豬細(xì)小病毒病滅活疫苗的安全性和抗體消長(zhǎng)規(guī)律的研究

李曉艷 劉超 何平有 郁宏偉/瑞普（保定）生物藥業(yè)有限公司

豬細(xì)小病毒病滅活疫苗的安全性和抗體消長(zhǎng)規(guī)律的研究

李曉艷 劉超 何平有 郁宏偉/瑞普（保定）生物藥業(yè)有限公司

豬細(xì)小病毒病是由細(xì)小病毒科豬細(xì)小病毒（PPV）感染豬引起的胚胎感染及死亡，而母豬并不表現(xiàn)明顯癥狀的豬繁殖障礙性疾病。妊娠前期的母豬易感染，主要引起母豬流產(chǎn)、胎兒死亡、胎兒畸形、木乃伊胎、弱胎及不孕等，同時(shí)還可引起仔豬發(fā)生皮炎和腹瀉，與豬圓環(huán)病毒協(xié)同感染是導(dǎo)致斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合癥的主要原因之一。本病目前已廣泛分布于世界各地，并呈現(xiàn)出與豬藍(lán)耳病毒、圓環(huán)病毒感染、豬偽狂犬病毒以及豬瘟病毒混合感染的嚴(yán)重態(tài)勢(shì)，給世界范圍內(nèi)的養(yǎng)豬業(yè)造成了極大的損失。

目前，對(duì)于由PPV引起的豬繁殖障礙尚缺乏有效的治療方法，唯一的防制措施就是對(duì)易感豬進(jìn)行疫苗免疫。不同廠家生產(chǎn)的疫苗免疫，其免疫效果參差不齊，豬體免疫后有時(shí)出現(xiàn)發(fā)熱、食欲不振、接種部明顯紅腫塊、疫苗免疫后保護(hù)率低和疫苗持續(xù)期較短。針對(duì)目前情況，我公司對(duì)豬細(xì)小病毒病滅活疫苗的抗體消長(zhǎng)規(guī)律和安全性研究，現(xiàn)報(bào)告如下。

一、材料

（一）病毒毒株、細(xì)胞與血清

豬細(xì)小病毒RP株、ST細(xì)胞均由瑞普（保定）生物藥業(yè)有限公司經(jīng)揚(yáng)州優(yōu)邦公司轉(zhuǎn)讓資源克隆獲得；犢牛血清購(gòu)自Hyclone公司；豬細(xì)小病毒標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清購(gòu)自美國(guó)VMRD公司；陰性血清由本公司研發(fā)中心實(shí)驗(yàn)室制備并保存。

（二）參考疫苗

進(jìn)口疫苗產(chǎn)地：德國(guó)，批號(hào)：20150501。

（三）試劑

胰酶購(gòu)自GIBCO公司；BEI購(gòu)自FLUCA公司。

二、方法

（一）疫苗制備

按照“豬細(xì)小病毒病滅活疫苗規(guī)程草案”制備3批疫苗，批號(hào)分別為20150301批、20150402批和20150403批。

（二）安全性試驗(yàn)

1.乳鼠安全性試驗(yàn)。取3～5日齡乳鼠25只，隨機(jī)分為5組，5只/組，分別免疫3批疫苗，0.1 ml/只，觀察10 d，同時(shí)設(shè)進(jìn)口疫苗對(duì)照和空白對(duì)照組。

2.仔豬安全性試驗(yàn)。取4～6周齡仔豬25頭，隨機(jī)分為5組，5頭/組，其中3組分別皮下注射3批疫苗，4 ml/只，觀察21 d，同時(shí)設(shè)進(jìn)口疫苗對(duì)照和空白對(duì)照組。

（三）疫苗HI抗體消長(zhǎng)情況

取體重350 g～400 g健康豚鼠25只，隨機(jī)分為5組，5只/組，其中3組分別皮下注射3批疫苗，0.5 ml/只，并設(shè)進(jìn)口疫苗對(duì)照和空白對(duì)照組，免前先心臟采血1 ml，免后每月采血，連續(xù)采血6月，分離血清后檢測(cè)HI抗體滴度。

三、結(jié)果

（一）疫苗制備

采用同步接毒的方式，病毒接種劑量為培養(yǎng)液體積的1%，結(jié)果運(yùn)用單克隆ST細(xì)胞培養(yǎng)純化后的PPV病毒制備的滅活疫苗其抗原含量比克隆前增加1個(gè)～2

圖1 豬細(xì)小病毒病滅活疫苗HI抗體比較

表1 豬細(xì)小病毒病滅活疫苗HI抗體檢測(cè)結(jié)

四、討論

豬用滅活疫苗的安全高效和副作用小是此項(xiàng)研究的關(guān)鍵。病毒滴度高，細(xì)胞培養(yǎng)物的牛血清含量低，滅活劑濃度低且中和徹底是滅活疫苗研究要重點(diǎn)著手解決的問(wèn)題。

本研究運(yùn)用單克隆細(xì)胞株培養(yǎng)純化的PPV毒株，極大的提高豬細(xì)小病毒的病毒滴度，降低生產(chǎn)成本。病毒液采用新型滅活劑二乙烯亞胺（BEI）對(duì)豬細(xì)小病毒（PPV）進(jìn)行滅活，通過(guò)滅活驗(yàn)證以及安全性試驗(yàn)。表明對(duì)PPV的滅活是徹底的、安全的，疫苗免疫乳鼠、仔豬均無(wú)不良反應(yīng)，免疫豚鼠后產(chǎn)生較高的抗體水平。

本試驗(yàn)將豬細(xì)小病毒病滅活疫苗接種豚鼠進(jìn)行抗體消長(zhǎng)規(guī)律的研究，在免疫后14 d全部產(chǎn)生抗體反應(yīng)，免疫后60 d血清HI抗體達(dá)到高峰（1∶5 405），免疫后180 d仍可達(dá)到1∶256，與進(jìn)口疫苗的對(duì)比結(jié)果顯示，3批豬細(xì)小病毒滅活疫苗均已達(dá)到同類進(jìn)口疫苗標(biāo)準(zhǔn)。

（略）