丹參多酚酸鹽改善擴(kuò)張性心肌病心肌功能的作用機(jī)制

王曦?zé)? 單曉彤, 王伊林, 李　丹, 趙　明, 許　良

( 1. 內(nèi)蒙古民族大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院, 通遼 028042;2. 天然產(chǎn)物化學(xué)及功能分子合成自治區(qū)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 通遼 028042; 3. 內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院, 通遼 028042)

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丹參多酚酸鹽改善擴(kuò)張性心肌病心肌功能的作用機(jī)制

王曦?zé)?,2, 單曉彤3, 王伊林3, 李丹1,2, 趙明3, 許良1,2

( 1. 內(nèi)蒙古民族大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院, 通遼 028042;2. 天然產(chǎn)物化學(xué)及功能分子合成自治區(qū)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 通遼 028042; 3. 內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院, 通遼 028042)

摘要將代謝組學(xué)與分子生物學(xué)方法相結(jié)合, 研究了丹參多酚酸鹽治療擴(kuò)張性心肌病的作用機(jī)制. 采用主成分分析(PCA)法, 分析了健康組、 模型組及丹參多酚酸鹽給藥組大鼠血清代謝輪廓, 采用正交校正的偏最小二乘判別分析(OPLS-DA)法尋找潛在的生物標(biāo)記物, 共鑒定得到磷酯酰絲氨酸[16∶0/18∶1(9Z)]、 溶血磷脂(16∶0)、 溶血磷脂[20∶4(5Z,8Z,11Z,14Z)]、 溶血磷脂[22∶6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)]、 膽固醇硫酸酯、 膽汁酸、 γ-亞麻酸、 二十二碳五烯酸和9′-羧基-γ-生育酚9種潛在的生物標(biāo)記物. 其中, γ-亞麻酸、 二十二碳五烯酸和9′-羧基-γ-生育酚的含量在模型組中下降, 經(jīng)丹參多酚酸鹽治療后含量上升. 通過(guò)Western bloting法和酶聯(lián)免疫吸附法證實(shí)丹參多酚酸鹽通過(guò)影響體內(nèi)與γ-亞麻酸和9′-羧基-γ-生育酚相關(guān)的超氧化物岐化酶(SOD)、 丙二醛(MDA)及其下游Bcl-2和Bax蛋白分子表達(dá)量, 從而減少氧化應(yīng)激所致的心肌細(xì)胞凋亡數(shù)量, 達(dá)到治療阿霉素所致擴(kuò)張型心肌病的目的.

關(guān)鍵詞擴(kuò)張型心肌病; 丹參多酚酸鹽; 代謝組學(xué); 質(zhì)譜; 氧化應(yīng)激

阿霉素(ADR)屬蒽環(huán)類抗癌藥物, 其獨(dú)特的嗜心肌作用可引起心腔擴(kuò)大及室壁變薄等擴(kuò)張型心肌病樣改變[1], 發(fā)病機(jī)制并不完全明確, 目前沒(méi)有特效藥物能阻止阿霉素所致擴(kuò)張性心肌病的發(fā)生.

丹參是唇形科植物丹參(Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根和根莖, 在《本草綱目》中早有記載, 且評(píng)價(jià)頗高. 丹參具有“祛瘀止痛, 補(bǔ)血生血, 逐血生新”等功效. 藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn), 丹參具有改善血液循環(huán)、 降低心肌耗氧量及減少心律失常等藥理作用[2,3]. 丹參多酚酸鹽(Salvianolatemiltiorrhiza)是中藥丹參的有效提取物. 陳成等[4]研究發(fā)現(xiàn), 丹參多酚酸鹽可通過(guò)影響心肌肌球蛋白重鏈, 從而提高心衰大鼠心臟功能. 方凌燕等[5]報(bào)道了丹參多酚酸鹽可上調(diào)心肌組織中micRNA表達(dá)水平, 促進(jìn)心肌梗死大鼠的血管重生. 張殿福等[6]報(bào)道了丹參多酚酸鹽可通過(guò)抗炎和抗氧化等途徑治療心血管方面疾病. 迄今, 有關(guān)丹參多酚酸鹽的藥理作用研究多是基于分子生物學(xué)、 細(xì)胞生物學(xué)及藥代動(dòng)力學(xué)等方面, 而丹參多酚酸鹽治療擴(kuò)張性心肌病的代謝組學(xué)研究鮮見(jiàn)報(bào)道.

代謝組學(xué)是一門(mén)關(guān)于生物體內(nèi)源性代謝物整體及其變化規(guī)律的科學(xué), 當(dāng)正常機(jī)體受到毒性物質(zhì)、 代謝障礙或生理因素的影響時(shí), 代謝物的種類和濃度會(huì)發(fā)生顯著變化. 目前, 代謝組學(xué)方法已被廣泛應(yīng)用[7～9], 但通過(guò)代謝組學(xué)方法推斷得到的代謝通路缺少分子生物學(xué)方面的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證.

本文將代謝組學(xué)與分子生物學(xué)方法相結(jié)合, 對(duì)正常大鼠、 擴(kuò)張性心肌病大鼠及應(yīng)用丹參多酚酸鹽干預(yù)后大鼠的血清中內(nèi)源性小分子進(jìn)行分析檢測(cè), 推斷代謝通路, 并利用Westernbloting法與酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)對(duì)代謝通路進(jìn)行驗(yàn)證, 進(jìn)而闡述擴(kuò)張性心肌病的發(fā)病機(jī)制及丹參多酚酸鹽的治療機(jī)制, 從而為丹參多酚酸鹽治療擴(kuò)張性心肌病提供理論依據(jù).

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1試劑與儀器

甲醇和甲酸(色譜純, 美國(guó)ThermoFisher公司); 提取用乙醇(分析純, 北京化工廠); 去離子水由Milli-Q純水儀制備(美國(guó)Millipore公司); 阿霉素, 批號(hào)為 1206E4(深圳萬(wàn)樂(lè)藥業(yè)有限公司); 注射用丹參多酚酸鹽, 批號(hào)為061121(上海第一生化制藥廠);Bax,Bal-2和GAPDH內(nèi)參抗體(Wanleibio公司); 超氧化物歧化酶(SOD)、 丙二醛(MDA)和ELISA試劑盒(深圳欣博勝生物有限公司).

AcquityUPLCSystem超高效液相色譜儀、WatersxevoG-2SQTOF質(zhì)譜儀和AcquityBEH-C18色譜柱(50mm×2.1mm, 1.7μm)(美國(guó)Waters公司);GEVIVIDE9彩色超聲波診斷儀(美國(guó)GE公司);DYY-7C電泳儀、DYCZ-40D轉(zhuǎn)移槽、DYCZ-24DN雙垂直蛋白電泳儀和WD-9413B型凝膠成像系統(tǒng)(北京六一公司).

1.2實(shí)驗(yàn)過(guò)程

1.2.1擴(kuò)張性心肌病模型的建立健康Wister雄性大鼠24只, 每只體重200g, 常溫(20 ℃)條件下, 每日日照14h, 正常飲食, 適應(yīng)7d環(huán)境后, 隨機(jī)分為正常組(C組)(n=8)、 模型組(M組)(n=8)和給藥治療組(T組)(n=8).M組腹腔注射ADR2mg/kg, 3次/周, 間隔2周, 再注射1周, 總共6次;T組腹腔注射ADR后, 用丹參多酚酸鹽以40mg/kg灌胃, 3次/周, 間隔2周, 再灌胃1周, 總共6次;C組腹腔注射0.9%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))NaCl(10mL/kg), 方法同ADR注射方法, 停藥后自由飲食4周[10]. 在丹參多酚酸鹽給藥組大鼠末次給藥24h后, 將3組大鼠全部麻醉處死, 取血, 以3000r/min轉(zhuǎn)速離心, 分別收集空白C組、M組和T的血清, 于-80 ℃儲(chǔ)存?zhèn)溆?

1.2.2血液樣品的收集和制備血液樣品檢測(cè)前, 于4℃融化樣品, 在100μL樣品中加入400μL乙腈, 渦旋振蕩30s, 在4 ℃下以12000r/min轉(zhuǎn)速離心10min, 上層清液用0.22μm濾膜過(guò)濾, 待測(cè).

1.2.3大鼠心臟彩超檢測(cè)應(yīng)用GEVIVIDE9彩超機(jī)對(duì)各組大鼠于第7周末進(jìn)行多普勒心臟超聲檢測(cè), 圖1為C組、M組和T組大鼠的心臟超聲圖. 由表1可見(jiàn), 與C組比較,M組左室舒張末期內(nèi)徑(LVIDd)、 左心室收縮末期內(nèi)徑(LVSd)明顯增大, 左心室后壁(LVPWDd)明顯變薄, 射血分?jǐn)?shù)(LVEF)減低(P<0.05), 符合擴(kuò)張性心肌病改變, 說(shuō)明造模成功; 而T組大鼠與M組大鼠相比較,LVIDd,LVSd,LVPWDd和LVEF值均有向正常大鼠改變的趨勢(shì), 具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 說(shuō)明丹參多酚酸鹽對(duì)擴(kuò)張性心肌病有明顯的治療作用.

Fig.1　 Heart color doppler ultrasound of control group(A), model group(B) and treatment group(C)Table 1　Effect of salvianolate miltiorrhiza on ventricular structure and ejection fractionin rats with dilated cardiomyopathy

GroupLVIDd/mmLVSd/mmLVPWDd/mmLVEF(%)C4.73±0.41**1.74±0.1**2.1±0.33**85.5±3.23**M5.83±0.592.08±0.191.73±0.0770.4±5.69T5.26±0.33**1.99±0.18**1.91±0.09**76.2±3.19**

**P<0.01(vs.modelgroup).LVIDd:leftventricularinternaldiastolicdiameter;LVSd:leftventricularenddiastolicdiameter;LVPWDd:leftventriculardiastolicposteriorwalldiastolicdimension;LVEF:leftventricularejectionfraction.

1.2.4大鼠左室心肌氧化應(yīng)激驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)病理取材在第7周末, 將大鼠在麻醉狀態(tài)下于腹正中線剪開(kāi), 腹主動(dòng)脈抽血處死, 在無(wú)菌狀態(tài)下將大鼠左肋剪開(kāi), 暴露心臟, 將心臟取出, 剪下一部分左室壁部分心肌標(biāo)本, 根據(jù)細(xì)胞量加入9倍體積的磷酸鹽緩沖溶液, 吹散成細(xì)胞懸液, 用液氮反復(fù)凍融3次后在4 ℃下以12000r/min轉(zhuǎn)速離心10min, 上層清液為實(shí)驗(yàn)所需蛋白組織勻漿, 于-20 ℃保存[11]. 采用ELISA法檢測(cè)各組大鼠SOD和MDA氧化應(yīng)激指標(biāo), 另采用Westernbloting技術(shù)檢測(cè)各組大鼠心室肌Bcl和Bax蛋白.

1.2.5色譜及質(zhì)譜分析條件色譜分析條件: 柱溫40 ℃, 二元線性梯度洗脫: 流動(dòng)相A為含0.1%(體積分?jǐn)?shù))甲酸的水溶液,B為甲醇. 流動(dòng)相梯度組成: 1～3min, 8%～85%B; 3～6min, 85%～100%B; 6～8min, 100%B; 8～9min, 100%～8%B; 9～11min, 8%B. 流速0.4mL/min, 樣品進(jìn)樣量10μL.

質(zhì)譜分析條件:ESI離子源, 采用正、 負(fù)離子模式, 掃描范圍m/z 100～1000. 正離子模式: 毛細(xì)管電壓3kV, 錐孔電壓40V, 離子源溫度100 ℃, 霧化溫度400 ℃, 殼氣流速800L/h; 負(fù)離子模式: 毛細(xì)管電壓2.5kV, 錐孔電壓40V, 離子源溫度80 ℃, 霧化溫度150 ℃, 殼氣流速600L/h.MS2碰撞能量為10～30eV. 質(zhì)譜以亮氨酸腦啡肽作內(nèi)標(biāo), 甲酸鈉校正質(zhì)量軸.

1.2.6潛在的生物標(biāo)記物篩選及解析用MasslynxV4.1軟件對(duì)超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用數(shù)據(jù)進(jìn)行峰提取、 峰對(duì)齊及歸一化處理, 用EZinfo2.0軟件進(jìn)行PCA和OPLS-DA分析, 根據(jù)VIP值(VIP>1.0)和P值(P<0.05) 篩選出潛在的生物標(biāo)志物. 通過(guò)HMDB及METLIN等精確質(zhì)量檢索數(shù)據(jù)庫(kù), 篩選出最有可能的化合物, 最終通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)圖譜確定標(biāo)志物的化學(xué)結(jié)構(gòu).

Fig.2　Base peak intensity chromatograms(BPI) under the ESI+ mode(A, C, E) and ESI- mode(B, D, F)(A), (B) Control group; (C), (D) model group; (E), (F) treatment group.

2結(jié)果與討論

2.1代謝輪廓分析

利用UPLC-Q-TOFMS的正、 負(fù)離子模式對(duì)各組大鼠進(jìn)行分析, 得到3 組基峰離子流色譜圖(圖2). 由圖2可見(jiàn), 各組大鼠的血液代謝產(chǎn)物得到了良好分離, 正離子模式下相應(yīng)信號(hào)大于負(fù)離子模式, 并且檢測(cè)到的物質(zhì)多于負(fù)離子模式． 在正、 負(fù)離子模式下, 某些對(duì)應(yīng)峰在3組色譜圖間存在明顯差異, 表明這些檢測(cè)結(jié)果可能具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

2.2代謝差異分析

PCA分析作為無(wú)監(jiān)督的模式識(shí)別方法可以反映數(shù)據(jù)的原始狀態(tài), 直觀地顯示不同樣品間的整體差異, 故首先對(duì)各組大鼠血液樣品進(jìn)行PCA分析. 由圖3可見(jiàn), 在正離子模式(R2X=0.9018, Q2=0.8352)和負(fù)離子模式(R2X=0.8609, Q2=0.8254)下, 3組血液樣本均可明顯區(qū)分, 表明擴(kuò)張性心肌病造模成功, 而丹參多酚酸鹽對(duì)該疾病有明顯的治療效果.

Fig.3　PCA score plots obtained from the metabolic profiles of the control group, model group and treatment group under positive(A) and negative ion modes(B)

Fig.4　OPLS-DA score plots(A, C) and S-plots(B, D) obtained from the metabolic profiles of the control group and model group under positive(A, B) and negative ion modes(C, D)

為了找到引起擴(kuò)張性心肌病的潛在生物標(biāo)記物, 需要利用有監(jiān)督的識(shí)別模式OPLS-DA分析. 有監(jiān)督的模式識(shí)別方法可以擴(kuò)大組間差異, 但需要利用外部模型驗(yàn)證方法排列實(shí)驗(yàn)來(lái)證明模型的有效性. 由圖4(A)和(C)可見(jiàn), 在正離子模式(R2Y=0.9987, Q2=0.9854)和負(fù)離子模式(R2Y=0.9935, Q2=0.9577)下, 正常組與模型組大鼠血液樣本仍可被明顯區(qū)分. 為尋找潛在的生物標(biāo)記物, 采用OPLS-DA對(duì)正常組和模型組樣本數(shù)據(jù)進(jìn)行分析, 得到正、 負(fù)離子模式下的S-Plot圖[圖4(B)和(D)], 圖中“S”曲線的每一個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)變量, 變量對(duì)分類的重要程度由VIP值的大小來(lái)衡量, 變量離遠(yuǎn)點(diǎn)越遠(yuǎn),VIP值越大. 根據(jù)VIP值(VIP>1.0)和P值(P<0.05)篩選出潛在的生物標(biāo)志物.

2.3主要生物標(biāo)記物的分析

通過(guò)與數(shù)據(jù)庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)譜圖進(jìn)行比對(duì), 共鑒定出9種潛在的生物標(biāo)記物(見(jiàn)表2), 分別為磷酯酰絲氨酸[16∶0/18∶1(9Z)]、 溶血磷脂(16∶0)、 溶血磷脂[20∶4(5Z,8Z,11Z,14Z)]、 溶血磷脂[22∶6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)]、 膽固醇硫酸酯、 膽汁酸、 γ-亞麻酸、 二十二碳五烯酸和9′-羧基-γ-生育酚. 其中, 模型組相對(duì)于正常組, 膽固醇硫酸酯的含量升高, 其它成分含量下降; 大鼠經(jīng)丹參多酚酸鹽治療后, γ-亞麻酸、 二十二碳五烯酸和9′-羧基-γ-生育酚的含量相對(duì)于模型組明顯升高, 其它成分含量未發(fā)生明顯變化, 表明丹參多酚酸鹽可能通過(guò)影響γ-亞麻酸、 二十二碳五烯酸和9′-羧基-γ-生育酚的代謝通路從而達(dá)到治療擴(kuò)張性心肌病的目的. 將UPLC-QTOFMS數(shù)據(jù)導(dǎo)入HemI軟件[12], 對(duì)γ-亞麻酸、 二十二碳五烯酸和9′-羧基-γ-生育酚進(jìn)行了熱圖分析, 結(jié)果示于圖5.

Table 2　Potential biomarkers between control group and model group

Fig.5　Heatmap of metabolites between control(C) group, model(M) group and treatment(T) groupa. γ-linolenic acid; b. docosapentaenoic acid; c. 9′-carboxy-γ-chromanol.

9′-羥基-γ-生育酚是維生素E(VitaminE)酯水解為酚羥基后的代謝產(chǎn)物,Jiang等[13]通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí), 生育酚可影響維生素E的形式, 起到抗炎和抗癌的作用.Kamal等[14,15]發(fā)現(xiàn), 維生素E和生育酚均具有強(qiáng)烈的抗氧化作用, 而生育酚還具有保護(hù)血管內(nèi)皮、 減少氧化自由基對(duì)血管壁的破壞及擴(kuò)張微小動(dòng)脈的作用. 本研究發(fā)現(xiàn),ADR所致擴(kuò)張型心肌病大鼠心肌組織中的SOD和Bcl表達(dá)水平明顯下降, 而MDA和Bax表達(dá)明顯上升, 表明ADR可致大鼠心肌細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激, 并使心肌細(xì)胞凋亡數(shù)量增加, 工作的心肌細(xì)胞數(shù)量減少, 從而導(dǎo)致心功能降低, 心臟擴(kuò)大. 擴(kuò)張型心肌病模型血清中9′-羥基-γ-生育酚的表達(dá)基本消失, 而經(jīng)丹參多酚酸鹽干預(yù)后大鼠血清中9′-羥基-γ-生育酚的表達(dá)明顯升高, 說(shuō)明丹參多酚酸鹽對(duì)ADR所致擴(kuò)張性心肌病的氧化應(yīng)激途徑有積極的治療作用.

γ-亞麻酸是人體必需的多不飽和脂肪酸, 它具有降脂、 殺菌、 抗炎、 抗血栓和抗氧化應(yīng)激等多種生物學(xué)功能[16～18]. γ-亞麻酸由亞油酸分解產(chǎn)生, 擴(kuò)張型心肌病患者心肌及血漿中亞油酸缺乏, 這可能是引起擴(kuò)張型心肌病的發(fā)病因素[19], 而經(jīng)STS干預(yù)治療后, γ-亞麻酸在血漿中的表達(dá)升高, 說(shuō)明丹參酮多酚酸鹽對(duì)ADR所致擴(kuò)張型心肌病大鼠脂肪酸代謝通路具有調(diào)節(jié)作用.

二十二碳五烯酸(EPA)屬于不飽和ω-3型不飽和脂肪酸, 是人體必需由外界攝入的脂肪酸, 在生物體內(nèi)多個(gè)系統(tǒng)具有較強(qiáng)的生物功能, 具有調(diào)節(jié)血脂、 軟化血管、 促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育和提高人體免疫功能等作用[20,21]. 生物體細(xì)胞量代謝的60%～90%來(lái)源于外周血中游離脂肪酸的氧化, 而當(dāng)擴(kuò)張型心肌病發(fā)生時(shí), 心臟本身射血分?jǐn)?shù)降低, 可能導(dǎo)致機(jī)體全身細(xì)胞處于乏氧狀態(tài), 全身細(xì)胞迅速消耗掉外周血當(dāng)中游離的不飽和脂肪酸為其供能, 繼而引發(fā)能量能量代謝障礙; 當(dāng)應(yīng)用STS干預(yù)治療擴(kuò)張型心肌病大鼠后, 二十二碳五烯酸含量升高, 通過(guò)其抗氧化作用可以減少對(duì)心肌細(xì)胞的損害, 從而提高了心臟射血功能, 這證明了丹參酮多酚酸鹽對(duì)擴(kuò)張型心肌病大鼠的脂肪酸代謝及能量代謝具有調(diào)節(jié)作用.

2.4代謝通路的驗(yàn)證性分析

2.4.1第7周末大鼠左心室心肌組織SOD和MDA表達(dá)超氧化物歧化酶(SOD)是生物體內(nèi)天然的氧化酶, 可有效清除氧化自由基, 保護(hù)細(xì)胞受到氧化自由基攻擊; 而丙二醛(MDA)則是氧化應(yīng)激發(fā)生指標(biāo), 二者若互為平衡, 則生物體處于健康狀態(tài), 若MDA表達(dá)增多, 表明SOD的表達(dá)減少, 可推斷氧化應(yīng)激的發(fā)生[22,23]. 由圖6可見(jiàn), 與C組比較,M組大鼠心肌組織內(nèi)SOD含量明顯下降(P<0.01), 丹參多酚酸鹽組大鼠較M組大鼠心肌組織內(nèi)SOD含量明顯上升(P<0.01); 與C組比較,M組大鼠心肌組織內(nèi)MDA含量明顯上升(P<0.01), 丹參多酚酸鹽組大鼠較M組大鼠心肌組織內(nèi)MDA含量明顯下降(P<0.05), 說(shuō)明應(yīng)用丹參多酚酸鹽可有效減輕ADR對(duì)心肌細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷.

Fig.6　Expression levels of MDA(A) and SOD(B) protein of rats left ventricular myocardial tissue in control group, model group and treatment group*P<0.05, **P<0.01(vs. model group).

Fig.7　Western blot analysis(A) and expression levels(B) of Bcl-2 and Bax protein of rats left ventricular myocardial tissue in control group, model group and treatment group**P<0.01(vs. model group).

2.4.2第7周末大鼠左心室心肌組織Bax和Bcl-2表達(dá)Westernbloting技術(shù)是檢測(cè)蛋白的重要半定量技術(shù), 目標(biāo)蛋白與內(nèi)參蛋白的比值可以反映目標(biāo)蛋白表達(dá)量的相對(duì)變化. 圖7(A)中,Bax和Bcl-2蛋白為目標(biāo)蛋白, 而β-actin為內(nèi)參蛋白,Bax/β-actin及Bcl-2/β-actin可以反映Bax和Bcl-2的相對(duì)表達(dá)量.Bcl-2是氧化應(yīng)激“下游”的抗凋亡因子, 而B(niǎo)ax是氧化應(yīng)激“下游”的凋亡因子,Bax可與Bcl-2結(jié)合形成二聚體, 從而減少抗凋亡分子與Bcl-2的同源二聚體化, 促進(jìn)細(xì)胞凋亡[24,25]. 如圖7(B)所示, 與M組大鼠相比,C組大鼠左室心肌細(xì)胞中Bcl-2表達(dá)明顯減少(P<0.05), 而B(niǎo)ax表達(dá)增多(P<0.05), 表明M組大鼠左室心肌組織中異常凋亡正在發(fā)生;與M組相比,T組大鼠Bcl-2表達(dá)趨于正常(P<0.05), 而B(niǎo)ax表達(dá)下降(P<0.05), 說(shuō)明丹參多酚酸鹽具有通過(guò)調(diào)節(jié)抗氧化分子表達(dá)水平抗心肌細(xì)胞凋亡的作用, 從而改善了擴(kuò)張型心肌病大鼠的心臟功能.

3結(jié)論

將代謝組學(xué)與分子生物學(xué)方法相結(jié)合, 研究了丹參多酚酸鹽治療擴(kuò)張性心肌病的作用機(jī)制. 通過(guò)代謝組學(xué)方法共鑒定了磷酯酰絲氨酸、 溶血磷脂、 溶血磷脂、 溶血磷脂、 膽固醇硫酸酯、 膽汁酸、 γ-亞麻酸、 二十二碳五烯酸和9′-羧基-γ-生育酚等9種內(nèi)源性代謝產(chǎn)物. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 丹參多酚酸鹽通過(guò)影響脂肪酸代謝和抗氧化等通路發(fā)揮治療作用, 其中抗氧化通路是其減少心肌損傷的重要作用途徑. 本文闡述了丹參多酚酸治療ADR所致擴(kuò)張型心肌病的作用機(jī)理, 為臨床治療擴(kuò)張性心肌病提供理論依據(jù).

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(Ed.:D,K)

?SupportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina(Nos. 81560702, 81260682).

doi:10.7503/cjcu20150984

收稿日期:2015-12-26. 網(wǎng)絡(luò)出版日期: 2016-04-07.

基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金(批準(zhǔn)號(hào): 81560702, 81260682)資助.

中圖分類號(hào)O657

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

MechanismofSalvia MiltiorrhizaontheImprovementofMyocardialFunctioninPatientswithDilatedCardiomyopathy?

WANGXiye1,2,SHANXiaotong3,WANGYilin3,LIDan1,2,ZHAOMing3*,XULiang1,2*

(1. College of Chemistry and Chemical Engineering, Inner Mongolia University for the Nationalities, Tongliao 028042, China;2. Key Laboratory of Natural Product Chemistry and Functional Molecular Synthetic of Autonomous Region, Tongliao 028042, China;3. Affiliated Hospital of Inner Mongolia University for the Nationalities, Tongliao 028042, China)

AbstractMetabonomics combined with molecular biology were used to investigate the mechanisms of anti-dilated cardiomyopathy treated by depside salt from Salvia miltiorrhiza. The serum metabolic profiling of control group, model group and treatment group were analysed by principle component analysis(PCA). The potential biomarkers were selected with the help of orthogonal partial least squares discriminant analysis(OPLS-DA). As results, nine potential biomarkers including the PS[16∶0/18∶1(9Z)], LysoPC(16∶0), LysoPC[20∶4(5Z, 8Z, 11Z, 14Z)], LysoPC[22∶6(4Z, 7Z, 10Z, 13Z, 16Z, 19Z)], cholesterol sulfate, taurohyocholate, γ-linolenic acid, docosapentaenoic acid and 9′-carboxy-γ-chromanol were identified respectively. In addition, the relative content of γ-linolenic acid, docosapentaenoic acid and 9′-carboxy-γ-chromanol decreased in the model group, while increased in the treatment group. With the help of western bloting and enzyme-linked immunosorbent method, we confirmed that the depside salt from Salvia miltiorrhiza influenced the expression levels of superoxide disproportionation(SOD), malondialdehyde(MDA), Bcl-2 and Bax protein molecule(the proteins mentioned above were related with γ-linolenic acid and 9′-carboxyl-γ-tocopherol), and then reduced the amount of the apoptosis myocardial cell induced by oxidative stress, and treated the the dilated cardiomyopathy caused by adriamycin finally.

KeywordsDilated cardiomyopathy; Salvia miltiorrhiza; Metabonomics; Mass spectrometry; Oxidative stress

聯(lián)系人簡(jiǎn)介: 許良, 男, 博士, 教授, 主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究.E-mail:nmgxl66@163.com

趙明, 男, 博士, 主任醫(yī)師, 主要從事心血管疾病研究.E-mail:langzhe73@163.com