斷奶時(shí)間及日齡變化對(duì)湖羊羔羊肌肉中脂肪酸組成的影響

張　寧　鄧　穎　李　飛*　李發(fā)弟,2　劉　婷　王維民　翁秀秀

(1.草地農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州大學(xué)草地農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，蘭州730020；2.甘肅省肉羊繁育生物技術(shù)工程實(shí)驗(yàn)室，民勤733300；3.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，蘭州730070)

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斷奶時(shí)間及日齡變化對(duì)湖羊羔羊肌肉中脂肪酸組成的影響

張寧1鄧穎1李飛1*李發(fā)弟1,2劉婷3王維民3翁秀秀1

(1.草地農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州大學(xué)草地農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，蘭州730020；2.甘肅省肉羊繁育生物技術(shù)工程實(shí)驗(yàn)室，民勤733300；3.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，蘭州730070)

摘要：本試驗(yàn)旨在研究斷奶時(shí)間及日齡變化對(duì)湖羊羔羊肌肉中脂肪酸組成的影響。試驗(yàn)選取體重[(3.51±0.57) kg]接近、健康狀況良好的54只初生湖羊公羔，飼養(yǎng)至28日齡后屠宰6只。將剩余的48只按照同質(zhì)性原則分為28日齡斷奶組[(8.21±0.97) kg]和56日齡斷奶組[(8.06±0.53) kg],每組24只。2組在42、56、70、84日齡分別屠宰6只，屠宰后測(cè)定羔羊背最長(zhǎng)肌脂肪酸組成和瘤胃中氫化菌含量。結(jié)果表明：1)56日齡斷奶組肌肉中大部分脂肪酸的含量高于28日齡斷奶組；隨著日齡的增長(zhǎng)，羔羊肌肉中脂肪酸的含量逐漸升高，種類(lèi)變得越來(lái)越多。2)70日齡時(shí)，28日齡斷奶組的瘤胃中溶纖維丁酸弧菌含量顯著高于56日齡斷奶組(P<0.05)；56日齡斷奶組瘤胃中溶纖維丁酸弧菌的含量在42日齡時(shí)顯著高于70和84日齡(P<0.05)。由此可見(jiàn)，與28日齡斷奶相比，羔羊在56日齡斷奶更利于肌肉中脂肪酸的沉積。

關(guān)鍵詞：斷奶;日齡;脂肪酸;氫化菌

隨著人們生活水平的提高，羊肉在餐桌上越來(lái)越受到歡迎，這主要是由于羊肉具有營(yíng)養(yǎng)豐富、口感好以及食療藥補(bǔ)等優(yōu)點(diǎn)，被認(rèn)為是一種保健型的肉類(lèi)[1]。但與養(yǎng)羊業(yè)發(fā)達(dá)的國(guó)家相比，我國(guó)在羊肉的品質(zhì)方面還存在著很大的提升空間。羊肉中脂肪酸的組成是肉品質(zhì)的主要影響因素，因此研究羔羊脂肪酸的沉積對(duì)提高肉品質(zhì)具有重要的意義[2]。

通過(guò)控制斷奶時(shí)間來(lái)改善羊肉肉品質(zhì)已成為反芻動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)領(lǐng)域的一個(gè)熱點(diǎn)。通過(guò)控制斷奶時(shí)間可以改變反芻動(dòng)物的飼糧攝入，反芻動(dòng)物飼糧粗精比[3-4]、能量[5-6]和蛋白質(zhì)水平[7]直接影響動(dòng)物肌肉中脂肪酸的組成，從而起到改變肌肉中脂肪酸的組成達(dá)到改善肉品質(zhì)的目的。Saudo等[8]對(duì)比了56日齡斷奶組和不斷奶組羔羊肌肉中脂肪酸的組成，不斷奶組C12∶0、C14∶0、C15∶0、C16∶0、C16∶1和C18∶3的含量高于56日齡斷奶組，C17∶0、C18∶0、C18∶1和C20∶0的含量卻低于56日齡斷奶組。反芻動(dòng)物斷奶后，飼料中脂肪源會(huì)產(chǎn)生變化。不同類(lèi)型的脂肪源會(huì)對(duì)動(dòng)物肌肉中脂肪酸的組成產(chǎn)生影響。飼糧中添加不同類(lèi)型的脂肪源可以降低反芻動(dòng)物肉產(chǎn)品中飽和脂肪酸(SFA)含量，增加單不飽和脂肪酸(MUFA)、多不飽和脂肪酸(PUFA)含量，尤其是n-3系列的PUFA,使PUFA/SFA提高，n-6/n-3 PUFA降低，從而提高反芻動(dòng)物肉制品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值[9-10]。不同斷奶時(shí)間及日齡變化能使反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)微生物區(qū)系發(fā)生改變，瘤胃內(nèi)大部分纖維素降解菌都是在斷奶后出現(xiàn)，隨著日齡的增長(zhǎng)，瘤胃內(nèi)微生物區(qū)系逐漸豐富[11]，瘤胃內(nèi)微生物區(qū)系的改變對(duì)肌肉中脂肪酸的沉積具有重要影響[2]。

湖羊是我國(guó)的地方品種，具有肉質(zhì)好，生長(zhǎng)發(fā)育快等優(yōu)點(diǎn)[12]。但到目前為止，關(guān)于湖羊不同斷奶時(shí)間對(duì)肌肉中脂肪酸沉積影響的研究鮮有報(bào)道。本試驗(yàn)通過(guò)比較不同斷奶時(shí)間(28日齡 vs. 56日齡)對(duì)羔羊各生長(zhǎng)階段肌肉脂肪酸組成和瘤胃氫化菌數(shù)量的影響，明確湖羊羔羊肌肉脂肪酸沉積過(guò)程及斷奶時(shí)間對(duì)脂肪酸組成的影響機(jī)制，為生產(chǎn)中通過(guò)營(yíng)養(yǎng)與管理手段調(diào)控羊肉肌肉脂肪酸組成提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼糧

本試驗(yàn)采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，試驗(yàn)選取體重[(3.51±0.57) kg]接近、健康狀況良好的54只初生湖羊公羔，飼養(yǎng)至28日齡后屠宰6只。將剩余的48只按照同質(zhì)性原則分為28日齡斷奶組[(8.21±0.97) kg]和56日齡斷奶組[(8.06±0.53) kg]，每組24只。所有試驗(yàn)動(dòng)物從7日齡開(kāi)

始補(bǔ)飼開(kāi)食料，59日齡換育肥料，換料過(guò)渡期為10 d。28日齡斷奶組和56日齡斷奶組在42、56、70、84日齡分別屠宰6只。試驗(yàn)所用羔羊均購(gòu)于甘肅省金昌中天羊業(yè)有限公司。開(kāi)食料的組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)于表1，育肥料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)于表2。2種飼糧的壓縮比均為1∶6，制粒直徑均為2.5 mm。

1.2試驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)管理

羔羊與母羊共同飼養(yǎng)在同一圈欄內(nèi)，圈欄內(nèi)安有補(bǔ)飼欄。在每天08:00—10:00、12:00—14:00、18:00—20:00將羔羊關(guān)進(jìn)補(bǔ)飼欄使其與母羊隔開(kāi)，而在其余時(shí)間羔羊可跟隨母羊自由吮乳。羔羊跟隨母羊時(shí)不允許采食母羊料，但可采食補(bǔ)飼料及自由飲水。母羊料為羊場(chǎng)常規(guī)全混合日糧(TMR)(青貯玉米40%，燕麥草12%，苜蓿10%，大麥秸稈8%，油菜秸稈5%，豆渣13%，玉米9%，豆粕3%；營(yíng)養(yǎng)水平為消化能7.38 MJ/kg，粗蛋白質(zhì)7.60%，鈣0.32%，磷0.25%)，圈舍每隔15 d徹底消毒1次。

表1　開(kāi)食料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1　Composition and nutrient levels of the starter (air-dry basis)　%

1)預(yù)混料為每千克開(kāi)食料提供 The premix provided the following per kg of the starter：S 200 mg，F(xiàn)e 25 mg，Zn 40 mg，Cu 8 mg，Mn 40 mg，I 0.3 mg，Se 0.2 mg，Co 0.1 mg，VA 940 IU，VD 111 IU，VE 20 IU，VB 20 IU。下表同 The same as below。

2)干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、中性洗滌纖維、鈣和磷為實(shí)測(cè)值，其他為計(jì)算值。下表同。DM, CP, NDF, Ca, and P were measured values, while the others were calculated values. The same as below.

1.3采樣和測(cè)定指標(biāo)及方法

1.3.1采樣

試驗(yàn)動(dòng)物屠宰后，采集背最長(zhǎng)肌300 g左右，-20 ℃保存用于后期脂肪酸分析。

打開(kāi)瘤胃后，取出瘤胃內(nèi)容物，用勻漿機(jī)混勻，所有內(nèi)容物過(guò)4層紗布得到瘤胃液，然后將瘤胃液裝入凍存管后放入裝有液氮的液氮罐中保存，帶回實(shí)驗(yàn)室后將樣品置于-80 ℃保存直至微生物DNA的提取。

1.3.2肌肉脂肪酸組成測(cè)定

1.3.2.1樣品預(yù)處理

樣品總脂肪的提取及脂肪酸甲酯化參考O’Fallon等[13]的方法進(jìn)行。1 g的半冷凍樣品均勻地置于室溫條件下的研磨機(jī)中研磨10～15 s，然后放置于1個(gè)16 mm×125 mm帶螺帽耐熱玻璃裝有0.7 mL 10 mol/L的KOH溶液和6.3 mL的甲醇的培養(yǎng)管中。將培養(yǎng)管置于55 ℃水浴1.5 h，每20 min用力用手晃動(dòng)管子5 s使樣品正常滲透、溶解和水解。通過(guò)自來(lái)水水浴至室溫后，加入0.58 mL 12 mol/L的H2SO4。培養(yǎng)管通過(guò)倒置混合，會(huì)產(chǎn)生K2SO4沉淀，然后繼續(xù)置于55 ℃水浴1.5 h，每20 min用力晃動(dòng)管子5 s。脂肪酸甲酯(FAME)形成后，培養(yǎng)管置于冰水中冰浴。加入3 mL正己烷，培養(yǎng)管渦旋5 min，然后將培養(yǎng)管離心5 min。將含有FAME的正己烷層抽取到氣相色譜(GC)分析小瓶中。GC分析小瓶加蓋置于-20 ℃下保存至分析。

表2　育肥料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 2　Composition and nutrient levels of the fattening diet (air-dry basis)　%

1.3.2.2GC分析方法

制備好的脂肪酸甲酯進(jìn)行GC分析(Trace 1300，Thermo Fisher)，毛細(xì)色譜柱為100 m×0.25 mm×0.2 μm(HP-88，Agilent)。程序升溫條件為:初始溫度166 ℃維持39 min，以10 ℃/min升至230 ℃,維持10 min，以3 ℃/min升至235 ℃，維持8 min，進(jìn)樣口溫度為250 ℃，火焰離子檢測(cè)器(FID)溫度為250 ℃，載氣氮?dú)?N2)流速為1.2 mL/min,分流比25∶1。脂肪酸甲基酯標(biāo)樣均購(gòu)于Sigma公司。

1.3.3瘤胃氫化菌定量

采用實(shí)時(shí)定量PCR (qRT-PCR)技術(shù)測(cè)定溶纖維丁酸弧菌(Butyrivibriofibrisolvens)、蛋白溶解梭菌(Clostridiumproteoclasticum)相對(duì)于瘤胃總細(xì)菌(general bateria)的相對(duì)含量。

1.3.3.1DNA提取

瘤胃液樣品中的總基因組DNA進(jìn)行提取采用的是動(dòng)物糞便基因組DNA提取試劑盒(Stool DNA Kit 50，Omega)，提取按照說(shuō)明書(shū)方法進(jìn)行。

1.3.3.2PCR引物設(shè)計(jì)

瘤胃總細(xì)菌、溶纖維丁酸弧菌和蛋白溶解梭菌的PCR引物利用Primer 5.0進(jìn)行設(shè)計(jì)，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。瘤胃總細(xì)菌PCR引物序列為：5′-CGGCAACGAGCGCAACCC-3′(上游),5′-CCATTGTAGCACGTGTGTAGCC-3′(下游);溶纖維丁酸弧菌PCR引物序列為：5′-GCCTCAGCGTCAGTAATCG-3′(上游),5′-GGAGCGTAGGCGGTTTTAC-3′(下游);蛋白溶解梭菌PCR引物序列為：5′-TCCGGTGGTATGAGATGGGC-3′(上游),5′-GTCGCTGCATCAGAGTTTCC-3′(下游)。

1.3.3.3qRT-RCR反應(yīng)體系及條件

qRT-RCR的操作儀器為Bio-Rad CFX 96型qRT-PCR檢測(cè)系統(tǒng)。以SYBR Premix Ex TaqTM試劑(北京全式金生物技術(shù)有限公司)建立20 μL反應(yīng)體系,包括SYBR Green Ⅰ型熒光染料Mix 10 μL、上游和下游引物分別0.4 μL、DNA模板2 μL及雙蒸去離子水7.2 μL。反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性10 min；95 ℃變性15 s；60 ℃(總菌)/57 ℃(溶纖維丁酸弧菌)/55 ℃(蛋白溶解梭菌)退火30 s；72 ℃延伸30 s并采集突光信號(hào)，共40個(gè)循環(huán)。按儀器操作說(shuō)明制作熔解曲線(xiàn)進(jìn)行后續(xù)分析。

1.3.3.4計(jì)算公式

根據(jù)下列公式將2種瘤胃氫化菌數(shù)量表示為相對(duì)于瘤胃總細(xì)菌16S rDNA的含百分比:

目標(biāo)菌含量(%)=2-(Ct目標(biāo)菌-Ct總細(xì)菌)。

式中：Ct目標(biāo)菌為目標(biāo)菌引物所測(cè)循環(huán)閾值,Ct總細(xì)菌為以瘤胃總細(xì)菌為引物所測(cè)循環(huán)閾值。

1.4統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)首先用Excel 2010初步整理，然后用SPSS 18.0對(duì)日齡變化處理的組間試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，并用Duncan氏法進(jìn)行多重比較；對(duì)斷奶時(shí)間處理的組間試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行獨(dú)立t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析。P>0.05為差異不顯著，P<0.05為差異顯著。

2結(jié)果

2.1斷奶時(shí)間及日齡變化對(duì)羔羊背最長(zhǎng)肌脂肪酸組成的影響

斷奶時(shí)間及日齡變化對(duì)羔羊背最長(zhǎng)肌脂肪酸組成的影響見(jiàn)3。不同斷奶時(shí)間對(duì)羔羊背最長(zhǎng)肌PUFA和SFA含量在28、42與56日齡均不存在顯著性差異(P>0.05)，但在70與84日齡時(shí)56日齡斷奶組顯著高于28日齡斷奶組(P<0.05)；對(duì)于奇數(shù)碳原子脂肪酸(OFA)和MUFA的含量，在42日齡時(shí)56日齡斷奶組均顯著低于28日齡斷奶組(P<0.05)，OFA的含量在其他日齡2組之間均無(wú)顯著性差異(P>0.05)，而MUFA的含量在70和84日齡時(shí)56日齡斷奶組均顯著高于28日齡斷奶組(P<0.05)；PUFA/SFA 2組之間在各個(gè)日齡均無(wú)顯著性差異(P>0.05)；n-6/n-3PUFA在70日齡時(shí)56日齡斷奶組顯著低于28日齡斷奶組(P<0.05)，在84日齡時(shí)2組之間并無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

對(duì)于單種脂肪酸含量的對(duì)比，在42日齡時(shí)，C18∶0、C18∶3n-6和C18∶3n-3的含量56日齡斷奶組顯著高于28日齡斷奶組(P<0.05)，C16∶0、C16∶0anteiso、C18∶1t11、C18∶2n-6、C20∶1、C20∶3、C22∶1和C20∶5n-3的含量56日齡斷奶組顯著低于28日齡斷奶組(P<0.05)，其他脂肪酸的含量2組之間均無(wú)顯著性差異(P>0.05)；在56日齡時(shí)，只有C18∶1t11和C18∶3n-3的含量56日齡斷奶組顯著低于28日齡斷奶組(P<0.05)，其他脂肪酸含量組間均無(wú)顯著性差異(P>0.05)；在70日齡時(shí)，C10∶0、C12∶0、C14∶0、C15∶0、C16∶0anteiso、C16∶0、C17∶0iso、C18∶2n-6、C18∶1c9、C20∶3、C22∶1和C20∶5n-3的含量56日齡斷奶組顯著高于28日齡斷奶組(P<0.05)，C17∶0、C17∶1和C18∶1t11的含量56日齡斷奶組顯著低于28日齡斷奶組(P<0.05)，而其他脂肪酸的含量2組之間均無(wú)顯著性差異(P>0.05)；在84日齡時(shí)，C16∶0、C17∶0iso、C17∶0、C18∶0、C18∶2n-6、C18∶3n-3及C22∶1的含量56日齡斷奶組顯著高于28日齡斷奶組(P<0.05)，而C15∶0、C20∶0的含量56日齡斷奶組顯著低于28日齡斷奶組(P<0.05)，其他脂肪酸的含量2組之間均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

日齡變化對(duì)羔羊背最長(zhǎng)肌脂肪酸組成也有很大的影響。對(duì)于28日齡斷奶組，56和70日齡的OFA含量顯著高于28和42日齡(P<0.05)；42、56和84日齡的MUFA含量顯著高于28和70日齡(P<0.05)；56日齡的PUFA含量顯著高于28、42和84日齡(P<0.05)；56日齡的SFA含量顯著高于28、42、70和84日齡(P<0.05)，28日齡的SFA含量顯著低于其他日齡(P<0.05)；PUFA/SFA在28日齡時(shí)顯著高于42、56、70和84日齡(P<0.05)，其他日齡之間均無(wú)顯著性差異(P>0.05)；n-6/n-3PUFA在70日齡時(shí)顯著高于其他日齡(P<0.05)，在28日齡時(shí)顯著低于其他日齡(P<0.05)。

對(duì)于56日齡斷奶組，84日齡的OFA含量顯著高于其他日齡(P<0.05)，而28和42日齡 的OFA含量顯著低于其他日齡(P<0.05)；70日齡的MUFA含量顯著高于28、42和56日齡(P<0.05)，而28和42日齡的MUFA含量顯著低于其他日齡(P<0.05)；70和84日齡的PUFA和SFA含量顯著高于其他日齡(P<0.05)，28和42日齡的PUFA含量顯著低于其他日齡(P<0.05)；PUFA/SFA在28日齡時(shí)顯著高于42、56、70和84日齡(P<0.05)，其他日齡之間均無(wú)顯著性差異(P>0.05)；n-6/n-3PUFA在28日齡時(shí)顯著低于42、56、70和84日齡(P<0.05)，其他日齡之間均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

表3　斷奶時(shí)間及日齡變化對(duì)羔羊背最長(zhǎng)肌脂肪酸組成的影響Table 3　Effects of weaner time and days of age on fatty acid composition of longissimus of lambs　g/kg

續(xù)表4項(xiàng)目Items斷奶日齡組Weanerdaysofagegroup日齡Daysofage2842567084SEMC22∶1281.287b2.194a1.918ab1.671ab1.655ab561.287c1.239c*1.623bc2.956a*2.125b*0.089C20∶5n-3280.727b1.240a1.084ab0.945ab0.936ab560.727c0.700c*0.917bc1.671a*1.201b0.05OFA280.077c0.771b1.396a1.163a0.948ab560.077d0.173c*0.907b0.924b1.799a0.024MUFA2837.155c50.047a57.347a43.011bc57.644a5637.155c30.094c*50.783b126.242a*82.949ab*0.653PUFA282.730b3.414b6.626a4.363ab4.080b562.730c2.741c4.233b8.135a*7.041a*0.021SFA283.091c11.051b18.194a12.654b11.977b563.091c8.576bc13.664b24.416a*26.921a*0.241PUFA/SFA280.883a0.309b0.364b0.345b0.334b560.883a0.320b0.310b0.333b0.262b0.002n-6PUFA280.351c1.621b3.011a2.294a1.960b560.351c1.216b1.978b*3.892a*4.165a*0.013n-3PUFA281.978b1.619b3.102a1.145b1.885b561.978b0.735c*1.854b*3.749a*2.550ab*0.241n-6/n-3PUFA280.177c1.001b0.971b2.003a1.040b560.177b1.654a1.072a1.038a*1.633a0.001

OFA：奇數(shù)碳原子脂肪酸，為C15∶0、C17∶0iso、C17∶0anteiso、C17∶0與C17∶1之和。MUFA：?jiǎn)尾伙柡椭舅?，為C17∶1、C18∶1t11、C18∶1c9、C20∶1與C22∶1之和。PUFA：多不飽和脂肪酸，為C18∶2n-6、C18∶3n-6、C20∶3與C20∶5n-3之和。SFA：飽和脂肪酸，為C8∶0、C10∶0、C12∶0、C14∶0、C15∶0、C16∶0anteiso、C16∶0、C17∶0iso、C17∶0anteiso、C17∶0、C18∶0與C20∶0之和。n-6PUFA：n-6多不飽和脂肪酸，為C18∶2n-6與C18∶3n-6之和。n-3PUFA：n-3多不飽和脂肪酸，為C18∶3n-3與C20∶5n-3之和。

OFA: odd number carbon atom fatty acid, the sum of C15∶0, C17∶0iso, C17∶0anteiso, C17∶0 and C17∶1. MUFA: monounsaturated fatty acid, the sum of C17∶1, C18∶1t11, C18∶1c9, C20∶1 and C22∶1. PUFA： polyunsaturated fatty acid， the sum of C18∶2n-6, C18∶3n-6, C20∶3 and C20∶5n-3. SFA： saturated fatty acid， the sum of C8∶0, C10∶0, C12∶0, C14∶0, C15∶0, C16∶0anteiso, C16∶0, C17∶0iso, C17∶0anteiso, C17∶0, C18∶0 and C20∶0. n-6PUFA： n-6 polyunsaturated fatty acid， the sum of C18∶2n-6 and C18∶3n-6. n-3PUFA： n-3 polyunsaturated fatty acid， the sum of C18∶3n-3 and C20∶5n-3.

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)，同列數(shù)據(jù)標(biāo)注*表示差異顯著(P<0.05)。

Values in the same row with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), and values in the same column with * mean significant difference (P<0.05).

2.2斷奶時(shí)間及日齡變化對(duì)羔羊瘤胃中氫化菌含量的影響

斷奶時(shí)間及日齡變化對(duì)羔羊瘤胃中溶纖維丁酸弧菌和蛋白溶解梭菌數(shù)量的影響分別見(jiàn)圖1與圖2。70日齡時(shí)，28日齡斷奶組的溶纖維丁酸弧菌含量顯著高于56日齡斷奶組(P<0.05)；在其他日齡2組之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。而對(duì)于蛋白溶解梭菌的含量，2組之間在所有日齡都無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

隨著日齡的變化瘤胃內(nèi)溶纖維丁酸弧菌和蛋白溶解梭菌的含量也產(chǎn)生了變化。對(duì)于28日齡斷奶組，隨著日齡增加，瘤胃內(nèi)2種氫化菌的數(shù)量都沒(méi)有出現(xiàn)顯著性變化(P>0.05)，但溶纖維丁酸弧菌的含量在42日齡達(dá)到最高，而蛋白溶解梭菌的含量在56日齡達(dá)到最高。對(duì)于56日齡斷奶組，隨著日齡增加，蛋白溶解梭菌的含量無(wú)顯著變化(P>0.05)，并在56日齡時(shí)其含量達(dá)到最高；但溶纖維丁酸弧菌的含量在42日齡時(shí)顯著高于70和84日齡(P<0.05)，其他日齡之間均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

同組數(shù)據(jù)標(biāo)注不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)，同一日齡數(shù)據(jù)標(biāo)注*表示差異顯著(P<0.05)。下圖同。

Values of the same group with different small letters mean significant difference (P<0.05), and values of the days of age with * mean significant difference (P<0.05). The same as below.

圖1斷奶時(shí)間及日齡變化對(duì)羔羊瘤胃中溶纖維丁酸弧菌含量的影響

Fig.1Effects of weaner time and days of age onButyrivibriofibrisolvenscontent in

rumen of lambs

圖2　斷奶時(shí)間及日齡變化對(duì)羔羊瘤胃中 溶纖維丁酸弧菌含量的影響Fig.2　Effects of weaner time and days of age onClostridium proteoclasticum content in rumen of lambs

3討論

3.1營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)各養(yǎng)分采食量

在本課題組的另一項(xiàng)研究中，對(duì)同等條件下羔羊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)采食量進(jìn)行了分析，由于羔羊隨母羊群飼，養(yǎng)分采食量數(shù)據(jù)未進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。在1～28日齡時(shí)，28日齡斷奶組和56日齡斷奶組羔羊干物質(zhì)采食量不高且接近(36.88 g/d vs. 40.01 g/d)，在29～70日齡時(shí)28日齡斷奶組采食量(205.05～643.62 g/d)高于56日齡斷奶組(152.59～569.03 g/d)，在71～84日齡時(shí)28日齡斷奶組采食量低于28日齡斷奶組(1 008.33 g/d vs. 1 156.41 g/d)[18]。

3.2斷奶時(shí)間與日齡變化對(duì)羔羊背最長(zhǎng)肌脂肪酸組成的影響

提高羔羊肉品質(zhì)的目標(biāo)是提高不飽和脂肪酸(UFA)并降低SFA在總脂肪酸中的比例。在本研究中，28日齡斷奶組UFA在總脂肪酸中的比例高于56日齡斷奶組。柴建民等[14]對(duì)比了羔羊30和60日齡斷奶效果，90日齡屠宰后發(fā)現(xiàn)30日齡斷奶組肌肉中UFA含量高于60日齡斷奶組，這一點(diǎn)與我們的研究結(jié)果一致。出現(xiàn)這種結(jié)果可能是由于28日齡斷奶組斷奶時(shí)間早使得羔羊采食大量的固體料，而早期補(bǔ)飼固體料可加快瘤胃內(nèi)微生物區(qū)系定植的進(jìn)程[5]，因此28日齡斷奶組瘤胃內(nèi)微生物區(qū)系必然比56日齡斷奶組建立時(shí)間早，而幼齡反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)微生物區(qū)系建立時(shí)間越早動(dòng)物肌肉中UFA的比例就越高[14]。28日齡斷奶組PUFA/SFA與56日齡斷奶組在各個(gè)日齡都無(wú)顯著性差異，這說(shuō)明斷奶時(shí)間對(duì)PUFA/SFA無(wú)影響。56日齡斷奶組在70日齡時(shí)n-6/n-3PUFA顯著低于28日齡斷奶組，并且均小于5。Enser等[15]研究發(fā)現(xiàn)膳食中n-6/n-3PUFA小于5能夠預(yù)防某些癌癥的發(fā)生。本研究還顯示，在84日齡時(shí)56日齡斷奶組C16∶0、C17∶0iso、C17∶0、C18∶0、C18∶2n-6、C18∶3n-3及C22∶1含量比28日齡斷奶組分別高出138.83%、125.00%、127.71%、126.25%、144.59%、42.15%和28.39%。范志影[16]在研究不同能量水平的代乳粉對(duì)羔羊肉品質(zhì)的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，高能組羔羊肌肉中UFA在總脂肪酸中的比例高于低能組。羔羊斷奶時(shí)間的不同直接影響羔羊攝入的營(yíng)養(yǎng)成分組成，尤其是能量水平。能量水平作為羔羊早期生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中極為重要的影響因素，其對(duì)羔羊肌肉中脂肪酸的發(fā)育具有重要的作用。本試驗(yàn)中，28日齡斷奶組斷奶后攝入固體料的能量水平(3.13 MJ/d)高于56日齡斷奶組(2.32 MJ/d)[18]，這一點(diǎn)我們與范志影[16]的研究結(jié)果一致。另外，飼糧中的蛋白質(zhì)水平和來(lái)源以及粗精比也可以通過(guò)影響反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)微生物區(qū)系來(lái)改變動(dòng)物肌肉中脂肪酸的組成[14]。Hadjipanayiotou等[17]研究了改變羔羊飼糧中蛋白質(zhì)的水平對(duì)肌肉中脂肪酸的組成的影響，發(fā)現(xiàn)高蛋白質(zhì)組中MUFA和PUFA的含量高于低蛋白組。本研究中，28日齡斷奶組在斷奶后42日齡肌肉中MUFA和PUFA的含量高于56日齡斷奶組，而在42日齡時(shí)28日齡斷奶組飼糧的粗蛋白質(zhì)水平(42.06 g/d)高于56日齡斷奶組(31.26 g/d)[18]，這一點(diǎn)與Hadjipanayiotou等[17]的研究結(jié)果一致。Demirel等[10]研究表明，低精料組綿羊肌肉中PUFA在總脂肪酸中的比例高于高精料組，低精料組SFA在總脂肪酸中的比例低于高精料組。在本試驗(yàn)中羔羊斷奶后飼糧立即由液體乳和開(kāi)食料變?yōu)槿块_(kāi)食料，羔羊飼糧中蛋白質(zhì)來(lái)源由乳源蛋白質(zhì)和植物性蛋白質(zhì)全部轉(zhuǎn)化為植物性蛋白質(zhì)，并且蛋白質(zhì)水平也發(fā)生了改變，這必然會(huì)引起瘤胃內(nèi)微生物區(qū)系的變化。而瘤胃內(nèi)微生物，尤其是氫化菌，可直接改變瘤胃內(nèi)UFA氫化的途徑，從而使反芻動(dòng)物肌肉中脂肪酸的組成發(fā)生改變[19]。

在本試驗(yàn)中，隨著日齡的變化肌肉中脂肪酸的組成也產(chǎn)生了改變。李維紅等[20]研究結(jié)果表明，日齡增長(zhǎng)會(huì)使動(dòng)物肌肉中脂肪酸含量升高，脂肪酸的種類(lèi)增多。在本研究中，C15∶0、C17∶0iso和C17∶0在28日齡時(shí)羔羊肌肉中均沒(méi)出現(xiàn)。對(duì)于28日齡斷奶組，C15∶0、C17∶0iso和C17∶0在42日齡時(shí)羔羊肌肉中開(kāi)始出現(xiàn)；而對(duì)于56日齡斷奶組，C17∶0iso和C17∶0直到56日齡時(shí)羔羊肌肉中才檢測(cè)到。隨著日齡的增長(zhǎng)，28日齡斷奶組和56日齡斷奶組羔羊肌肉中脂肪酸種類(lèi)逐漸增多，這一點(diǎn)與李維紅等[20]的結(jié)果一致。反芻動(dòng)物肌肉中含有奇數(shù)和支鏈脂肪酸(OBCFA)，而單胃動(dòng)物肌肉中不含有，這與瘤胃中的微生物是密切相關(guān)的。瘤胃纖維分解菌富含支鏈脂肪酸(如C15∶0iso和C17∶0iso等)，而淀粉分解菌含有豐富的奇數(shù)碳支鏈脂肪酸(如C15∶0和C17∶0等)[21]。這可能是由于28日齡斷奶組斷奶時(shí)間早導(dǎo)致瘤胃內(nèi)與肌肉奇數(shù)和支鏈脂肪酸相關(guān)的微生物出現(xiàn)時(shí)間比56日齡斷奶組早，所以才會(huì)出現(xiàn)28日齡斷奶組奇數(shù)和支鏈脂肪酸在肌肉中出現(xiàn)的時(shí)間比56日齡斷奶組早的結(jié)果。另外本研究結(jié)果顯示，在28日齡斷奶組中，84日齡時(shí)羔羊肌肉中MUFA、PUFA和SFA的含量與28日齡相比分別提高了55.14%、49.45%和287.48%；在56日齡斷奶組中，84日齡時(shí)羔羊肌肉中MUFA、PUFA和SFA的含量與28日齡相比分別提高了123.25%、157.91%和770.95%。這與李維紅等[20]研究的隨著日齡增長(zhǎng)脂肪酸含量升高的結(jié)果一致[19]。出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能是隨著日齡的增長(zhǎng)羔羊肌肉中脂肪酸的沉積量逐漸增多，導(dǎo)致羔羊肌肉中脂肪酸含量升高。羔羊在56日齡斷奶更利于肌肉中脂肪酸的沉積，提示隨著羔羊日齡增長(zhǎng)合理地調(diào)控動(dòng)物的飼糧營(yíng)養(yǎng)組成變得尤其重要

3.3斷奶時(shí)間與日齡變化對(duì)羔羊瘤胃內(nèi)氫化菌數(shù)量的影響

本試驗(yàn)中，我們得出了斷奶時(shí)間的不同及日齡的變化對(duì)蛋白溶解梭菌的數(shù)量無(wú)顯著性影響，但是在70日齡時(shí)28日齡斷奶組羔羊瘤胃內(nèi)溶纖維丁酸弧菌的數(shù)量顯著高于56日齡斷奶組，另外56日齡斷奶組日齡的變化也引起了瘤胃內(nèi)溶纖維丁酸弧菌的數(shù)量差異。趙天章[19]的研究中觀(guān)測(cè)到綿羊瘤胃內(nèi)蛋白溶解梭菌的相對(duì)數(shù)量在不同處理間的變化幅度很小，這與我們研究所得出的蛋白溶解梭菌未受到斷奶時(shí)間和日齡變化顯著影響的結(jié)果一致。Jami[11]等通過(guò)qRT-PCR的方法檢測(cè)犢牛從出生到成年瘤胃內(nèi)細(xì)菌數(shù)量的變化時(shí)，發(fā)現(xiàn)犢牛斷奶后瘤胃內(nèi)溶纖維丁酸弧菌的數(shù)量有所下降。56日齡斷奶組在斷奶后采食量升高(由333.83 g/d升高為569.03 g/d)[18]，28日齡斷奶組與56日齡斷奶組溶纖維丁酸弧菌在70日齡所產(chǎn)生的差異可能是由于采食量的升高導(dǎo)致瘤胃內(nèi)pH降低，不利于溶纖維丁酸弧菌生長(zhǎng)。

斷奶對(duì)瘤胃中微生物區(qū)系具有很大的影響[22]，另外，隨著日齡的變化飼糧所做出的改變以及采食量的變化也會(huì)引起瘤胃內(nèi)微生物區(qū)系的變化[23-24]。目前研究表明，對(duì)人類(lèi)身體有諸多益處的共軛亞油酸(CLA)及其前體物C18∶1t11主要是由飼糧中的PUFA在瘤胃內(nèi)不完全氫化產(chǎn)生的中間產(chǎn)物[24]。參與此途徑主要是2類(lèi)細(xì)菌，分為A類(lèi)菌和B類(lèi)菌。A類(lèi)菌主要是由溶纖維丁酸弧菌屬構(gòu)成，主要是將C18∶3n-3和C18∶2n-6氫化成C18∶1t11；B類(lèi)菌主要由蛋白溶解梭菌構(gòu)成，主要是負(fù)責(zé)將C18∶1t11和C18∶1c9最終氫化為C18∶0[26]。從本研究溶纖維丁酸弧菌氫化途徑的底物來(lái)看，在70日齡時(shí)28日齡斷奶組羔羊肌肉中C18∶3n-3和C18∶2n-6的含量均顯著低于56日齡斷奶組；從氫化菌qRT-PCR的結(jié)果看，28日齡斷奶組羔羊瘤胃中溶纖維丁酸弧菌的數(shù)量顯著高于56日齡斷奶組；從溶纖維丁酸弧菌氫化途徑的產(chǎn)物來(lái)看，28日齡斷奶組C18∶1t11的含量顯著高于56日齡斷奶組。這就說(shuō)明溶纖維丁酸弧菌通過(guò)其氫化途徑影響了羔羊肌肉中脂肪酸的組成。

4結(jié)論

① 56日齡斷奶組羔羊背最長(zhǎng)肌大部分脂肪酸的含量在84日齡時(shí)仍顯著高于28日齡斷奶組，因此相對(duì)于56日齡斷奶，28日齡斷奶不利于羔羊肌肉中大部分脂肪酸的沉積。

② 隨著日齡的增長(zhǎng)羔羊背最長(zhǎng)肌中大部分種類(lèi)的脂肪酸含量逐漸升高。

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(責(zé)任編輯王智航)

doi：10.3969/j.issn.1006-267x.2016.07.032

收稿日期：2016-01-12

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31260564)；公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專(zhuān)項(xiàng)經(jīng)費(fèi)(201503134)；高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專(zhuān)項(xiàng)科研基金(博導(dǎo)類(lèi))(20130211110033)

作者簡(jiǎn)介：張寧(1989—)，男，山東濰坊人，碩士研究生，從事動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)研究。E-mail: 499879262@qq.com *通信作者：李飛，副教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail: lfei@lzu.edu.cn

中圖分類(lèi)號(hào)：S826

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-267X(2016)07-2250-10

*Corresponding author, associate professor, E-mail: lfei@lzu.edu.cn

Effects of Weaner Time and Days of Age on Muscle Fatty Acid Composition ofHuLambs

ZHANG Ning1DENG Ying1LI Fei1*LI Fadi1,2LIU Ting3WANG Weimin3WENG Xiuxiu1

(1. State Key Laboratory of Grassland Ecosystem Agriculture, College of Pastoral Agriculture Science and Technology of Lanzhou University, Lanzhou 730020, China; 2. Engineering Laboratory of Sheep Breeding and Reproduction Biotechnology in Gansu Province, Minqin 733300, China; 3. College of Animal Science and Technology, Gansu Agriculture University, Lanzhou 730070, China)

Abstract:This experiment was conducted to study the effects of weaner time and days of age on muscle fatty acid composition of Hu lambs. Fifty four healthy new born male Hu lambs with similar body weight [(3.51±0.57) kg] were selected and reared to 28 days of age, six of them were slaughtered, and the rest 48 lambs were randomly divided into 28 and 56 days of age weaner groups with 24 lambs per group. Six lambs from each group were slaughtered at 42, 56, 70, 84 and 56 day of age, respectively. The fatty acid composition of longissimus and hydrogenated bacteria content in rumen were determined. The results showed as follows: 1) most muscle fatty acid contents in 56 days of age weaner group were higher than those in 28 days of age weaner group; with the increase of days of age, muscle fatty acid contents gradually increased and the species become more and more abundant. 2) At 70 days of age, Butyrivibrio fibrisolvens content in rumen in 28 days of age weaner group was significantly higher than that in 56 days of age weaner group (P<0.05); in 56 days of age weaner group, the content at 42 days of age was significantly higher than that at 70 and 84 days of age (P<0.05). Thus, compared with weaning at 28 days of age, weaning at 56 days of age is more helpful for fatty acid deposition in muscle of lambs.[Chinese Journal of Animal Nutrition, 2016, 28(7)：2250-2259]

Key words:weaning; days of age; fatty acid; hydrogenated bacteria