocardial tissue expression of nuclear factor-κB measured using immunohistochemistry. ResultsSignificantly lower (P<0.01) than group therapy Chuanxiong of serum TNF-α content with the normal group, NF-κB activation of the normal group was significantly lower (P<0.01). Among them, the middle dose treatment group the most significant effect. ConclusionChuanxiong can reduce serum TNF-α, the reduction of myocardial tissue NF-κB activation degree, to the role of myocardial ischemia and reperfusion.

myocardial ischemia; reperfusion; TNF-α； NF-κB

1006-446X(2016)07-0010-04

2016 - 01 - 07

饒李亮(1982—)，男，廣東河源，本科，主治醫(yī)師，研究方向：心血管科。

R 285.5

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