免疫比濁法檢測(cè)血清游離輕鏈的方法學(xué)評(píng)價(jià)*

陳建平，楊曙梅，丁　燁，王惠民，鞠少卿，叢　輝△

(1.南通大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇南通 226001；2.南通大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系，江蘇南通 226019)

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·論著·

免疫比濁法檢測(cè)血清游離輕鏈的方法學(xué)評(píng)價(jià)*

陳建平1，楊曙梅1，丁燁2，王惠民1，鞠少卿1，叢輝1△

(1.南通大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇南通 226001；2.南通大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系，江蘇南通 226019)

目的對(duì)Beckman Immage 800全自動(dòng)特種蛋白分析儀檢測(cè)血清游離κ、λ輕鏈(sFLC)進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)。方法通過(guò)Beckman Immage 800定量測(cè)定sFLC，探討其精密度、正確度、分析測(cè)量范圍、干擾和攜帶污染率，同時(shí)對(duì)其參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果κFLC低、高值批內(nèi)精密度的變異系數(shù)(CV)分別為7.84%、2.95%，批間精密度的CV分別為7.38%、5.57%；λFLC低、高值批內(nèi)精密度(CV)分別為4.59%、3.94%，批間精密度CV分別為3.97%、2.01%；測(cè)定κFLC、λFLC定值質(zhì)控血清與靶值的偏倚小于5%；κFLC、λFLC分析測(cè)量范圍分別為10.8～128.0 mg/L、10.1～121.0 mg/L時(shí)，a值在0.95～1.05，r2≥0.98；κFLC、λFLC攜帶污染率分別為0.411%、0.216%；干擾試驗(yàn)結(jié)果顯示游離膽紅素≤342.0 μmol/L、結(jié)合膽紅素≤342.0 μmol/L、血紅蛋白≤5 g/L和乳糜≤2 400濁度時(shí)，對(duì)sFLC結(jié)果無(wú)明顯影響；40例健康體檢者中有1例κFLC測(cè)定結(jié)果超出廠(chǎng)家推薦的參考區(qū)間，40例λFLC檢測(cè)值均在廠(chǎng)家推薦的參考區(qū)間內(nèi)。結(jié)論Beckman Immage 800全自動(dòng)特種蛋白分析儀檢測(cè)sFLC的主要分析性能符合質(zhì)量目標(biāo)的要求，能夠?yàn)榕R床提供科學(xué)、準(zhǔn)確的診療依據(jù)。

全自動(dòng)特種蛋白分析儀；方法學(xué)評(píng)價(jià)；血清游離輕鏈

血清游離輕鏈(sFLC)包含游離κ、λ輕鏈，是判斷患者體內(nèi)是否存在克隆性漿細(xì)胞的高度敏感指標(biāo)。定量檢測(cè)sFLC以及計(jì)算游離κ/λ的比值有助于多發(fā)性骨髓瘤(MM)、原發(fā)性淀粉樣變(AL)、未定性單克隆丙種球蛋白病(MGUS)等疾病的診斷、療效判斷及預(yù)后評(píng)估[1]。血清κ、λ輕鏈和免疫固定電泳在一定程度上有助于MM的診斷，但均有一定的方法學(xué)局限性，如血清輕鏈測(cè)定的是血清中總輕鏈量，敏感性差；免疫固定電泳的敏感度也僅有150～500 mg/L，從而易致患者的漏診。2006年，國(guó)際骨髓瘤協(xié)作組(IMWG)將患者sFLC水平引入MM的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)中，作為完全緩解(sCR)的療效分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，確立了sFLC定量檢測(cè)在臨床應(yīng)用中的地位和價(jià)值[2]。近年來(lái)，sFLC的檢測(cè)得到了國(guó)內(nèi)越來(lái)越多臨床醫(yī)生的重視和患者的高度關(guān)注[3]。目前，我國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室測(cè)定sFLC主要采用免疫比濁法，關(guān)于Beckman Immage 800全自動(dòng)特種蛋白儀測(cè)定sFLC方法學(xué)評(píng)價(jià)的文獻(xiàn)較少見(jiàn)。本次試驗(yàn)參考美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)的相關(guān)文件及文獻(xiàn)，探討了Beckman Immage 800散射比濁法檢測(cè)sFLC的方法學(xué)評(píng)價(jià)。

1　材料與方法

1.1一般資料選取2015年1～10月南通大學(xué)附屬醫(yī)院門(mén)診和病房多發(fā)性骨髓瘤確診患者40例及體檢中心健康體檢者血清40例。靜脈抽血5 mL，4 000 r/min離心10 min，分離血清備用。

1.2儀器與試劑美國(guó)Beckman Coulter Immage 800全自動(dòng)特種蛋白分析儀；英國(guó)Binding Site公司FreeliteTM血清游離輕鏈檢測(cè)試劑盒(κFLC批號(hào)344785G，λFLC批號(hào)349269A)；FreeliteTMsFLC配套校準(zhǔn)品(κFLC批號(hào)344965，λFLC批號(hào)347207)；FreeliteTMsFLC配套質(zhì)控品(κFLC批號(hào)351843，λFLC批號(hào)347208)；日本Sysmex A-Plus干擾試劑盒(批號(hào)ZS1001)。

1.3方法

1.3.1建立sFLC比濁法測(cè)定法根據(jù)FreeliteTMsFLC說(shuō)明書(shū)設(shè)置儀器參數(shù)：標(biāo)本量5 μL，Buffer 195 μL，稀釋倍數(shù)1∶10。6點(diǎn)校準(zhǔn)，每個(gè)濃度校準(zhǔn)品重復(fù)測(cè)定兩次。

1.3.3正確度評(píng)價(jià)參照NCCLS EP15-A[5]，按照檢測(cè)定值的參考物質(zhì)計(jì)算偏差進(jìn)行驗(yàn)證：測(cè)定高、低兩個(gè)水平質(zhì)控品，每天測(cè)定2次，連續(xù)測(cè)定5 d，計(jì)算10次檢測(cè)結(jié)果均值，將各自檢測(cè)結(jié)果與靶值進(jìn)行對(duì)比，計(jì)算檢測(cè)值與靶值的相對(duì)偏倚(%)，計(jì)算公式：偏倚=(測(cè)定值-靶值)/靶值×100%。

1.3.4分析測(cè)量范圍評(píng)價(jià)參照NCCLS EP6-A[6]文件，分別選擇sFLC含量接近廠(chǎng)家線(xiàn)性范圍上限的新鮮血清標(biāo)本1份作為高值濃度水平(H：κFLC 128.0 mg/L，λFLC 121.0 mg/L)，sFLC含量低的健康體檢者血清作為低值濃度水平(L:κFLC 10.8 mg/L，λFLC 10.1 mg/L)1份，按照5H、4H+L、3H+2L、2H+3L、H+4L、5L的關(guān)系分別配制6個(gè)濃度梯度，對(duì)各濃度水平進(jìn)行sFLC測(cè)定，各濃度重復(fù)測(cè)定4次，對(duì)測(cè)定結(jié)果的均值和理論值進(jìn)行線(xiàn)性回歸統(tǒng)計(jì)，計(jì)算回歸方程：Y=aX+b，進(jìn)行分析測(cè)量范圍評(píng)價(jià)。a值應(yīng)在1±0.05范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)(r2)≥0.950。

1.3.5攜帶污染率評(píng)價(jià)參考文獻(xiàn)[7]，分別選取高水平FLCs新鮮血清標(biāo)本連續(xù)測(cè)定3次，測(cè)定值分別為H1、H2、H3；再分別選取低水平sFLC新鮮血清標(biāo)本連續(xù)測(cè)定3次，測(cè)定值分別為L(zhǎng)1、L2、L3，計(jì)算攜帶污染率。攜帶污染率=(L1-L3)/(H3-L3)×100%。攜帶污染率應(yīng)≤2.0%。

1.3.7參考區(qū)間驗(yàn)證參照NCCLS C28-A2[9]文件選取2015年8月南通大學(xué)附屬醫(yī)院體檢中心健康體檢者40例。健康參考個(gè)體選擇標(biāo)準(zhǔn)：(1)男、女各20例，年齡20～60歲，無(wú)吸煙、飲酒，自覺(jué)健康者；(2)無(wú)急慢性感染、呼吸系統(tǒng)疾病、過(guò)敏性疾病、肝膽管疾病、血液性疾病、腎臟疾病、風(fēng)濕性疾病、血管病和高血壓；(3)近期未手術(shù)、輸血、大量失血和服用藥物；(4)無(wú)慢性理化損傷或接觸化學(xué)損傷。測(cè)定sFLC，將檢測(cè)結(jié)果與參考區(qū)間比較(廠(chǎng)家參考區(qū)間：κFLC 3.30～19.40 mg/L；λFLC 5.71～26.30 mg/L)。檢測(cè)結(jié)果若超出參考區(qū)間的數(shù)據(jù)不超過(guò)10%，則通過(guò)驗(yàn)證，以判定廠(chǎng)家提供的生物參考區(qū)間有效。

表1　4種干擾物各管濃度表

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用Microsoft Excel 2003軟件對(duì)精密度試驗(yàn)、特異性試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)及Origin75統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)分析測(cè)量范圍數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析。

2　結(jié)　果

2.1sFLC精密度評(píng)價(jià)結(jié)果分別用低、高兩個(gè)濃度血清做批內(nèi)和批間精密度評(píng)價(jià)，κFLC低、高濃度血清批內(nèi)CV分別為7.84%、2.95%，批間CV分別為7.38%、5.58%；λFLC低、高濃度血清批內(nèi)CV分別為4.59%、3.94%，批間CV分別為4.00%、2.01%，見(jiàn)表2。

表2　sFLC批內(nèi)精密度

2.2sFLC正確度評(píng)價(jià)結(jié)果κ、λFLC正確度驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)表3，κFLC相對(duì)偏倚分別為3.01%、-3.81%，λFLC相對(duì)偏倚分別為2.28%、-4.58%，結(jié)果均低于廠(chǎng)家說(shuō)明書(shū)的偏倚值，正確度滿(mǎn)足要求。見(jiàn)表3。

表3　sFLC準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)試驗(yàn)

2.3sFLC分析測(cè)量范圍評(píng)價(jià)結(jié)果分別測(cè)量sFLC 6個(gè)濃度混合血清，計(jì)算均值，將測(cè)定均值與理論預(yù)期值比較，偏倚均小于10%；同時(shí)將測(cè)定均值與理論值進(jìn)行線(xiàn)性回歸分析，本系統(tǒng)κFLC測(cè)定范圍在10.8～128.0 mg/L，λFLC測(cè)定在10.1～121.0 mg/L呈線(xiàn)性。κFLC回歸方程及相關(guān)系數(shù)的平方為：Y=1.0441X-4.0789，r2=0.986；λFLC回歸方程及相關(guān)系數(shù)的平方為：Y=0.9887X+1.2471，r2=0.999，滿(mǎn)足判斷要求，散點(diǎn)圖見(jiàn)圖1、2。

圖1　κFLC線(xiàn)性回歸分析

圖2　λFLC線(xiàn)性回歸分析

2.4sFLC攜帶污染率評(píng)價(jià)κFLC的H1、H2、H3分別為117.0、118.0、119.0 mg/L；L1、L2、L3分別為9.52、8.76、9.07 mg/L，計(jì)算攜帶污染率為0.411%。λFLC的H1、H2、H3分別為119.0、118.0、114.0 mg/L；L1、L2、L3分別為21.9、22.6、21.7 mg/L，計(jì)算攜帶污染率為0.216%。FLCs攜帶污染率均小于2%。

2.5sFLC特異性評(píng)價(jià)BU≤342.0 μmol/L、BC≤342.0 μmol/L、Hb≤5 g/L、乳糜物≤2 400濁度時(shí)，對(duì)κ和λFLC的測(cè)定基本無(wú)影響，干擾值均在空白組1.96s范圍內(nèi)。

2.6sFLC參考區(qū)間驗(yàn)證40例健康體檢者κFLC測(cè)定結(jié)果有1例觀(guān)察值為3.18 mg/L，在廠(chǎng)商提供的參考區(qū)間3.30～19.40 mg/L外；λFLC測(cè)定結(jié)果介于5.71～26.30 mg/L。在參考區(qū)間外的數(shù)據(jù)未超過(guò)10%，表明廠(chǎng)家提供的95%參考區(qū)間可以接受。

3　討　論

Immage 800全自動(dòng)特種蛋白分析儀方法學(xué)原理為免疫比濁法，有著較高的靈敏度和特異性。為了保證臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)質(zhì)量，根據(jù)國(guó)家醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可(ISO15189)和美國(guó)病理學(xué)家協(xié)會(huì)(CAP)對(duì)臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理的要求[10]和臨床實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的要求[11]，臨床實(shí)驗(yàn)室在新的檢驗(yàn)方法用于檢測(cè)常規(guī)患者標(biāo)本、儀器重要維修或試劑更換生產(chǎn)廠(chǎng)家前必須對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)的分析性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，確認(rèn)檢測(cè)系統(tǒng)的分析性能符合臨床要求方可使用[12]。為了證實(shí)Immage 800全自動(dòng)特種蛋白分析儀檢測(cè)sFLC分析性能的可靠性，本次試驗(yàn)參考CLSI EP文件資料對(duì)Immage 800檢測(cè)sFLC進(jìn)行初步的分析性能評(píng)價(jià)，評(píng)價(jià)了本法的精密度、分析測(cè)量范圍、攜帶污染率、特異性，同時(shí)還對(duì)sFLC參考區(qū)間進(jìn)行了驗(yàn)證。

臨床標(biāo)本結(jié)果與真值間的偏離主要有不精密度、正確度、干擾。精密度是多次重復(fù)測(cè)量同一量時(shí)各測(cè)量值之間彼此符合的程度，表示測(cè)量過(guò)程中隨機(jī)誤差的大小。其是檢測(cè)系統(tǒng)主要的分析性能之一，是進(jìn)行其他性能評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)[13]。臨床檢測(cè)系統(tǒng)精密度的評(píng)價(jià)通常參考NCCLS EP5-A2文件評(píng)價(jià)方案，該方案是目前最具有統(tǒng)計(jì)效能的一種精密度評(píng)價(jià)方法。本次試驗(yàn)結(jié)果顯示，κFLC低、高兩個(gè)水平批內(nèi)不精密度分別是7.84%和2.95%；批間不精密度分別是7.38%和5.58%。λFLC低、高兩個(gè)水平批內(nèi)不精密度分別是4.59%和3.94%；批間不精密度分別是4.00%和2.01%。結(jié)果表明本法檢測(cè)sFLC精密度性能高，達(dá)到CLIA′88允許誤差的1/3水平(允許不精密度<8.33%)。

在NCCLS EP9-A文件中，正確度驗(yàn)證方法是使用臨床患者標(biāo)本進(jìn)行方法學(xué)比較和偏倚估計(jì)，這種方法需要對(duì)照，對(duì)于實(shí)驗(yàn)室新開(kāi)展的檢測(cè)項(xiàng)目來(lái)說(shuō)存在一定的困難。因此，本次試驗(yàn)在進(jìn)行sFLC正確度評(píng)價(jià)時(shí)，參照了NCCLS EP15-A文件的評(píng)價(jià)方案，采取使用有定值的參考物質(zhì)來(lái)計(jì)算偏倚的方法來(lái)進(jìn)行檢測(cè)系統(tǒng)的正確度評(píng)價(jià)。試驗(yàn)結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)κ、λFLC檢測(cè)均值與質(zhì)控的相對(duì)偏倚均小于5.0%，偏倚水平低于廠(chǎng)家說(shuō)明書(shū)的偏倚允許范圍，符合要求，說(shuō)明本檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)sFLC濃度檢測(cè)的正確度高。

分析測(cè)量范圍即定量檢測(cè)項(xiàng)目的線(xiàn)性范圍，是分析方法的一個(gè)重要技術(shù)指標(biāo)，是判斷檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)得的濃度與實(shí)際濃度是否呈線(xiàn)性的性能。分析測(cè)量范圍評(píng)價(jià)反映了整個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)的輸出特性，有助于了解檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。NCCLS EP6-A文件要求對(duì)分析測(cè)量范圍評(píng)價(jià)時(shí)需要5～7個(gè)濃度，每個(gè)濃度至少測(cè)定2次。在本次試驗(yàn)中選擇了6個(gè)濃度標(biāo)本，每個(gè)標(biāo)本檢測(cè)4次，對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行分析測(cè)量范圍驗(yàn)證。結(jié)果表明κFLC和λFLC均表現(xiàn)出較好的線(xiàn)性，a值和r2均滿(mǎn)足要求，符合臨床檢驗(yàn)的要求。廠(chǎng)家說(shuō)明書(shū)給予的κFLC線(xiàn)性范圍是6.0～180.0 mg/L、λFLC線(xiàn)性范圍是4.8～162.0 mg/L，本次試驗(yàn)中由于κFLC和λFLC的高值標(biāo)本一時(shí)無(wú)法獲得，因此κFLC和λFLC高值標(biāo)本稍低于最高檢測(cè)值，還需要后期補(bǔ)充驗(yàn)證。

攜帶污染是連續(xù)測(cè)量不同濃度標(biāo)本間的相互影響，主要是高濃度標(biāo)本對(duì)后續(xù)檢測(cè)標(biāo)本的影響。影響標(biāo)本攜帶污染率的因素主要是清洗劑的清洗能力、清洗劑用量、清洗次數(shù)、清洗溫度等。攜帶污染率是檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確的必要條件，是評(píng)價(jià)檢測(cè)系統(tǒng)的關(guān)鍵指標(biāo)，攜帶污染率越低表明檢測(cè)結(jié)果越準(zhǔn)確。試驗(yàn)結(jié)果顯示κFLC、λFLC攜帶污染率分別是0.411%、0.216%，均小于判斷要求，表明檢測(cè)系統(tǒng)攜帶污染率低，能夠適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)臨床標(biāo)本的檢測(cè)要求。

在EP7-A2文件中提供了兩種實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行干擾試驗(yàn)評(píng)價(jià)：(1)干擾篩選；(2)利用患者標(biāo)本作偏倚分析。由于第2種評(píng)價(jià)方法需要高特異性的比較方法，本實(shí)驗(yàn)室難以滿(mǎn)足其要求。因此，本次試驗(yàn)采用第1種方案，即將潛在干擾物添加到標(biāo)本中來(lái)評(píng)價(jià)干擾性。將血紅蛋白、三酰甘油、膽紅素3種常見(jiàn)的物質(zhì)作為干擾源對(duì)sFLC檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行特異性分析。試驗(yàn)結(jié)果表明膽紅素、血紅蛋白、三酰甘油對(duì)κFLC及λFLC的測(cè)定影響較小，表明該檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)sFLC的抗黃疸、溶血、脂血的能力較強(qiáng)。臨床標(biāo)本的質(zhì)量對(duì)免疫比濁法檢驗(yàn)的干擾需要臨床檢驗(yàn)者的重視，因此在臨床標(biāo)本sFLC檢測(cè)結(jié)果報(bào)告時(shí)最好將反映溶血、脂血及黃疸程度的指數(shù)一并報(bào)告臨床醫(yī)生，使檢驗(yàn)結(jié)果更嚴(yán)謹(jǐn)、可靠。

參考區(qū)間是臨床判斷健康與否的尺標(biāo)，

合適的參考區(qū)間對(duì)疾病的預(yù)防、診斷、療效評(píng)價(jià)及預(yù)后有著重要的意義[14]。本次試驗(yàn)中對(duì)廠(chǎng)家提供的sFLC參考區(qū)間進(jìn)行了驗(yàn)證。廠(chǎng)家提供的κFLC參考范圍是3.30～19.40 mg/L、λFLC參考范圍是5.71～26.30 mg/L。通過(guò)對(duì)40例健康體檢者進(jìn)行sFLC檢測(cè)分析，結(jié)果表明廠(chǎng)商提供的sFLC參考區(qū)間適用于本地區(qū)、本實(shí)驗(yàn)室使用。

本次研究結(jié)果表明，在Immage 800全自動(dòng)特種蛋白分析儀上測(cè)定sFLC的方法精密度高，正確度高，線(xiàn)性良好，攜帶污染率低，抗干擾能力強(qiáng)。

綜上所述，Immage 800檢測(cè)sFLC的主要分析性能符合臨床質(zhì)量管理目標(biāo)的要求，是一種簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確、可靠的臨床檢測(cè)方法，能夠?yàn)榕R床醫(yī)生在疾病的診療過(guò)程中提供可信的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

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Methodological evaluation on serum free light chains detected by immunoturbidimetry*

CHEN Jianping1,YANG Shumei1,DING Ye2,WANG Huimin1,JU Shaoqing1，CONG Hui1△

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedHospitalofNantongUniversity,Nantong,Jiangsu226001，China;2.DepartmentofLaboratoryMedicine，SchoolofPublicHealth，NantongUniversity,Nantong,Jiangsu226019，China)

ObjectiveTo perform the methodological evaluation on Beckman Immage 800 automatic special protein analyzer for determining serum freeκ,λ light chains (sFLC).MethodsThe Beckman Immage800 automatic special protein analyzer was used to quantitatively detect sFLC values for investigating its precision and accuracy,analyzing its detecting range,interference and residual contamination rate,meanwhile verifying its reference intervals.ResultsThe low and high values of within-run precision coefficients of variation(CV) for κsFLC were 7.84% and 2.95% respectively;which of between-run precisionCVwere 7.38% and 5.57% respectively.The within-run precisionCVfor λFLC were 4.59% and 3.94% respectively,which of between-run precisionCVwere 3.97% and 2.01% respectively;bias for detecting the κFLC and λFLC fixed quality serum and the target values was less than 5%,when the analytical detection ranges of κFLC and λFLC were 10.8-128.0 mg/L and 10.1-121.0 mg/L,a value was 0.95-1.05，r2≥0.98;the carry-over rates of κFLC and λFLC were 0.411% and 0.216% respectively.The interference test results showed that when free hemoglobin≤342.0 μmol/L,conjugated bilirubin ≤342.0 μmol/L,hemoglobin≤5 g/L and chyle ≤2 400 turbidness,which had no influence on sFLC results;among 40 healthy subjects undergoing the physical examination,1 case of κFLC detection results exceeded the reference interval recommended by the manufacturer,while the λFLC detection values in these 40 cases were all within the reference interval recommended by the manufacturer.ConclusionThe main analytical performance of the Beckman Immage800 automatic special protein analyzer for detecting sFLC meets the requirements of quality objectives and can provides the scientific and precise evidence of diagnosis and treatment for clinic.

full automatic special protein analyzer；methodology evaluation；serum free light chains

2016-01-25修回日期：2016-05-04)

江蘇省衛(wèi)生廳項(xiàng)目(H201526)；江蘇省“六大人才高峰”基金項(xiàng)目(WS-066)。

陳建平，女，主管檢驗(yàn)技師，從事臨床免疫檢驗(yàn)工作。△

，E-mail:huicjs@163.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.15.004

A

1673-4130(2016)15-2058-03