薄層掃描法測(cè)定補(bǔ)陽還五膠囊黃芪甲苷的含量*

劉世軍，趙海峰，唐志書，崔春利，劉紅波，梁艷妮陜西中醫(yī)藥大學(xué)陜西中藥資源產(chǎn)業(yè)化協(xié)同創(chuàng)新中心，陜西 咸陽 712083

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薄層掃描法測(cè)定補(bǔ)陽還五膠囊黃芪甲苷的含量*

劉世軍，趙海峰，唐志書，崔春利，劉紅波，梁艷妮
陜西中醫(yī)藥大學(xué)陜西中藥資源產(chǎn)業(yè)化協(xié)同創(chuàng)新中心，陜西 咸陽 712083

目的：建立薄層掃描法測(cè)定補(bǔ)陽還五膠囊黃芪甲苷含量的方法。方法：硅膠G薄層板，氯仿-甲醇-水（13∶6∶2）10℃以下放置過夜的下層溶液展開，λS=530 nm，λR=700 nm。結(jié)果：線性范圍為0.980～6.860 μg，平均回收率為99.49%，精密度RSD為0.846%。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便，靈敏度高，重復(fù)性好，回收率高，可用于補(bǔ)陽還五膠囊中黃芪甲苷的含量測(cè)定。

補(bǔ)陽還五膠囊；黃芪甲苷；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層掃描法

補(bǔ)陽還五湯出自王清任《醫(yī)林改錯(cuò)》，本方有補(bǔ)氣、活血、祛瘀通絡(luò)之功效，生用黃芪大劑量則力專而行走，周行全身，大補(bǔ)元?dú)舛痧魪U；配當(dāng)歸尾、赤芍、川芎、紅花、桃仁、地龍6味，活血、祛瘀之藥不在于逐瘀，而在于活血通絡(luò)，所以，用大劑量黃芪為主藥的目的是補(bǔ)氣以行血通絡(luò)，此方治半身不遂，口眼歪斜，語言蹇澀，口角流涎，大便干燥，小便頻數(shù)，遺尿不禁［1］。王智華等［2］、張星等［3］分別對(duì)補(bǔ)陽還五沖劑、補(bǔ)陽還五湯質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，本研究通過對(duì)補(bǔ)陽還五湯臨床應(yīng)用的調(diào)研，自制補(bǔ)陽還五膠囊，采用薄層掃描法對(duì)補(bǔ)陽還五膠囊君藥黃芪中所含的活性成分黃芪甲苷進(jìn)行含量測(cè)定，規(guī)定其下限作為制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)，以保證臨床用藥的合理性、安全性及有效性，為有效控制補(bǔ)陽還五膠囊提供更加可靠的依據(jù)。

1 儀器與試藥

CS-9301型薄層掃描儀(日本島津)；黃芪甲苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所分發(fā)，批號(hào)：781-200210)；D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm)；水為純化水，其余試劑均為分析純；M erck公司生產(chǎn)的預(yù)制板(10×20cm)，展開劑：氯仿-甲醇-水(13∶6∶2)10℃以下放置過夜的下層溶液，飽和15分鐘展開。顯色劑：10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘5分鐘。雙波長(zhǎng)反射法鋸齒掃描：λS=530nm，λR=700nm。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 m L含0.5 m g的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2 供試品溶液制備 取本品適量，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉0.5g，加具塞三角燒瓶中，加入25 m L甲醇，提取液回收甲醇并濃縮至干，殘?jiān)铀?0m L，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，20 m L/次，合并正丁醇提取液，用氨試液提取2次，20 m L/次，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?～5 m L使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5 cm，長(zhǎng)12 cm)，以水50 m L洗脫，棄去水液，再用40%乙醇30 m L洗脫，棄去40%乙醇洗脫液，繼用70%乙醇50 m L洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至2 m L量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 m L含0.5 m g的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010版一部附錄ⅥB)［4］精密吸取供試品溶液2 μL、6 μL，對(duì)照品溶液2 μL、4 μL，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(13∶6∶2)10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010版一部附錄ⅥB薄層掃描法)進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)：λS=530 nm，λR=700 nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。

2.3 空白溶液制備 按處方比例分別稱取除黃芪以外的其余藥味，按照制備工藝制成缺黃芪的陰性樣品，按“2.2”項(xiàng)供試品溶液的制備方法，制成陰性樣品溶液。

2.4 專屬性實(shí)驗(yàn) 分別取供試品溶液及陰性供試品溶液，氯仿-甲醇-水(13∶6∶2)10℃以下放置過夜的下層溶液，飽和15分鐘展開，10%硫酸乙醇溶液顯色，105℃烘5分鐘，雙波長(zhǎng)反射法鋸齒掃描：λs=530 nm，λR=700 nm。按上述條件分析，陰性樣品在指標(biāo)成分黃芪甲苷的色譜峰位置上無吸收，表明該方法的專屬性良好。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍 分別精密吸取對(duì)照品溶液(C=0.49 m g/m L)2、4、6、8、10、12、14 μL，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積A為縱坐標(biāo)，黃芪甲苷含量C(μg)為橫坐標(biāo)計(jì)算回歸方程為：A=1111.84C+300.27，相關(guān)系數(shù)r=0.9999，線性范圍0.980～6.860μg，結(jié)果見表1、圖1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1 黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.6 精密度實(shí)驗(yàn)

2.6.1 同板精密度 精密吸取樣品(批號(hào)：061001)溶液5μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，并計(jì)算出RSD為1.25%，表明同板精密度良好。

2.6.2 異板精密度 精密吸取樣品(批號(hào)：061001)溶液5μL，異板點(diǎn)樣5次，記錄峰面積，并計(jì)算出RSD為1.60%，表明異板精密度良好。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 稱取本品 (批號(hào)：061001)5份，依供試品制備方法制取樣品，依法測(cè)定含量，并計(jì)算出RSD為2.14%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取樣品(批號(hào)：061001)0.5g，按供試品制備方法制備樣品，分別在0、0.5、1、1.5、2小時(shí)記錄峰面積并計(jì)算出RSD為1.04%。表明供試品在2小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 回收率實(shí)驗(yàn) 采取加樣回收法，取一定量已知含量的樣品(批號(hào)：061001)，加適量對(duì)照品依法制備供試品溶液，測(cè)定含量以下式計(jì)算回收率，結(jié)果表明本方法回收率良好，見表2。

表2 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.10 樣品測(cè)定 取本品3批，按供試品制備方法 制備樣品，依上述色譜條件測(cè)定，見表3。

表3 樣品測(cè)定結(jié)果

經(jīng)過質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定及3批樣品的測(cè)定結(jié)果，3批樣品以黃芪甲苷(C41H 68O 14)含量在1.493～1.532 m g/g范圍內(nèi)，考慮到藥材來源以及制劑生產(chǎn)，貯藏等其他因素影響，暫定本品每粒含黃芪以黃芪甲苷(C41H 68O 14)計(jì)，不得少于1.1m g。

3 討論

采用薄層掃描法測(cè)定自制補(bǔ)陽還五膠囊中黃芪甲苷，開展方法學(xué)研究，結(jié)果表明，該法操作簡(jiǎn)便、快速、重現(xiàn)性好，可有效控制補(bǔ)陽還五膠囊的質(zhì)量，也為含有黃芪的中成藥增加黃芪甲苷的測(cè)定提供了新思路。

［1］ 鄧中甲.方劑學(xué)［M］.北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2003：240.

［2］ 王智華，陸履雯，王海英，等.補(bǔ)陽還五湯沖劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中成藥，1996，18（7）：12-14.

［3］ 張星，陸兔林，毛春芹，等.補(bǔ)陽還五湯質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中成藥，2013，35（3）：529-533.

［4］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄34.

Determination of AstragalosideⅣin BuYang HuanWu Capsules by TLC

LIU Shijun，ZHAO Haifeng，TANG Zhishu，CUI Chunli，LIU Hongbo，LIANG Yanni
Shaanxi Collaborative Innovation Center of Chinese Medicinal Resource Industrialization of Shaanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712083，China

Objective：To establish the determination method of astragalosideⅣin BuYang HuanWu capsules by thin layer scanning（TLC）.Methods：Silica gel G TLC-scanner，loroform-methanol-water（13：6：2），placed below 10℃and stayed overnight，the lower solution was taken out and spread，λS=530 nm，λR=700 nm.Results：Linearity range was between 0.980 and 6.860 μg，average recovery rate was 99.49%，precision RSD was 0.846%.Conclusion：The method，simple，sensible，reproducible and with high recovery rate，could be used to content determination of astragalosideⅣin BuYang HuanWu capsules.

BuYang HuanWu capsules；astragalosideⅣ；quality standard；thin layer scanning

劉世軍（1974—），男，博士學(xué)位，高級(jí)工程師。研究方向：天然產(chǎn)物研究及中藥制劑與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

R917

A

1004-6852（2016）01-0030-03

2014-11-20

陜西省重點(diǎn)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)計(jì)劃（編號(hào)2012K CT-20）。