東莞塘廈地區(qū)門診女性人乳頭瘤病毒感染調(diào)查

羅友軍，肖　媛，李廣平

(廣東省東莞三局醫(yī)院檢驗(yàn)科　523710)

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·臨床研究·

東莞塘廈地區(qū)門診女性人乳頭瘤病毒感染調(diào)查

羅友軍，肖媛，李廣平

(廣東省東莞三局醫(yī)院檢驗(yàn)科523710)

目的了解人乳頭瘤病毒(HPV)基因亞型在東莞塘廈地區(qū)女性人群中的感染狀況、型別分布和年齡分布等特點(diǎn)。方法選擇2013年1月至2015年12月東莞三局醫(yī)院皮膚性病科和婦科門診的女性宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本共3 316例，應(yīng)用導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)對其進(jìn)行分型檢測，分析HPV感染狀況及感染亞型的分布情況。結(jié)果HPV總感染率為25.21%(836/3 316)；HPV亞型的感染率高危型中較高的依次為52型(5.52%)，CP8304型(3.80%)，16型(3.71%)，58型(2.83%)，53型(2.68%)；低危型中6型(4.92%)，11型(3.80%)較高。其中單一型別感染率為16.04%，多重亞型混合感染率為9.17%。不同年齡段HPV感染率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論應(yīng)加強(qiáng)對該地區(qū)高危人群的干預(yù)，降低HPV的感染率。

人乳頭瘤病毒；基因分型；分子雜交；廣東

人乳頭瘤病毒(HPV)是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬的球形DNA病毒，感染區(qū)域主要是人的皮膚和黏膜的基底層上皮細(xì)胞，并引起皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖，迄今為止已發(fā)現(xiàn)170種亞型[1]。據(jù)研究表明，在常見的HPV型別中分高危型別和低危型別，型別的不同導(dǎo)致它們的生物學(xué)特性及致病性各不相同，高危型別的HPV主要與宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變、宮頸癌等有關(guān)；而低危型別的HPV主要與外生殖器病毒性疣、軟下疳等良性病變有關(guān)[2]。不同的年齡階段對HPV的敏感程度存在一定的差異，此外也存在一定的地區(qū)差異，故HPV分型檢測對女性宮頸病變的隨訪治療，宮頸癌的早期篩查及預(yù)后判斷具有重大的臨床意義；研究不同地區(qū)HPV基因型分布情況也有很大的現(xiàn)實(shí)意義。本次應(yīng)用導(dǎo)流雜交技術(shù)結(jié)合基因芯片技術(shù)對東莞塘廈地區(qū)門診女性的宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行HPV基因型的檢測[3]，通過對檢測結(jié)果的研究分析，了解該地區(qū)女性人群HPV的感染情況，不同亞型感染率分布及不同年齡段感染情況。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇2013年1月至2015年12月本院皮膚性病科和婦科門診的女性宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本共3 316例，年齡16～79歲，平均(38.7±11.3)歲,其中≤20歲98例，>20～30歲1 142例，>30～40歲1 256例，>40～50歲658例，>50～60歲138例，>60歲24例。

1.2儀器與試劑BIOER life Express PCR儀(杭州博日)；高速離心機(jī)(長沙湘儀離心機(jī)有限公司)；HybridMax醫(yī)用核酸分子快速雜交儀(廣東凱普生物科技股份有限公司)；檢測試劑為廣東凱普生物科技股份有限公司生產(chǎn)的21種HPV分型檢測試劑盒。

1.3方法21種HPV分型檢測試劑盒能檢測的基因型別包含16種高危亞型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304)和5種低危亞型(6、11、42、43、44)。

1.3.1宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本的核酸分離提取取800 μL標(biāo)本，嚴(yán)格按照試劑盒的說明書對標(biāo)本進(jìn)行離心、加熱等處理，提取標(biāo)本核酸。

1.3.2標(biāo)本核酸的PCR擴(kuò)增按照試劑盒說明書配制PCR擴(kuò)增試劑并分裝每管24 μL，加入待檢核酸1 μL，PCR反應(yīng)總體積為25 μL，按試劑盒說明書進(jìn)行40個(gè)循環(huán)擴(kuò)增，獲得擴(kuò)增產(chǎn)物。

1.3.3PCR產(chǎn)物雜交分析擴(kuò)增產(chǎn)物95 ℃變性5 min，迅速放入冰水浴，嚴(yán)格按照試劑盒說明書將擴(kuò)增產(chǎn)物加入到雜交儀中準(zhǔn)備好的芯片膜條上進(jìn)行雜交、洗膜、封阻、酶標(biāo)、洗膜、顯色、洗膜等實(shí)驗(yàn)步驟，實(shí)驗(yàn)結(jié)束取出芯片膜條判讀結(jié)果。

1.3.4結(jié)果判讀根據(jù)說明書上雜交膜具體探針位置，其中Biotin為雜交反應(yīng)對照點(diǎn)，IC點(diǎn)為PCR擴(kuò)增反應(yīng)對照點(diǎn)。正常結(jié)果的膜條中Biotin和IC這兩個(gè)點(diǎn)都會(huì)顯色，其他為陽性結(jié)果點(diǎn)。HPV單一型別感染時(shí)，在導(dǎo)流雜交膜芯片上相應(yīng)的HPV亞型探針位點(diǎn)處可見一藍(lán)紫色圓點(diǎn)，多重型別復(fù)合感染時(shí)，在膜上可見2個(gè)或2個(gè)以上的顯色斑點(diǎn)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理檢測統(tǒng)計(jì)所得的數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1HPV陽性率及各基因型陽性率本次研究共檢測3 316例標(biāo)本，其中HPV陽性標(biāo)本共有836例，陽性率為25.21%。HPV亞型的高危型中感染率較高的5種依次為52型(5.52%)，CP8304型(3.80%)，16型(3.71%)，58型(2.83%)，53型(2.68%)；低危型中6型(4.92%)，11型(3.80%)較高。各亞型的陽性率見表1。

表1　HPV不同亞型陽性率[n(%)]

注：基因型陽性率指該基因型單一感染或多重感染時(shí)出現(xiàn)的陽性率,例如某患者檢測結(jié)果為HPV16、18、31三種型別復(fù)合感染，那么計(jì)算時(shí)分別在HPV16、HPV18、HPV31中各計(jì)數(shù)1次。

2.2HPV亞型感染的比例在836例陽性結(jié)果中，單一型別的感染為524例，占感染總數(shù)的62.68%(524/836)，多重型別的感染為312例，占感染總數(shù)的37.32%(312/836)。

2.3HPV感染與年齡分布經(jīng)統(tǒng)計(jì)，在≤20歲組別中HPV陽性率最高，為39.80%，各年齡段之間的HPV陽性率比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2　HPV陽性率情況與年齡分布

3　討　論

HPV基因分型檢測技術(shù)是目前較先進(jìn)的基因檢測技術(shù)，其將PCR技術(shù)的高靈敏度、導(dǎo)流雜交技術(shù)的高特異性及基因芯片技術(shù)的高通量特點(diǎn)相結(jié)合，一次實(shí)驗(yàn)操作便能完成對21種HPV亞型的檢測，有很好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

HPV是一類以感染人體皮膚及黏膜復(fù)層鱗狀上皮細(xì)胞為主的乳頭瘤病毒，在女性生殖道中具有較高的感染率，據(jù)調(diào)查了解，很多關(guān)于HPV的研究表明了HPV 的感染情況存在著明顯的地區(qū)差異[4]。本次調(diào)查對3年來在本院的3 316例門診女性的宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行檢測統(tǒng)計(jì)，結(jié)果的HPV感染率為25.21%，與全國的平均水平14.20%[5]相比，明顯高于該水平，也高于成麗虹[6]研究報(bào)道的東莞莞城區(qū)的HPV感染率(15.4%)和李燦等[7]研究報(bào)道的成都成華區(qū)的HPV感染率(19.0%)，與閆琛等[8]研究報(bào)道的鄭州地區(qū)HPV感染率(25.9%)接近。由此說明HPV的感染情況存在一定的地域差異。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，東莞塘廈地區(qū)的HPV感染情況主要以單一感染為主。在本次研究的結(jié)果中高感染率的型別中有52型(5.52%)，6型(4.92%)，11型(3.80%)，CP8304型(3.80%)，16型(3.71%)，58型(2.83%)，53型(2.68%)，因本次調(diào)查研究的標(biāo)本對象有部分來自皮膚科門診的標(biāo)本，所以低危型中的6型和11型有較高的感染率。鮑彥平等[9]報(bào)道的中國婦女子宮頸HPV型別分布的Meta分析中提出HPV16、HPV58、HPV52型在亞洲(尤其在中國是高發(fā)區(qū))人群中具有重要的意義。這說明在各個(gè)地區(qū)HPV亞型的流行情況是不同的，這對疫苗的研發(fā)具有指導(dǎo)意義，因此在新一代的疫苗研發(fā)中，我國HPV疫苗的研發(fā)還應(yīng)該對HPV52和58型予以重視。

此次研究中發(fā)現(xiàn)，HPV在≤20歲的年齡段和>60歲的年齡段中感染率較高，認(rèn)為HPV的感染在趨于年輕化，這與≤20歲的年輕女性性行為提前，婚前性行為增多，性生活比較混亂，而高齡(>60歲)婦女隨著年齡的增加免疫力相對減弱有關(guān)。21～40歲年齡段的檢查例數(shù)最多，主要是因?yàn)樵撃挲g段的女性性生活相對比較活躍，因而出現(xiàn)的婦科問題也相對比較多，檢測篩查的意愿相對也比較強(qiáng)。

通過調(diào)查統(tǒng)計(jì)了解本地區(qū)的門診女性人群HPV感染的情況，不同HPV型別的感染率及不同年齡段感染率分布情況，及早發(fā)現(xiàn)HPV感染的高危人群，及早干預(yù)治療、跟蹤隨訪，對于研究本地區(qū)的HPV流行病學(xué)，降低本地區(qū)女性人群的HPV感染率，降低女性宮頸癌的發(fā)病率有重大的意義。

[1]Bzhalava D,Guan P,Franceschi S,et al.A systematic review of the prevalence of mucosal and cutaneous human papillomavirus types[J].Virology,2013,445(1/2):224-231.

[3]陳占國，周武，許張曄，等．導(dǎo)流雜交方法檢測人乳頭狀瘤病毒分型的臨床應(yīng)用[J]．中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2008，18(9)：1345-1348．

[4]張麗娜，周蓓蓓，陳昕華，等．區(qū)域性人乳頭狀瘤病毒基因型別檢測臨床研究[J]．中國婦幼保健，2010，25(16)：2216-2218．

[5]趙戴君，龔向真，胡爭光，等．上海市社區(qū)婦女子宮頸人乳頭瘤病毒感染現(xiàn)況及危險(xiǎn)因素研究[J]．現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2010，37(10)：1867-1870,1872．

[6]成麗虹．東莞市莞城區(qū)婦女人乳頭瘤病毒感染率及其對HPV疫苗的認(rèn)知情況調(diào)查[J]．深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志，2015，25(19)：188-190．

[7]李燦，陳偉，趙靜，等．婦科門診病人HPV分型檢測及感染情況分析[J]．西南軍醫(yī)，2015，17(3)：253-255．

[8]閆琛，楊廣英．鄭州市女性HPV感染狀況及基因型的分布情況調(diào)查[J]．中外醫(yī)學(xué)研究，2012，10(5)：64-66．

[9]鮑彥平，李霓，王鶴，等．中國婦女子宮頸人乳頭瘤病毒型別分布的Meta分析[J]．中華流行病學(xué)雜志，2007，28(10)：941-946．

2016-02-19修回日期：2016-05-19)

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.15.052

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1673-4130(2016)15-2177-03