莆田市191例珠蛋白生成障礙性貧血基因型研究

俞柳敏，林　華，張秋燕，張艷艷，陳元星

(1.莆田學(xué)院附屬醫(yī)院，福建莆田 351100；2.福建省莆田市城廂區(qū)醫(yī)院　351100)

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·臨床研究·

莆田市191例珠蛋白生成障礙性貧血基因型研究

俞柳敏1，林華1，張秋燕1，張艷艷1，陳元星2

(1.莆田學(xué)院附屬醫(yī)院，福建莆田 351100；2.福建省莆田市城廂區(qū)醫(yī)院351100)

目的了解莆田市珠蛋白生成障礙性貧血基因分布情況。方法采用PCR結(jié)合基因芯片技術(shù)檢測(cè)405例珠蛋白生成障礙性貧血疑似攜帶者。結(jié)果在405例疑似珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者中確診191例，其中α珠蛋白生成障礙性貧血114例，β珠蛋白生成障礙性貧血74例，αβ復(fù)合珠蛋白生成障礙性貧血3例。3種常見的α珠蛋白生成障礙性貧血基因型是--SEA、-α3.7、-α4.2，突變頻率分別是72.8%、15.8%、2.6%。最常見的β珠蛋白生成障礙性貧血基因型是IVS-Ⅱ-654/N、CD41-42/N和CD17/N，突變頻率分別是54%、21.6%和13.5%。檢測(cè)還發(fā)現(xiàn)了5種復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血基因。結(jié)論該次研究闡明莆田市珠蛋白生成障礙性貧血基因型和分布情況，為莆田市開展珠蛋白生成障礙性貧血遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷提供依據(jù)。

珠蛋白生成障礙性貧血；基因分型；基因診斷

珠蛋白生成障礙性貧血是一組單基因遺傳性慢性溶血性疾病。珠蛋白生成障礙性貧血是由紅細(xì)胞血紅蛋白的珠蛋白肽鏈基因缺失或突變，導(dǎo)致珠蛋白肽鏈的合成抑制、失衡，引起無效造血和溶血。珠蛋白生成障礙性貧血分為α珠蛋白生成障礙性貧血和β珠蛋白生成障礙性貧血兩類。α珠蛋白生成障礙性貧血主要分布于東南亞、中國南方和少數(shù)非洲地區(qū)，β珠蛋白生成障礙性貧血主要分布于地中海地區(qū)、中東、印巴地區(qū)和中國南方地區(qū)。珠蛋白生成障礙性貧血具有嚴(yán)重的致死和致殘性，需要長(zhǎng)期、昂貴的治療，給家庭帶來沉重的精神負(fù)擔(dān)和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。為了解莆田市珠蛋白生成障礙性貧血基因分布情況，本院對(duì)405例疑似珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶者進(jìn)行基因診斷。

1　資料與方法

1.1研究對(duì)象選擇2014年1月至2015年12月在本院進(jìn)行珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)的405例疑似攜帶者，其中男63例、女342例，年齡1個(gè)月至83歲。

1.2方法

1.2.1基因提取抽取乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝外周血2 mL，采用潮州凱普公司提供的基因提取試劑盒提取DNA。

1.2.2珠蛋白生成障礙性貧血基因診斷采用潮州凱普公司提供檢測(cè)試劑盒對(duì)標(biāo)本進(jìn)行基因診斷。擴(kuò)增儀采用ABI 7500。α珠蛋白生成障礙性貧血采用Gap-PCR技術(shù)擴(kuò)增，β珠蛋白生成障礙性貧血采用一般PCR技術(shù)擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)反向點(diǎn)雜交法(RDB)雜交，通過酶促反應(yīng)判讀結(jié)果。同步檢測(cè)3種缺失型α珠蛋白生成障礙性貧血(--SEA、-α3.7、-α4.2)、3種突變型α珠蛋白生成障礙性貧血(CS、QS、WS)、15種基因型β珠蛋白生成障礙性貧血(IVS-Ⅱ-654、-28、-29、CD14-15、CD17、CD27-28、βE、CD41-42、CD43、CD71-72、IVS-Ⅰ-1、IVS-Ⅰ-5、Cap、Int、CD31)。

2　結(jié)　果

2.1檢測(cè)結(jié)果405例疑似攜帶者經(jīng)過基因診斷，確診191例，檢出率為47.2%。其中α珠蛋白生成障礙性貧血114例(59.7%)，β珠蛋白生成障礙性貧血74例(38.7%)，αβ復(fù)合珠蛋白生成障礙性貧血3例(1.6%)。首次在莆田市發(fā)現(xiàn)1例三重雜合子珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶者。

2.2α珠蛋白生成障礙性貧血基因型檢測(cè)結(jié)果114例α珠蛋白生成障礙性貧血患者中最常見的基因型是--SEA，其次是-α3.7。各種基因突變型及突變頻率見表1。雙重α雜合子檢出4例，基因型分別為-α3.7/--SEA和-α4.2/--SEA。檢出α珠蛋白生成障礙性貧血純合子1例。

2.3β珠蛋白生成障礙性貧血基因型檢測(cè)結(jié)果74例β基因攜帶者中基因突變頻率為38.7%。具體各基因型及突變頻率見表2。未檢出β珠蛋白生成障礙性貧血純合子和雙重β雜合子。

2.4αβ復(fù)合珠蛋白生成障礙性貧血基因型檢測(cè)結(jié)果檢出3例(1.6%)αβ復(fù)合珠蛋白生成障礙性貧血患者。-α3.7/ααβ-28、和--SEA/ααβ-28各檢出1例。檢出莆田市首例三重雜合子，基因型為-α4.2/ααβE/CD41-42，為國內(nèi)罕見基因型。

表1　α珠蛋白生成障礙性貧血基因型及突變頻率

表2　β珠蛋白生成障礙性貧血基因型及突變頻率

3　討　論

珠蛋白生成障礙性貧血是中國南方危害最大的遺傳病之一，發(fā)病率全球第3。α珠蛋白生成障礙性貧血是由于位于16號(hào)染色體上的α珠蛋白基因缺失或突變使α珠蛋白合成受抑制，造成α鏈減少，過剩的β鏈在紅細(xì)胞內(nèi)沉積，使紅細(xì)胞變形性降低，紅細(xì)胞破壞增多。β珠蛋白生成障礙性貧血是由于位于11號(hào)染色體上的β珠蛋白基因突變導(dǎo)致β珠蛋白合成受抑制，過剩的α鏈在紅細(xì)胞內(nèi)沉積導(dǎo)致紅細(xì)胞過度被破壞。

本研究顯示莆田市α珠蛋白生成障礙性貧血基因構(gòu)成前3位是--SEA、-α3.7、-α4.2，這與我國廣東、廣西、四川、重慶等地報(bào)道一致[1-4]。莆田市β珠蛋白生成障礙性貧血基因構(gòu)成前3位分別是IVS-Ⅱ-654/N、CD41-42/N和CD17/N。國內(nèi)其他地區(qū)β珠蛋白生成障礙性貧血的主要3種基因型也相同，但是在排序上有不同，體現(xiàn)出β珠蛋白生成障礙性貧血較α珠蛋白生成障礙性貧血有更明顯的地區(qū)差異性和遺傳異質(zhì)性。同時(shí)發(fā)現(xiàn)在福建省內(nèi)，IVS-Ⅱ-654/N是最主要的β珠蛋白生成障礙性貧血基因型[5-7]。

本次研究發(fā)現(xiàn)在疑似攜帶者中珠蛋白生成障礙性貧血的檢出率為47.2%，很大比例的疑似攜帶者珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)為陰性。原因有：(1)是本次珠蛋白生成障礙性貧血篩查主要手段為血常規(guī)檢測(cè)，判斷篩查陽性的標(biāo)準(zhǔn)為血紅蛋白(Hb)<110 g/L，紅細(xì)胞平均血紅蛋白量(MCH)<27 pg，紅細(xì)胞平均體積(MCV)<80 fL。符合這種血常規(guī)結(jié)果的疾病不只有珠蛋白生成障礙性貧血，還有缺鐵性貧血、鐵粒幼細(xì)胞貧血、慢性病貧血等。(2)是檢測(cè)范圍有限，只能檢測(cè)已知基因型，少見或未知基因型不能檢出。Galehdari等[8]用基因測(cè)序技術(shù)在伊朗發(fā)現(xiàn)42種β珠蛋白生成障礙性貧血基因型，遠(yuǎn)高于本研究采用方法所能檢測(cè)的15種基因型?；驕y(cè)序技術(shù)能檢測(cè)更多的珠蛋白生成障礙性貧血基因型，但是實(shí)驗(yàn)要求條件高，檢測(cè)費(fèi)用高，目前還難以在臨床廣泛使用。

本次研究病例中，進(jìn)行珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)的人群主要是育齡婦女和兒童，成年男性和老年男女性較少。由此可見，經(jīng)過多年在婦幼保健系統(tǒng)中的推廣及經(jīng)驗(yàn)交流，婦產(chǎn)科醫(yī)生和兒科醫(yī)生對(duì)血常規(guī)存在異常的病例警惕性較高。由于沒有莆田市珠蛋白生成障礙性貧血方面的流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)支持，其他普通?？漆t(yī)生的珠蛋白生成障礙性貧血防治觀念淡漠。珠蛋白生成障礙性貧血預(yù)防相關(guān)知識(shí)急需進(jìn)一步普及和推廣，以減少珠蛋白生成障礙性貧血的漏診。

[1]劉富華，賈藝聰，陳潔晶，等．廣西地區(qū)13 589例地中海貧血篩查結(jié)果及基因突變類型分析[J]．臨床血液學(xué)雜志，2015，28(6)：966-969．

[2]杜麗，尹愛華，張彥，等．2171例地中海貧血產(chǎn)前基因診斷回顧性分析[J]．國際婦產(chǎn)科學(xué)雜志，2012，39(2)：208-210．

[3]杜偉，歐陽小峰，甘承文，等．重慶地區(qū)8 024例地中海貧血篩查結(jié)果及地貧基因型分析[J]．重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，39(5)：694-697．

[4]王霞，江虹，賈勁，等．四川地區(qū)人群地中海貧血的篩查及基因分析[J]．生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志，2011，28(1)：135-137．

[5]成明，李健，郭奇?zhèn)?，等．廈門地區(qū)3 715例地中海貧血基因檢測(cè)結(jié)果分析[J]．中國婦幼保健，2015，30(12)：1870-1872．

[6]黃海龍，徐兩蒲，林娜，等．福州地區(qū)153例地中海貧血基因突變類型、頻率及產(chǎn)前診斷研究[J]．海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2009，15(4)：1-3．

[7]吳琦嫦，周裕林，江雨，等．廈門地區(qū)β地中海貧血基因突變類型及產(chǎn)前基因診斷研究[J]．中國優(yōu)生與遺傳雜志，2007，15(12)：25-26．

[8]Galehdari H,Salehi B,Azmoun S,et al.Comprehensive spectrum of the β-Thalassemia mutations in Khuzestan,southwest Iran[J].Hemoglobin,2010,34(5):461-468.

2016-01-28修回日期：2016-05-26)

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.15.040

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1673-4130(2016)15-2154-02