納豆紅曲銀杏的毒理安全性評(píng)價(jià)

朱春陽+周婷婷+林立鶴+隋自潔

【摘要】 目的 探討納豆紅曲銀杏（NHY）的安全性。方法 選取無特定病原體（SPF）級(jí)健康昆明種小白鼠、Wistar大鼠， 按《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法》進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果 小鼠急性毒性試驗(yàn)LD50>10.0 g/kg BW， 屬實(shí)際無毒級(jí)；遺傳毒性試驗(yàn)均未呈現(xiàn)致突變作用。大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)表明動(dòng)物各項(xiàng)生理指標(biāo)均未發(fā)生異常。結(jié)論 NHY安全無毒、無致突變性。

【關(guān)鍵詞】 納豆紅曲銀杏；無毒；致突變；安全性

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.18.197

納豆[1]作為黃豆為原料的發(fā)酵品， 是一種營(yíng)養(yǎng)價(jià)值很高的食品， 可調(diào)節(jié)血脂， 降低膽固醇、血脂， 預(yù)防高血壓和動(dòng)脈硬化；可調(diào)節(jié)腸道菌群平衡， 預(yù)防痢疾、腸炎和便秘；還有防癌抗癌、緩型減肥、排毒養(yǎng)顏、延緩衰老等功效。銀杏葉提取物是從銀杏科屬植物葉中提取的一種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)， 它具有促進(jìn)機(jī)體循環(huán)、抗氧化、延緩衰老、提高記憶力、防治高血壓、調(diào)節(jié)血糖等方面的功效與作用。納豆紅曲銀杏是以納豆凍干粉、功能性紅曲粉、銀杏葉提取物為主要原料的保健食品[2]。依照《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法》對(duì)其安全性進(jìn)行毒理試驗(yàn)， 以保證其對(duì)人體食用安全。

1 材料與方法

1. 1 受試物 納豆紅曲銀杏。

1. 2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)健康昆明種小白鼠、Wistar大鼠， 吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供， 使用許可證號(hào)SCXK-（吉）-2011-0004。本清潔級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境設(shè)施合格證號(hào)， 吉?jiǎng)釉O(shè)字10-1005。

1. 3 試驗(yàn)方法

1. 3. 1 小鼠急性毒性試驗(yàn) 采用急性經(jīng)口毒性實(shí)驗(yàn)， 一次最大量法進(jìn)行。選取18～22 g的小鼠20只， 雌雄各10只。受試物用蒸餾水配制， 灌胃最大濃度25%， 灌胃2次， 每次0.2 ml/10 gBW， 劑量為10 g/kgBW， 給予受試物后， 觀察14 d。

1. 3. 2 遺傳毒性試驗(yàn) ①小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)： 選用25～30 g的小鼠50只， 雌雄各半， 隨機(jī)分組， 每組10只。以40 mg/kgBW的環(huán)磷酰胺為陽性對(duì)照， 蒸餾水為陰性對(duì)照， 試驗(yàn)設(shè)5.00、2.50、1.25 g/kgBW三個(gè)劑量組。間隔24 h 2次經(jīng)口灌胃， 末次灌胃后6 h頸椎脫臼處死動(dòng)物， 取股骨骨髓常規(guī)制片。每只動(dòng)物計(jì)數(shù)1000個(gè)骨髓嗜多染紅細(xì)胞的微核發(fā)生率。②小鼠精子畸形試驗(yàn)：選用25～30 g 雄性小鼠25只， 隨機(jī)分組。以40 mg/kgBW的環(huán)磷酰胺為陽性對(duì)照， 蒸餾水為陰性對(duì)照， 試驗(yàn)設(shè)5.00、2.50、1.25 g/kgBW三個(gè)劑量組。連續(xù)灌胃5 d， 首次灌胃后35 d處死動(dòng)物， 常規(guī)制片。每只動(dòng)物計(jì)數(shù)1000個(gè)結(jié)構(gòu)完整精子的畸變精子發(fā)生率。③Ames試驗(yàn)：試驗(yàn)菌株TA97、TA98、TA100、TA102， 經(jīng)鑒定符合要求， 均為鼠傷寒沙門氏菌組胺酸缺陷型。體外代謝活化系統(tǒng)用多氯聯(lián)苯誘導(dǎo)的大鼠肝勻漿。試驗(yàn)設(shè)5000、1000、200、40、8 μg/皿5個(gè)劑量， 同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照（蒸餾水）和陽性對(duì)照， 平板摻入法， 每個(gè)劑量3個(gè)平行， 整套試驗(yàn)重復(fù)2次。

1. 3. 3 大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn) 設(shè)三個(gè)受試物組分別為2.93、2.20、1.47 g/kgBW及對(duì)照組， 每組20只， 雌雄各半。三個(gè)試驗(yàn)組受試物用逐步擴(kuò)大量法分別均勻摻入基礎(chǔ)飼料中， 含量分別為2.93%、2.20%、1.47%， 基礎(chǔ)飼料為陰性對(duì)照組。單籠喂養(yǎng)， 記錄大鼠每周的體重、進(jìn)食量， 連續(xù)喂養(yǎng)30 d。實(shí)驗(yàn)第31天， 麻醉后下腔靜脈取血， 進(jìn)行血液學(xué)、生化學(xué)指標(biāo)測(cè)定， 處死大鼠， 大體解剖， 觀察每只大鼠臟器有無異常， 取肝、腎、脾臟和睪丸（卵巢）稱重， 計(jì)算臟體系數(shù)， 高劑量組大鼠的肝、腎、脾臟、胃、睪丸、卵巢進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 小鼠急性毒性試驗(yàn) 該受試物小鼠急性毒性試驗(yàn)雌、雄小鼠LD50>10.0 g/kgBW， 按急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為實(shí)際無毒級(jí)。

2. 2 遺傳毒性試驗(yàn) 小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)及小鼠精子畸形試驗(yàn)和Ames試驗(yàn)結(jié)果均為陰性， 未見致突變作用。

2. 3 大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)

2. 3. 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般狀況 在30 d喂養(yǎng)期間， 各劑量組大鼠生長(zhǎng)良好， 活動(dòng)正常， 無死亡。各劑量組動(dòng)物體重、進(jìn)食量、動(dòng)物食物利用率等一般情況未見異常。

2. 3. 2 對(duì)大鼠血常規(guī)的影響 按高、中、低、對(duì)照組順序， 血紅蛋白（HGB）雄性分別為（138.00±4.35）、（139.20±4.83）、（136.70±3.27）、（139.10±3.31）g/L， 雌性分別為（135.80±2.90）、（135.30±2.63）、（135.90±3.00）、（136.40±2.27）g/L；紅細(xì)胞（RBC）雄性分別為[（7.06±0.48）、（7.08±0.36）、（7.11±0.26）、（7.29±0.29）] ×1012/L， 雌性分別為[（6.77±0.34）、（6.79±0.32）、（6.80±0.16）、（6.99±0.30）] ×1012/L；白細(xì)胞（WBC）雄性分別為[（4.69±0.32）、（5.01±0.66）、（4.66±0.46）、（4.68±0.53）] ×109/L， 雌性分別為[（4.58±0.28）、（4.53±0.26）、（4.83±0.32）、（4.56±0.26）] ×109/L。各劑量組HGB、RBC及WBC與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2. 3. 3 對(duì)大鼠血生化的影響 各劑量組的谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、尿素（BUN）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、肌酐（Cr）、血糖（GLU）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、膽固醇（CHO）、甘油三脂（TG）與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。且無劑量反應(yīng)關(guān)系。見表1。

2. 3. 4 病理學(xué)檢查 各劑量組與對(duì)照組比較， 肝、腎、脾臟和睪丸（卵巢）各臟器絕對(duì)重量及臟器系數(shù)， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。組織病理學(xué)觀察肝、腎、脾臟、胃、睪丸、卵巢均未見明顯病理改變。

3 討論

納豆、銀杏葉都有較高的食用安全性[1， 3]， 功能性紅曲無毒副作用， 但傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)的紅曲可能有真菌毒素桔霉素的存在， 真菌毒素桔霉素是紅曲菌的一種次級(jí)代謝產(chǎn)物， 具有腎毒性， 還可致畸、致癌和誘發(fā)基因突變， 因而使功能性紅曲的使用安全性受到挑戰(zhàn)[4]。以納豆凍干粉、功能性紅曲粉、銀杏葉提取物（所占比例分別為20%、12%、7%）為主要成份的NHY是否安全呢， 小鼠急性毒性試驗(yàn)說明該受試物為實(shí)際無毒級(jí)。小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)是對(duì)體細(xì)胞染色體結(jié)構(gòu)完整性改變的評(píng)估， 小鼠精子畸形試驗(yàn)是評(píng)價(jià)受試物對(duì)體內(nèi)生殖細(xì)胞的遺傳毒性作用， Ames試驗(yàn)是檢測(cè)受試物是否具有誘發(fā)基因突變的能力， 遺傳毒性試驗(yàn)結(jié)果表明NHY對(duì)體細(xì)胞和生殖細(xì)胞均無染色體畸變作用， 亦無基因突變作用。大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果說明NHY不影響動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育， 對(duì)造血功能、肝腎功能亦無損害作用， NHY對(duì)大鼠臟器的病理組織學(xué)無明顯影響， 在2.93 g/kgBW劑量范圍內(nèi)未觀察到有害作用。在本研究劑量范圍內(nèi)NHY無毒、無致突變性， 認(rèn)為NHY食用較安全。

參考文獻(xiàn)

[1] 胡景柱， 夏壽華， 吳林.納豆凍干粉的安全性研究.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2000， 28（3）：380-381.

[2] 盧連華， 吳世富， 張?jiān)贫耍?等.一種銀杏葉提取物膠囊的毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià).預(yù)防醫(yī)學(xué)論壇， 2013（7）：517-520.

[3] 張衛(wèi)明， 顧龔平， 史勁松.銀杏葉食用安全性的毒理學(xué)評(píng)價(jià).南京師大學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， 2005， 28（1）：80-83.

[4] 黃艷， 李從發(fā)， 姚廣龍.紅曲及其安全性研究進(jìn)展.食品研究與開發(fā)， 2006， 27（8）：217-219.

[收稿日期：2016-03-23]