玉屏風(fēng)散對(duì)變應(yīng)性鼻炎模型大鼠血清IgE、IL-4 和IFN-r含量的影響

王芳胡曉艷

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·實(shí)驗(yàn)研究·

玉屏風(fēng)散對(duì)變應(yīng)性鼻炎模型大鼠血清IgE、IL-4 和IFN-r含量的影響

王芳1胡曉艷2

目的 觀察玉屏風(fēng)散（YPFS）對(duì)變應(yīng)性鼻炎（AR）大鼠的鼻腔分泌物中嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）、血清中IgE、IL-4和IFN-r含量的影響。方法 建立AR大鼠模型，將40只大鼠分為正常組，模型組，陽(yáng)性藥對(duì)照組及YPFS組，記錄每個(gè)實(shí)驗(yàn)組大鼠的行為表現(xiàn)，測(cè)定大鼠鼻腔分泌物中的EOS及血清中IgE、IL-4和IFN-r的含量。結(jié)果 模型組IgE、IL-4的含量明顯升高，比正常對(duì)照組高（P＜0.05），IFN-r的含量較正常對(duì)照組降低（P＜0.05）。YPFS組大鼠鼻部癥狀明顯減輕，血清IgE、IL-4的含量較模型組顯著下降（P＜0.05），IFN-r的含量較模型組升高（P＜0.05）。YPFS組各項(xiàng)指標(biāo)與陽(yáng)性藥對(duì)照組比較，差異之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 YPFS能緩解AR大鼠的局部癥狀，通過(guò)調(diào)節(jié)宿主免疫功能，糾正Th1/Th2淋巴細(xì)胞亞群的失衡，從而產(chǎn)生抗過(guò)敏作用。

玉屏風(fēng)散；變應(yīng)性性鼻炎；免疫功能

1核工業(yè)416醫(yī)院耳鼻咽喉科（成都，610051）

2四川瀘州醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室

變應(yīng)性鼻炎是由IgE介導(dǎo)的鼻腔黏膜變態(tài)反應(yīng)性疾病，是耳鼻咽喉科頭頸外科臨床上常見的疾病，發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜，較多數(shù)學(xué)者認(rèn)為其Th1和Th2細(xì)胞之間的免疫失衡及其產(chǎn)生的多種細(xì)胞因子對(duì)IgE的調(diào)節(jié)是發(fā)病的免疫學(xué)基礎(chǔ)。有研究發(fā)現(xiàn)Th1 和Th2之間通過(guò)分泌細(xì)胞因子保持著動(dòng)態(tài)平衡，而IL-4和IFN-γ的表達(dá)異常提示Th細(xì)胞的分化偏移，導(dǎo)致了變應(yīng)性鼻炎的發(fā)生發(fā)展［1］。玉屏風(fēng)散由黃芪、白術(shù)、防風(fēng)3味中藥組成，是我國(guó)中醫(yī)扶正固表的傳統(tǒng)名方，源于元代朱震亨的《丹溪心法》。在臨床上常用于預(yù)防和治療呼吸道感染、風(fēng)寒感冒以及支氣管哮喘、變應(yīng)性鼻炎等變應(yīng)性疾?。?-4］。但玉屏風(fēng)散治療變應(yīng)性鼻炎的作用方式及機(jī)制尚不明確，我們通過(guò)試驗(yàn)測(cè)定了玉屏風(fēng)散對(duì)變應(yīng)性鼻炎大鼠鼻部表現(xiàn)、EOS及細(xì)胞因子的影響，探索玉屏風(fēng)散在變應(yīng)性鼻炎大鼠中的可能的免疫調(diào)節(jié)方式和作用，為患者中醫(yī)臨床治療提供試驗(yàn)依據(jù)。

材料與方法

1材料

1.1實(shí)驗(yàn)藥物

玉屏風(fēng)散藥液（黃芪、白術(shù)、防風(fēng)藥材飲片均購(gòu)自成都杏林大藥房，批號(hào)20060902），依據(jù)《中國(guó)藥典》（2010版）第一部玉屏風(fēng)散項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)配伍及制備工藝制備，生藥含量2g/ml；氯雷他定（國(guó)藥準(zhǔn)字: H20070030，由西安楊森藥業(yè)生產(chǎn)；規(guī)格:10mg/片）。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Sprague-Dawley（SD）大鼠40只由瀘州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)SCXK（川）2014-028，SPF級(jí)，均為3月齡雌性，體重為160～200g，標(biāo)準(zhǔn)條件下適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。

1.3藥物及試劑

卵白蛋白（美國(guó)Sigma公司，1001445093）；氫氧化鋁［Al（OH）3］（上海桃浦化學(xué)試劑公司，070621）；IgE試劑盒（美國(guó)BioLegend公司，AE9401Ra）；IL-4和IFN-γ試劑盒（美國(guó)R&D公司進(jìn)口分裝），購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司（EK0405、EK0374）。

2方法

2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

SD大鼠40只隨機(jī)分為正常組、模型組、陽(yáng)性藥對(duì)照組和YPFS組4組，每組10只。

2.2建立模型

建立模型組、陽(yáng)性藥對(duì)照組和YPFS組卵白蛋白（Ovalbumin，OVA）致敏模型［5］：第1天腹腔注射含10μg OVA及1mg［A1（OH）3］的無(wú)菌生理鹽水0.5ml進(jìn)行基礎(chǔ)致敏，第5天腹腔注射含l0μg OVA的無(wú)菌生理鹽水0.5ml強(qiáng)化致敏，第6天開始每日1次用50μl的2mg/ml OVA滴鼻，連續(xù)14天激發(fā)大鼠，觀察其噴嚏、撓鼻的次數(shù)和流涕，參照文獻(xiàn)［7］制定表1，評(píng)分大于5分造模為成功，30只大鼠均造模成功。正常組則用無(wú)菌生理鹽水按照同樣過(guò)程進(jìn)行假致敏和假激發(fā)。

表1　大鼠變應(yīng)性反應(yīng)鼻部癥狀的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

2.3給藥

YPFS組給予玉屏風(fēng)散藥液12g/kg［6］；陽(yáng)性藥對(duì)照組氯雷他定5mg/kg，用無(wú)菌生理鹽水稀釋，灌胃給藥；正常對(duì)照組使用同等劑量的無(wú)菌生理鹽水灌胃。給藥期間仍給予持續(xù)局部抗原攻擊，各組于滴鼻前1小時(shí)給藥，每天1次，共7次。

2.4動(dòng)物行為學(xué)觀察

觀察各組大鼠鼻癢、鼻涕和噴嚏的過(guò)敏反應(yīng)行為，記錄各組大鼠最后1次激發(fā)的24小時(shí)后評(píng)分。

2.5計(jì)數(shù)嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）

鼻分泌物涂片檢查。各組大鼠最后1次激發(fā)的24小時(shí)后微型小棉棒伸入大鼠鼻腔輕擦鼻甲表面3次，制作涂片，HE染色，光鏡下（×100）觀察并行EOS計(jì)數(shù)。每張切片觀察5個(gè)視野，取平均值。

2.6細(xì)胞免疫因子的檢測(cè)

各組大鼠最后1次激發(fā)的24小時(shí)后，用3%戊巴比妥鈉（40mg/kg）腹腔注射麻醉大鼠由腹主動(dòng)脈內(nèi)抽血8ml，通過(guò)離心分離出血清，采用ELISA法檢測(cè)各試驗(yàn)組大鼠血清IgE、IL-4和IFN-γ的含量。

3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0軟件包進(jìn)行分析，用ANOVA和Ridit分析，數(shù)據(jù)以（xˉ±s）表示，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1觀察模型組行為

各組大鼠鼻癢、鼻涕和噴嚏的過(guò)敏反應(yīng)行為評(píng)分比較（見表2）結(jié)果表明，模型組與正常組、陽(yáng)性藥對(duì)照組、YPFS組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；YPFS組與陽(yáng)性藥對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。提示YPFS組大鼠鼻部過(guò)敏癥狀明顯緩解，與陽(yáng)性藥對(duì)照組比較統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)差別。

表2　大鼠變應(yīng)性反應(yīng)鼻部癥狀的評(píng)分（xˉ±s）

2各組大鼠鼻腔分泌物EOS計(jì)數(shù)、血清IgE、IL-4 和IFN-γ的含量比較（見表3、圖1、圖2和圖3），模型組大鼠鼻腔分泌物EOS計(jì)數(shù)高于正常組；血清IgE和IL-4的含量升高，高于正常組；血清IFN-γ的含量降低，低于正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。YPFS組和陽(yáng)性藥對(duì)照組鼻腔分泌物EOS計(jì)數(shù)低于模型組，血清IgE和IL-4的含量降低，低于模型組；血清IFN-γ含量升高，高于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。YPFS組與陽(yáng)性藥對(duì)照組鼻腔分泌物EOS計(jì)數(shù)、血清IgE、IL-4和IFN-γ的含量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表3　大鼠鼻腔分泌物EOS計(jì)數(shù)、血清Ig　E、IL-12和IFN-γ和含量比較（xˉ±s）

圖1　模型組鼻腔分泌物HE染色×20

圖2　YPFS組鼻腔分泌物HE染色×20

圖3　陽(yáng)性藥對(duì)照組鼻腔分泌物HE染色×20

討論

從免疫學(xué)角度來(lái)看，AR是體外環(huán)境因素作用于機(jī)體導(dǎo)致的異常免疫反應(yīng)，造成Thl和Th2免疫反應(yīng)失衡而引發(fā)的、以鼻腔黏膜Th2免疫反應(yīng)為主的變應(yīng)性炎癥反應(yīng)，其主要的免疫病理學(xué)特征是組織中大量表達(dá)Th2細(xì)胞因子的細(xì)胞浸潤(rùn)［8］。研究證據(jù)表明，通過(guò)誘導(dǎo)Thl型細(xì)胞的反應(yīng)來(lái)調(diào)節(jié)Th2型細(xì)胞的細(xì)胞因子分泌譜可以改善與Th2相關(guān)的疾?。?］。Thl細(xì)胞的功能主要依賴IFN-γ實(shí)現(xiàn)，而Th2細(xì)胞功能主要依賴IL-4等。IL-4及其他Th2細(xì)胞因子，輔助招募可產(chǎn)生IgE抗體并能誘導(dǎo)過(guò)敏發(fā)生的B細(xì)胞、肥大細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）等［10］。IgE抗體與嗜堿性粒細(xì)胞及肥大細(xì)胞相結(jié)合后能夠激活被IgE致敏的細(xì)胞，分泌多種炎癥介質(zhì)引起相應(yīng)的臨床癥狀。本實(shí)驗(yàn)中模型組大鼠鼻腔分泌物EOS計(jì)數(shù)、血清IgE和IL-4含量明顯高于正常組，IFN-γ含量低于正常組。提示Th1/Th2淋巴細(xì)胞亞群平衡及自身調(diào)節(jié)對(duì)變應(yīng)性鼻炎的發(fā)生發(fā)展可能有著極其重要的作用。

玉屏風(fēng)散由黃芪、白術(shù)和防風(fēng)三味藥組成，具有益氣健脾、固表止汗的功效，用于治療氣虛基表不固兼感風(fēng)寒之自汗癥。因?yàn)樵摲蒋熜Ш?，使用較廣，被《中華人民共和國(guó)藥典》所收載。隨著研究的深入，其治療作用和藥理作用主要體現(xiàn)在對(duì)免疫功能的調(diào)節(jié)和影響。玉屏風(fēng)散可以增強(qiáng)患者的體質(zhì)，提高機(jī)體免疫功能，促進(jìn)IgA、IgG、IgE和單核巨噬細(xì)胞的分泌［11］。觀察玉屏風(fēng)散對(duì)荷瘤小鼠免疫功能的影響，發(fā)現(xiàn)玉屏風(fēng)散給藥后小鼠脾臟T細(xì)胞增殖能力明顯增強(qiáng)，IFN-γ、IL-2的產(chǎn)生明顯升高，血清IL-4、IL-10含量下降［12］；玉屏風(fēng)散對(duì)小鼠氣道變態(tài)反應(yīng)性疾病中可以增強(qiáng)Th1細(xì)胞表達(dá)，同時(shí)提高Th1/Th2比值［13］，提示玉屏風(fēng)散可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，促進(jìn)免疫應(yīng)答，改善機(jī)體情況。在本實(shí)驗(yàn)中，YPFS治療組大鼠鼻部癥狀明顯好于模型組，鼻腔分泌物EOS計(jì)數(shù)、血清IgE和IL-4含量明顯低于模型組，IFN-γ含量高于模型組，而與陽(yáng)性藥物對(duì)照組無(wú)明顯差別，提示玉屏風(fēng)散可以調(diào)節(jié)Th1/Th2淋巴細(xì)胞亞群平衡，誘導(dǎo)Th向Th1分化，抑制Th2的表達(dá)，促進(jìn)IFN-γ的產(chǎn)生，抑制IL-4的形成，并降低IgE的水平，從而減輕EOS的活化和浸潤(rùn)，以調(diào)節(jié)變應(yīng)性鼻炎大鼠的免疫功能，減輕變應(yīng)性鼻炎的炎癥反應(yīng)，達(dá)到治療目的。該方劑是種復(fù)雜的混合藥物，其藥理作用的影響還需結(jié)合分子生物學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)進(jìn)一步研究，為其適應(yīng)證提供充分的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

1胡曉艷，姜梁.乳酸桿菌對(duì)過(guò)敏性鼻炎模型大鼠免疫功能的影響［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2013，42（23）:2752-2754.

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（收稿:2015-01-12修回：2015-02-02）

Effects of Yu ping feng san on allergic rhinitis rat models of the influence of the levels of IgE，IL-4 and IFN-r

WANG Fang，HU Xiaoyan
Department of Otolaryngology，416th Hospital，Ministry of Nuclear Industry，Chengdu，610051，China

Objective Explore the influence in YPFS on allergic rhinitis（AR）rates of the serum IgE，IL-4 and IFN-r levels. Methods With ovalbumin as sensibilisinogen，the rats allergic rhinitis model was established.Rats were divived into normal group，model group，YPFS group and positive drug control group.We observed the ethological perfmance of rats，examend oxyphile leukocytes in nasal secretion and the contents of IgE、IL-4 and IFN-r in blood serum.Results YPFS could obviously relieve allergic rhinitis symptoms of rhinocnesmus，and sneezing，clear nasal discharge，reduce EOS infiltration and nasal mucosal thickening in rat allergia models（P＜0.05），model groupIgE、IL-4 content was significantly higher than normal control group（P＜0.05），IFN-r levels are lower than the normal control group（P＜0.05）.YPFS group IL-4 content was significantly lower than the model group （P＜0.05），IFN-r content increased higher than the model group（P＜0.05）.The index of lactobacillus group with positive drug compared difference was statistically significant.Conclusion YPFS can relieve the nasal symptoms in allergic rhinitis rats，adjust Th1/Th2 lymphocyte subsets balance，reduce nasal mucosa allergic inflammation.

YPFS；allergic rhinitis；immunologic function

胡曉艷，副教授.Email:huxiaoyan417@163.com

10.16542/j.cnki.issn.1007-4856.2016.02.001