Sysmex-XE5000、CellaVisionDM96及人工顯微鏡分類瘧疾患者外周血白細(xì)胞百分比的差異*

侯志平，張秋萍，葉飛娣，張仲明，張文萍△

(1.廣東省深圳市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，518114；2.廣東省深圳市羅湖區(qū)婦幼保健院婦產(chǎn)科 518019)

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·論著·

Sysmex-XE5000、CellaVisionDM96及人工顯微鏡分類瘧疾患者外周血白細(xì)胞百分比的差異*

侯志平1，張秋萍2，葉飛娣1，張仲明1，張文萍1△

(1.廣東省深圳市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，518114；2.廣東省深圳市羅湖區(qū)婦幼保健院婦產(chǎn)科 518019)

目的比較瘧疾患者通過Sysmex-XE5000、CellaVisionDM96及人工顯微鏡分類外周血白細(xì)胞百分比的差異性，驗(yàn)證Sysmex-XE5000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)瘧疾患者血常規(guī)中白細(xì)胞分類結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠性。方法回顧性收集2011年1月至2015年12月深圳市第三人民醫(yī)院收治的82例確診瘧疾患者經(jīng)Sysmex-XE5000行血常規(guī)白細(xì)胞百分比的數(shù)據(jù)；82例瘧疾患者外周血涂片經(jīng)CellaVisionDM96行白細(xì)胞分類所得百分?jǐn)?shù)；再經(jīng)人工顯微鏡檢82例瘧疾患者外周血涂片進(jìn)行白細(xì)胞分類計(jì)算后的百分?jǐn)?shù)。結(jié)果Sysmex-XE5000、CellaVisionDM96及人工鏡檢分類瘧疾患者外周血白細(xì)胞百分?jǐn)?shù)兩兩比較中，僅見CellaVisionDM96組與人工顯微鏡組的單核細(xì)胞百分比比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其他差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論通過比較Sysmex-XE5000、CellaVisionDM96及人工顯微鏡檢分類瘧疾患者外周血白細(xì)胞百分比數(shù)據(jù)，表明Sysmex-XE5000分類白細(xì)胞數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、可靠，瘧原蟲并未影響外周血白細(xì)胞分類，但在CellaVisionDM96分類審核時(shí)需注意單核細(xì)胞分類。

瘧疾；外周血涂片；血細(xì)胞形態(tài)；白細(xì)胞分類；百分比

隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展及應(yīng)用過程的不斷改進(jìn)，現(xiàn)代化臨床實(shí)驗(yàn)室離不開血常規(guī)自動(dòng)化分析流水線，深圳市第三人民醫(yī)院多年來應(yīng)用Sysmex-XE5000血常規(guī)自動(dòng)化分析流水線大大提高了臨床診斷的速度，但是，發(fā)現(xiàn)瘧疾患者在 Sysmex-XE2100血細(xì)胞分析儀上存在嗜酸性粒細(xì)胞假性增加[1]。高曉玲等人分析稱瘧疾患者嗜酸性粒細(xì)胞增高；也有報(bào)道稱嗜酸性粒細(xì)胞增高程度預(yù)示瘧原蟲感染的嚴(yán)重程度[2]；以上說法均未通過儀器法和金標(biāo)準(zhǔn)鏡檢法相比對(duì)。血細(xì)胞形態(tài)學(xué)目前仍以人工鏡檢作為金標(biāo)準(zhǔn)，但步驟較繁瑣，工作人員費(fèi)時(shí)費(fèi)力，因此各大型醫(yī)院正在不斷引進(jìn) CellaVisionDM96 全自動(dòng)血細(xì)胞分析系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)血涂片形態(tài)學(xué)檢查的自動(dòng)化，因此很有必要比較血細(xì)胞分析儀、閱片機(jī)及人工鏡檢法分類白細(xì)胞的差異來驗(yàn)證結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠性。

1　資料與方法

1.1一般資料回顧性收集2011年1月至2015年12月深圳市第三人民醫(yī)院收治的經(jīng)外周血厚薄涂片診斷瘧疾的患者82例，血涂片診斷符合世界衛(wèi)生組織的瘧疾診斷標(biāo)準(zhǔn)(WS259-2006)，其中男79例、女3例，年齡2～69歲、平均(43.40±20.24)歲。

1.2儀器與試劑DM96自動(dòng)化數(shù)字細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析儀(瑞典CellaVision AB公司)；XE-5000血細(xì)胞分析儀(日本Sysmex公司)；徠卡顯微鏡(德國Leica公司)。各儀器均使用配套試劑及其質(zhì)控液(日本Sysmex公司)；瑞氏-吉姆薩染液(珠海貝索生物技術(shù)有限公司)。

1.3方法回顧性收集瘧疾患者的乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝全血在Sysmex-XE5000血細(xì)胞分析儀行白細(xì)胞分類檢測(cè)的百分比結(jié)果作為XE5000組的結(jié)果；制作外周血涂片取適量血在潔凈的鈍角載玻片上制作厚薄血膜，經(jīng)姬氏染色自然晾干后，由經(jīng)驗(yàn)豐富的臨床檢驗(yàn)人員借助顯微鏡在厚涂片下查找瘧原蟲為診斷標(biāo)準(zhǔn)，取此82張片在CellaVisionDM96閱片機(jī)上薄涂片體尾交界處選定合適的區(qū)域進(jìn)行分類，再經(jīng)具有5年以上工作經(jīng)驗(yàn)的血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)人員對(duì)DM96白細(xì)胞預(yù)分類后的細(xì)胞圖像進(jìn)行審核，對(duì)預(yù)分類矯正后得出的白細(xì)胞百分比數(shù)據(jù)為DM96組結(jié)果；取此82張片經(jīng)兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的血細(xì)胞形態(tài)專家采用雙盲法在油鏡下使用“城墻式”法在體尾交界處100倍油鏡下分類計(jì)數(shù)200個(gè)白細(xì)胞[3]，取兩位專家分類計(jì)數(shù)白細(xì)胞的百分比平均值作為人工鏡檢組的結(jié)果。采血和檢驗(yàn)過程均嚴(yán)格按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第4版)[4]進(jìn)行操作完成。

2　結(jié)　果

2.1XE5000組與DM96組比較XE5000組血常規(guī)細(xì)胞計(jì)數(shù)得出的五分類白細(xì)胞百分比與CellaVisionDM96血細(xì)胞形態(tài)分析系統(tǒng)閱讀白細(xì)胞五分類得出的白細(xì)胞百分比比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

2.2XE5000組與人工鏡檢組比較XE5000組Sysmex-XE5000血細(xì)胞分析儀檢測(cè)得出血常規(guī)五分類白細(xì)胞百分與人工鏡檢組按五分類鏡檢得出的各類白細(xì)胞百分比比較，其差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

2.3DM96組與人工鏡檢組比較DM96組CellaVisionDM96血細(xì)胞形態(tài)分析系統(tǒng)得出的五分類白細(xì)胞百分比與人工鏡檢組得出的各類白細(xì)胞百分比比較，僅單核細(xì)胞(MONO)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其他差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1　白細(xì)胞五分類參數(shù)百分?jǐn)?shù)比對(duì)情況(%)

注：與人工鏡檢組比較，*P<0.05。

3　討　論

本地區(qū)瘧疾患者均收治在深圳市第三人民醫(yī)院治療，發(fā)現(xiàn)多次報(bào)道Sysmex-XE2100血液分析儀檢測(cè)瘧疾患者的血常規(guī)時(shí)嗜酸性粒細(xì)胞受到影響。該儀器主要是通過前向散射光來檢測(cè)細(xì)胞大小，通過側(cè)向散射光來檢測(cè)細(xì)胞的內(nèi)容物如顆粒和核，通過側(cè)向熒光來檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)DNA或RNA的含量[5]。當(dāng)一些中性粒細(xì)胞吞噬了瘧色素后，這些細(xì)胞內(nèi)容物發(fā)生了變化。由于瘧色素是一種雙折光晶體，使檢測(cè)內(nèi)容物的側(cè)向散射光強(qiáng)度和角度發(fā)生改變，在DIFF通道散射圖中顯示為靠近中性粒細(xì)胞一側(cè)的散點(diǎn)圖，儀器誤認(rèn)為是嗜酸性粒細(xì)胞。同時(shí)，瘧原蟲的瘧色素與試劑中染料結(jié)合后被顯示為不正常散射光模式，導(dǎo)致儀器不能識(shí)別吞噬了瘧色素的白細(xì)胞而未做分類[6-7]。

外周血白細(xì)胞分類是臨床醫(yī)生診斷和治療疾病的重要參考資料，有學(xué)者提出，在形態(tài)學(xué)檢查方面五分類血細(xì)胞分析儀只能作為過篩手段，細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查應(yīng)列入常規(guī)工作[8]，但人工鏡檢法越來越承受不了日益增長的標(biāo)本量。

隨著血細(xì)胞形態(tài)分析系統(tǒng)閱片機(jī)出現(xiàn)在各臨床實(shí)驗(yàn)室，給臨床檢驗(yàn)人員帶來幫助的同時(shí)，其是否可替代人工操作顯微鏡鑒別血細(xì)胞形態(tài)，結(jié)果是否可靠，以及與全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀和人工鏡檢結(jié)果的關(guān)系如何也成為值得探討的問題。深圳市第三人民醫(yī)院自2010年以來一直應(yīng)用Sysmex-XE5000血細(xì)胞分析儀、Sysmex-SP1000i自動(dòng)推片機(jī)組成的流水線檢測(cè)血常規(guī)，2011年1月至2015年12月發(fā)現(xiàn)并收治瘧疾患者82例均未見Sysmex-XE5000血細(xì)胞分析儀檢測(cè)血常規(guī)未分類白細(xì)胞，但觀察散點(diǎn)圖有與Sysmex XE-2100相似圖像處；深圳市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科實(shí)驗(yàn)室閱讀細(xì)胞形態(tài)同時(shí)還采用人工顯微鏡分類，引進(jìn)了CellaVisionDM96閱片系統(tǒng)在深圳市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科試用了一段時(shí)間完成了一定數(shù)量閱片驗(yàn)證了復(fù)片規(guī)則，在此期間，該實(shí)驗(yàn)室使用此DM96閱片系統(tǒng)完成歷年深圳市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科保存的瘧疾患者外周血涂片，得到各患者的白細(xì)胞五分類的百分比。本研究比較Sysmex-XE5000、CellaVisionDM96及人工顯微鏡分類瘧疾患者外周血白細(xì)胞百分比的差異，結(jié)果顯示僅見CellaVisionDM96組與人工顯微鏡組的單核細(xì)胞百分比相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其他差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。分析該原因可能是CellaVisionDM96審核與人工顯微鏡均受主觀因素影響，且CellaVisionDM96在分類幼稚細(xì)胞、單核細(xì)胞等中間細(xì)胞時(shí)有缺陷，在外周血片中出現(xiàn)頻率低的細(xì)胞(單核細(xì)胞) 相關(guān)性較差，該結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道基本相當(dāng)[9-10]。宋蓓等[11]報(bào)道單核細(xì)胞在DM96和人工鏡檢中相關(guān)性R值偏低的原因可能是因?yàn)镈M96分析軟件主要從形態(tài)、顏色、顆粒、液泡、函數(shù)、紋理6個(gè)方面提取細(xì)胞特征，而單核細(xì)胞形態(tài)相對(duì)多變，胞質(zhì)、顆粒受推片、染色以及顯示器成像效果影響較大，另外單核細(xì)胞數(shù)量較少，也影響到相關(guān)系數(shù)計(jì)算；與蔣敘川等[12]研究SysmexXE-5000血液分析儀與人工顯微鏡鏡檢白細(xì)胞分類中嗜堿性粒細(xì)胞的相關(guān)性較差相一致，均為細(xì)胞數(shù)量少所導(dǎo)致。

瘧疾的發(fā)病是由瘧原蟲在紅細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行裂解增殖所引起。當(dāng)受瘧原蟲感染的紅細(xì)胞破裂時(shí),釋放出大量的裂殖子及在裂解增殖過程中產(chǎn)生的各種代謝產(chǎn)物,這些代謝產(chǎn)物最終被具有吞噬能力的血細(xì)胞所吞噬。當(dāng)部分單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞吞噬裂殖子、瘧原蟲的代謝產(chǎn)物瘧色素后,導(dǎo)致單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞中內(nèi)容物異常,血細(xì)胞分析檢測(cè)時(shí)側(cè)向散射光強(qiáng)度及側(cè)向熒光強(qiáng)度均發(fā)生改變,最終在白細(xì)胞分類散點(diǎn)圖上出現(xiàn) 3種特征性散點(diǎn)圖[6-7]。再者，DM96的審核過程及人工鏡檢均受主觀因素影響。原本推斷嗜酸性粒細(xì)胞在XE5000血細(xì)胞分析儀有所增高，可喜的是結(jié)果顯示差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由此可見，經(jīng)過與DM96及人工鏡檢等形態(tài)學(xué)的金標(biāo)準(zhǔn)法比較，XE5000血細(xì)胞分析儀檢測(cè)瘧疾患者血常規(guī)白細(xì)胞數(shù)據(jù)是準(zhǔn)確、可靠的，驗(yàn)證了XE5000 全自動(dòng)血液分析儀對(duì)白細(xì)胞分類采用獨(dú)特的半導(dǎo)體激光器的流式細(xì)胞術(shù)計(jì)數(shù)原理，在瘧疾患者中白細(xì)胞分類結(jié)果同樣可作為常規(guī)血液檢查的篩選手段[13]。

CellaVisionDM96系統(tǒng)作為一種全自動(dòng)血細(xì)胞形態(tài)鑒定儀器，經(jīng)人工校正后外周血中常見的五分類細(xì)胞與傳統(tǒng)人工鏡檢法及Sysmex-XE5000血細(xì)胞分析儀器法結(jié)果具有很好的相關(guān)性，均能給臨床實(shí)驗(yàn)室提供準(zhǔn)確、可靠的白細(xì)胞分類數(shù)據(jù)，由此可見血涂片檢查自動(dòng)化的實(shí)現(xiàn)適合臨床實(shí)驗(yàn)室的推廣[14]。

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Difference of peripheral blood leucocyte percentages in malaria patients among Sysmex-XE5000,CellaVisionDM96 and manual microscope classification*

HOU Zhiping1,ZHANG Qiuping2,YE Feidi1,ZHANG Zhongming1,ZHANG Wenping1△

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,ShenzhenMunicipalThirdPeople′sHospital,Shenzhen,Guangdong518114,China;2.DeprtmentofGynecologyandObstetrics,LuohuDistrictMaternityandChildHealthCareHospital,Shenzhen,Guangdong518019,China)

ObjectiveTo compare the difference of peripheral blood leucocyte percentages in malaria patients among Sysmex-XE5000,CellaVisionDM96 and manual microscope classification,and to verify the accuracy and reliability of the Sysmex-XE5000 automatic blood corpuscle detection instrument for detecting the leukocyte classification in blood routine.MethodsThe leucocyte percentages data in 82 cases of malaria detected by using the Sysmex-XE5000 in the Shenzhen Municipal Third People′s Hospital from January 2011 to December 2015 were retrospectively collected;the peripheral blood smear in 82 cases of malaria obtained the percentages after the classification by the CellaVisionDM96;then the peripheral blood smear was performed the leucocyte classification by the manual microscopy for calculating the percentage.ResultsIn the pairwise comparison of percentage obtained from the peripheral blood leucocyte classification by Sysmex-XE5000,CellaVisionDM96 and manual microscopy,only the monocytes percentage had statistical difference between CellaVisionDM96 and manual microscopy (P<0.05),the other differences had no statistical significance (P>0.05).ConclusionBy comparing the peripheral blood leucocyte percentages data in malaria patients by Sysmex-XE5000,CellaVisionDM96 and manual microscopic classification,it is indicated that the leukocyte classification data by Sysmex-XE5000 are accurate and reliable,malaria parasite does not affect peripheral blood leukocyte classification,but it is necessary to pay more attention to monocytes classification in CellaVision DM96 classification.

malaria;peripheral blood smear;blood cell morphology;white blood cell classification;percentage

2016-02-05修回日期：2016-05-03)

廣東省深圳市知識(shí)創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目(JCYJ20150402111430615)。

侯志平，女，主管技師，主要從事臨檢及細(xì)胞形態(tài)工作。△

，E-mail:420333522@qq.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.15.012

A

1673-4130(2016)15-2081-03