手工和全自動儀器血培養(yǎng)結(jié)果的分析

唐恩波，解翠花

(新疆維吾爾自治區(qū)昌吉州中醫(yī)醫(yī)院檢驗科　831100)

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·臨床研究·

手工和全自動儀器血培養(yǎng)結(jié)果的分析

唐恩波，解翠花

(新疆維吾爾自治區(qū)昌吉州中醫(yī)醫(yī)院檢驗科831100)

目的對手工法雙相血培養(yǎng)瓶和BacT/Alert-3D240全自動血培養(yǎng)儀的檢出結(jié)果作回顧性分析。方法對2011～2013年使用手工雙向血培養(yǎng)瓶的615份血標(biāo)本與2014年使用全自動血培養(yǎng)儀的1 062份血標(biāo)本進行細菌陽性檢出率、檢出時間及檢出種類的比較。結(jié)果615例雙向血培養(yǎng)瓶陽性48例，陽性率為7.8%，污染率0.98%，48 h內(nèi)腸桿菌科細菌檢出率87.5%，葡萄球菌屬細菌檢出率83.3%。1 062例全自動血培養(yǎng)儀陽性99例分離出細菌，其中有臨床意義的病原菌86株，陽性率為8.2%；污染菌8株，污染率0.75%；假陽性5株，為0.47%；48 h內(nèi)腸桿菌科細菌檢出率95.5%，葡萄球菌屬細菌檢出率87%，鏈球菌檢出率42.9%。結(jié)論BacT/Alert-3D全自動血培養(yǎng)儀的陽性率稍高，并且檢出時間短，細菌檢出種類增多，提高了血培養(yǎng)送檢數(shù)。

血培養(yǎng)；手工雙向血培養(yǎng)瓶；全自動血培養(yǎng)儀；病原菌

血流感染包括菌血癥和敗血癥，在臨床上發(fā)病率和致死率都較高，而血培養(yǎng)是臨床判斷患者血液感染的金標(biāo)準(zhǔn)[1]。在實驗室條件有限的情況下采用手工雙向血培養(yǎng)瓶也能較好地給臨床提供病原學(xué)診斷，而隨著全自動微生物標(biāo)本接種儀的相繼問世，因其存在標(biāo)本接種速度快，操作誤差少，菌落分辨率高，檢測周期短等優(yōu)點，逐步受到微生物檢驗人員和臨床醫(yī)師的認(rèn)可。本文通過收集2011～2013年使用手工雙向血培養(yǎng)瓶的615份血標(biāo)本和2014年使用全自動血培養(yǎng)儀的1 062份血標(biāo)本的培養(yǎng)結(jié)果，對其作回顧性分析。

1　材料與方法

1.1標(biāo)本來源1 677例血培養(yǎng)標(biāo)本來自于2011年7月至2014年8月在本院就診的住院患者。

1.2儀器與試劑血培養(yǎng)瓶：鄭州安圖生物工程股份有限公司生產(chǎn)的手工雙相血培養(yǎng)瓶(需氧菌或兼性厭氧菌，以下稱手工血瓶)；法國生物梅里埃公司生產(chǎn)的BacT/Alert-3D240培養(yǎng)瓶：中和抗生素需氧瓶(FA瓶)、中和抗生素厭氧瓶(FN瓶)以及中和抗生素兒童瓶(PF瓶)。培養(yǎng)基：法國生物梅里埃公司生產(chǎn)的哥倫比亞血平板、巧克力平板，杭州天河微生物試劑公司生產(chǎn)的麥康凱干粉培養(yǎng)基。ATB-Expression細菌鑒定儀及配套鑒定藥敏條，全自動血培養(yǎng)儀BacT/Alert-3D240，VITEK 2-Compact細菌培養(yǎng)鑒定儀及配套鑒定藥敏卡，均為法國生物梅里埃公司生產(chǎn)。質(zhì)控菌株：標(biāo)準(zhǔn)菌株金黃色葡萄球菌ATCC29213、大腸埃希菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853和糞腸球菌ATCC29212。

1.3方法

1.3.1手工血培養(yǎng)以無菌操作取靜脈血5～8 mL注入手工血瓶中，搖勻，放置35 ℃溫箱，每天上午、下午兩次觀察液體及固體培養(yǎng)基上有無細菌生長，如有細菌生長，涂片染色并轉(zhuǎn)種血平板、巧克力和麥康凱平板，使用ATB-Expression細菌鑒定儀進行鑒定及藥敏試驗；連續(xù)培養(yǎng)7 d無細菌生長報告陰性。

1.3.2儀器法按照BacT/Alert-3D240血培養(yǎng)儀標(biāo)本采集量的要求，采集患者血液后注入相應(yīng)的培養(yǎng)瓶，成人加入FA和FN瓶，兒童加入PF瓶，儀器報警，進行涂片鏡檢并轉(zhuǎn)種，若有細菌生長為陽性，用VITEK 2-Compact全自動細菌鑒定儀做鑒定藥敏；5 d無陽性報警，報告為陰性；當(dāng)儀器提示陽性，涂片培養(yǎng)均未見細菌為假陽性，污染菌按照《臨床微生物實驗室血培養(yǎng)操作規(guī)范》[2]及《實驗室對血培養(yǎng)污染的評估方案》[3]的依據(jù)判讀。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，計數(shù)資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1兩種培養(yǎng)瓶陽性檢出率比較2011年7月至2013年7月615例手工雙向血培養(yǎng)瓶共培養(yǎng)出48株病原菌，陽性率7.8%；2013年8月至2014年8月，1 062例儀器法血培養(yǎng)共培養(yǎng)出病原菌99株，其中來自污染13株，有臨床意義病原菌86株，陽性率8.2%；二者陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1　兩種血液培養(yǎng)方法陽性結(jié)果

2.248 h內(nèi)兩種血培養(yǎng)方法細菌陽性檢出率比較48 h內(nèi)使用儀器法對于腸桿菌科、葡萄球菌屬細菌檢出率均高于手工方法，并檢出了手工法未檢出過的鏈球菌，結(jié)果見表2。

表2　48 h兩種血培養(yǎng)方法陽性檢出率(%)

注：-表示無數(shù)據(jù)。

2.3兩種血液培養(yǎng)方法的細菌分離種類手工法分離出細菌48株，儀器法分離出細菌99株(污染菌8株，假陽性5株)，病原菌86株。兩種方法分離的細菌中均以革蘭陰性桿菌為主要病原菌，其中腸桿菌科細菌檢出率最高，其次是葡萄球菌屬細菌。儀器法檢出細菌種類較手工法多，尤其是對鏈球菌的檢出種類有所增加，如星座鏈球菌、無乳鏈球菌、似腸膜明串珠菌等，結(jié)果見表3。

表3　兩種血培養(yǎng)方法分離細菌種類

3　討　論

3.1陽性率結(jié)果的比較分析本研究中手工法與儀器法血培養(yǎng)陽性率分別為7.8%和8.1%，二者差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。儀器法的陽性率遠遠低于龔興旺報道的血培養(yǎng)15.1%陽性率[4]。根據(jù)本院的實際情況分析原因可能為以下幾點：(1)手工法多數(shù)標(biāo)本系臨床癥狀嚴(yán)重、并有明顯的敗血癥癥狀的患者血標(biāo)本，陽性率較高。手工法耗時長，需要觀察7 d，用肉眼觀察不易及時發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶內(nèi)的微小變化，需要細菌達到一定的量，瓊脂層有細菌生長時才能觀察到，因而延長了培養(yǎng)時間，嚴(yán)重影響醫(yī)生的診斷和治療，甚至患者治療好轉(zhuǎn)出院，檢驗報告單還沒有發(fā)出，導(dǎo)致微生物檢驗嚴(yán)重滯后于日益發(fā)展的臨床需求。輕度感染時，醫(yī)生習(xí)慣經(jīng)驗用藥，只有患者癥狀嚴(yán)重，感染明確，經(jīng)驗使用抗菌藥物無效時候開血培養(yǎng)檢驗，多為陽性結(jié)果。(2)儀器法標(biāo)本采集不規(guī)范合格率較低。儀器法陽性率與標(biāo)本采集瓶數(shù)和采集時間有關(guān)，需要在患者未使用抗菌藥物之前或是在患者高熱寒戰(zhàn)時采集血標(biāo)本，同時采集兩套標(biāo)本。血培養(yǎng)陽性分離菌分布廣泛，不同病原菌間耐藥性亦不相同[5]，需要規(guī)范送檢了解血培養(yǎng)病原菌分布和耐藥性的監(jiān)測，指導(dǎo)臨床治療。但是本院正處在發(fā)展時期，年輕的新醫(yī)生較多，對血培養(yǎng)標(biāo)本的采集時間、采集部位、采集數(shù)量不清楚，導(dǎo)致標(biāo)本采集不合格，是導(dǎo)致儀器法陽性率較低的主要原因。(3)抗菌藥物臨床應(yīng)用專項整治活動中對住院患者使用抗菌藥物前的送檢率提出了要求和規(guī)定，某些醫(yī)師為完成指標(biāo)，無指征進行血培養(yǎng)，增加了血培養(yǎng)標(biāo)本基數(shù)，導(dǎo)致儀器法陽性率較低。(4)微生物檢驗人員數(shù)量不足，對科室與臨床醫(yī)生關(guān)于規(guī)范標(biāo)本采集的宣教不到位，也是導(dǎo)致儀器法陽性率較低的一個原因。由此可見，提高醫(yī)生對血培養(yǎng)檢驗的認(rèn)識，規(guī)范護士采集方法，參照《血培養(yǎng)檢測規(guī)范化操作》采集標(biāo)本[6]，加強相關(guān)知識的宣傳教育，才能提高儀器法的陽性率，發(fā)揮其優(yōu)勢。

3.2儀器法血培養(yǎng)瓶檢出細菌種類較多近年來由于抗菌藥物的普遍使用及醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，使菌血癥的致病菌種類有了較大變化，條件致病菌、苛養(yǎng)菌所致菌血癥有增多趨勢。兩種方法中均以革蘭陰性桿菌為主要病原菌，其中腸桿菌科細菌檢出率最高，其次是葡萄球菌屬細菌，與張凱等[7]、趙憶文等[8]報道的結(jié)果相似，也是革蘭陰性菌檢出數(shù)量占優(yōu)勢。據(jù)報道在美國、日本等已發(fā)現(xiàn)耐萬古霉素的葡萄球菌[9-10]，我國目前雖未檢出對萬古霉素耐藥的金黃色葡萄球菌，但此項感染防控工作依然需重視。采用手工法在615份血液中分離出12種48株病原菌，儀器法在1 062份血液中共分離出24種86株病原菌，在病原菌種類上儀器法明顯優(yōu)于手工法，而對于腸桿菌科及葡萄球菌的鑒定兩種方法檢出率無明顯差異。儀器法對于苛養(yǎng)菌和鏈球菌明顯優(yōu)于手工法，對鏈球菌的檢出種類有明顯提高，對革蘭陰性苛養(yǎng)菌檢出也有明顯優(yōu)勢，如多殺巴斯德菌、布魯氏桿菌這些對生長要求高的細菌， FA(PF)和FN培養(yǎng)瓶中含有的活性炭可吸附抗菌藥物，使細菌的抑制得到解除，加之培養(yǎng)基中營養(yǎng)豐富，保證了細菌正常的生長繁殖。

本研究中儀器血培養(yǎng)法較手工血培養(yǎng)法陽性率有小幅度提高，縮短了報告時間、增加了病原菌檢出種類及準(zhǔn)確度，同時細菌的送檢標(biāo)本數(shù)有了大幅度提高，對于運用細菌培養(yǎng)結(jié)果指導(dǎo)臨床醫(yī)師正確使用抗菌藥物治療提供了更大的支持。需要繼續(xù)加強與臨床醫(yī)師的溝通，提高血培養(yǎng)標(biāo)本送檢的意識，規(guī)范血培養(yǎng)采集方法，掌握血培養(yǎng)標(biāo)本的采集時間、部位和數(shù)量，降低污染率，進一步提高儀器血培養(yǎng)法的陽性率。

[1]儲新民，孔建新．某三甲醫(yī)院2010年血培養(yǎng)標(biāo)本中細菌分布及耐藥分析[J]．臨床輸血與檢驗，2012，14(3)：208-211．

[2]中華醫(yī)學(xué)會檢驗醫(yī)學(xué)分會.臨床微生物實驗室血培養(yǎng)操作規(guī)范[S].北京：中華人民共和國衛(wèi)生部，2012.

[3]唐明忠．實驗室對血培養(yǎng)污染的評估方案[J]．臨床檢驗與實驗室設(shè)備，2005，7(2)：155-157．

[4]龔興旺，周永，白梅，等．應(yīng)用全自動血培養(yǎng)儀提高血液、無菌體液培養(yǎng)陽性率的臨床觀察[J]．黔南民族醫(yī)專學(xué)報，2015，28(1)：32-33．

[5]劉德華，秦海燕，胡大春，等．463株血培養(yǎng)陽性病原菌分布及耐藥分析[J]．中國執(zhí)業(yè)藥師，2015，12(4)：11-15．

[6]徐英春，倪語星，王金良．血培養(yǎng)檢測規(guī)范化操作[M]．上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2012．

[7]張凱，喻華，黃湘寧，等．8548例血流感染病原菌分布及耐藥性分析[J]．中國執(zhí)業(yè)藥師，2014，11(9)：3-8．

[8]趙憶文，朱召芹，蔡金鳳，等．上海某醫(yī)院2011年1至5月住院病例2044份血及體液標(biāo)本血培養(yǎng)結(jié)果分析[J]．檢驗醫(yī)學(xué)，2014，12(2)：100-103．

[9]Rahkonen M,Luttinen S,Koskela M,et al.True bacteremias caused by coagulase negative Staphylococcus are difficult to distinguish from blood culture contaminants[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2012,31(10):2639-2644.

[10]Healy CM,Baker CJ,Palazzi DL,et al.Distinguishing true coagulase-negative Staphylococcus infections from contaminants in the neonatal intensive care unit[J].J Perinatol,2013,33(1):52-58.

2016-01-09修回日期：2016-05-01)

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.15.045

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1673-4130(2016)15-2163-03