尿L-FABP與LAP對2型糖尿病腎病早期診斷的意義①

王瑾堃，劉中柱，劉艷姝，史為伍，王　振

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科，黑龍江 佳木斯 154003)

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尿L-FABP與LAP對2型糖尿病腎病早期診斷的意義①

王瑾堃，劉中柱，劉艷姝，史為伍，王振

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科，黑龍江 佳木斯 154003)

摘要:目的:探討測定尿肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(liver fatty acid binding proteins,L-FABP)和亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopeptidase，LAP)在糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)早期診斷的意義及對比性研究。方法:收集正常組、單純2型糖尿病組、早期2型糖尿病腎病組、臨床2型糖尿病腎病組各30例，通過ELISA檢測各組尿L-FABP、尿LAP的濃度，并觀察其與尿蛋白排泄率(urinary albumin excretion rates,UAER)相關(guān)性，比較兩個腎小管標記物在DN早期診斷的價值。結(jié)果:隨著DN腎臟損害程度的加重，尿L-FABP和尿LAP水平逐漸增高(P<0.05)；尿L-FABP與UAER呈正相關(guān)(r=0.64，P <0.01 )；尿LAP與UAER呈正相關(guān)(r=0.31，P <0.01 )。結(jié)論:尿L-FABP與尿LAP水平可反映DN早期腎臟損傷，尿L-FABP與尿LAP相比可較好的作為早期DN診斷指標，為指導(dǎo)臨床DN早期診斷提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞:肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白;亮氨酸氨基肽酶;尿蛋白排泄率;糖尿病腎病

糖尿病(diabetes mellitus，DM)，是臨床上一種常見的內(nèi)分泌代謝疾病，其中30%～40%的2型糖尿病將出現(xiàn)腎臟受累，即糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)，它是糖尿病中常見的慢性微血管并發(fā)癥之一，在西方國家，DN是終末期腎臟病(end stage renal disease，ESRD)的首位病因，也是我國繼慢性腎小球腎炎后的第二位病因。有關(guān)于DN的發(fā)生發(fā)展的機制尚未完全明確，目前公認的是由胰島素分泌或(和)作用缺陷，最終導(dǎo)致長期高血糖是DN發(fā)生的始動因素，同時眾多細胞因子激活、炎癥介質(zhì)釋放、遺傳因素的參與也在DN發(fā)病中發(fā)揮重要作用。在DN中對占腎臟體積90%的腎小管間質(zhì)病變研究甚少，事實上，國外有報道，在DN早期也會伴有腎小管損害[1]，DN早期病理特征之一是腎臟的肥大，在很大程度上與腎小管上皮細胞肥大有關(guān)，早期發(fā)生的這些結(jié)構(gòu)變化正是啟動和加劇腎小管間質(zhì)纖維化進展的一個關(guān)鍵因素，相關(guān)研究還表明腎小管間質(zhì)病變的嚴重程度將直接影響DN的預(yù)后。相關(guān)文獻報道，腎小管病變的標記物有兩類，一類為低分子蛋白，另一類是腎小管上皮細胞的各種酶(統(tǒng)稱為尿酶)。此次研究中的肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(liver fatty acid binding proteins,L-FABP)和亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopeptidase，LAP)分別是上述兩類的標記物的其中之一，故此本研究觀察DN不同時期二者的變化情況，對比探討其在DN早期的預(yù)警作用及臨床意義。

1資料與方法

1.1研究對象

選取2014-12～2015-12佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院住院收治2型糖尿病患者30例、早期2型糖尿病腎病30例、臨床2型糖尿病腎病30例，和同期本院體檢者30例作為正常對照粗。本研究設(shè)計得到生物倫理委員會批準。

1.2分組

正常對照組：同期本院體檢者。

單純2型糖尿病組：參照1999年WHO提出的糖尿病診斷及鑒別診斷標準:(1)空腹血糖(FPG)≥7.0mmol/L?？崭沟亩x是至少8h未攝入熱量;或(2)OGTT試驗中2h血糖≥11.1mmol/L。試驗應(yīng)按照世界衛(wèi)生組織(WHO)的標準進行，用含75g無水葡萄糖溶于水中作為糖負荷;或(3)有高血糖的癥狀或高血糖危象，隨機血糖≥11. 1mmol/L。如無高血糖癥狀，標準1～2應(yīng)該再次檢測證實。

早期2型糖尿病腎病：均符合世界衛(wèi)生組組1999年對2型糖尿病腎病的診斷標準，UAER30～300mg/24 h。臨床2型糖尿病腎?。壕鲜澜缧l(wèi)生組組1999年對2型糖尿病腎病的診斷標準，UAER>300 mg/24 h。因24h UAER受尿量收集準確與否、被檢查對象活動狀態(tài)、取標本標準與否等諸多因素影響，近年以檢測清晨第一次尿或隨意一次尿液中蛋白或白蛋白與肌酐比值(Urinary albumin to creatinine ratio,ACR)代替24h UAER[2]。

1.3排除標準

糖尿病病程較短，一般少于5年；短期內(nèi)腎功能迅速惡化；不伴視網(wǎng)膜病變；突然出現(xiàn)水腫和大量蛋白尿而腎功能正常；顯著腎小管功能減退；依從性較差的患者。

1.4相關(guān)指標收集及檢測

1.4.1樣品收集

受試者非高熱量飲食一天，女性(非月經(jīng)期)晨起清洗外陰后留取中段尿5mL，男性晨起留取中段尿5mL，用一次性潔凈塑料尿杯留取尿液，并同時抽取靜脈血5mL,1500r/min離心5min清液存于-80℃冰箱保存，集中使用前避免反復(fù)凍融。其他所需血液及尿液標本當日檢測。

1.4.2收集臨床資料

收集所有研究對象的相關(guān)臨床資料，包括基本資料(年齡、性別、體重指數(shù)等)，臨床檢查資料(空腹血糖、糖化血紅蛋白、胰島功能、尿微量白蛋白、尿肌酐等)。

1.4.3尿L-FABP和尿LAP檢測

將待檢測尿液標本從-80℃冰箱取出，并在室溫下解凍，將尿L-FABP和尿LAP試劑盒從4℃冰箱取出，在室溫下至少復(fù)溫半小時，通過ELISA檢測二者OD值，繪制出標準曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法

2結(jié)果

2.1各組間一般資料相關(guān)指標比較

結(jié)果顯示：本實驗納入健康患者30例作為正常對照組，90例2型糖尿病病例，各組間性別、年齡、體重指數(shù)無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

2.2各組間病程、空腹血糖、糖化血紅蛋白指標比較

結(jié)果顯示：早期2型DN組及 臨床2型DN組病程較DM對照組長(P<0.05)；早期2型DN組及臨床2型DN組之間差異不顯著(P>0.05)；糖尿病各組中空腹血糖、糖化血紅蛋白均明顯高于正常對照組(P<0.05)，糖尿病各組間差異不顯著(P>0.05)。

2.3各組尿L-FABP、LAP、ACR水平情況的檢測

結(jié)果顯示：單純2型DM組、早期2型DN組、臨床2型DN組患者中，尿L-FABP、LAP水平、ACR水平均明顯高于健康體檢者(P<0.05)；并且，隨著糖尿病腎病病情的加重，尿L-FABP、LAP、ACR水平逐漸升高(P<0.05)。見表1。

表1　各組尿L-FABP、LAP、ACR水平情況

注：*與正常對照組相比較P<0.05；△與單純DM組相比較P<0.05；#與早期DN組相比較P<0.05。

2.4相關(guān)性分析

尿L-FABP與UAER呈正相關(guān)(r=0.64，P<0.01 )；尿LAP與UAER呈正相關(guān)(r=0.31，P<0.01)。

3討論

目前，DM的高發(fā)病率已成為一個全球性的健康問題，其中，DN是DM患者常見并發(fā)癥之一。目前，我們在臨床上通過腎臟組織活檢來明確DN診斷仍然不能被絕大部分患者所接受，那么我們就需要在血、尿樣本中積極尋找相關(guān)生物學(xué)標記物，以便能夠早期的、無創(chuàng)傷性地確認腎損傷的存在并動態(tài)地觀察其變的進程。熟知的mALB雖然可以作為經(jīng)典的腎小球損傷生物學(xué)標記物來判斷用于早期DN診斷[3]，但是，其對于早期腎損傷的定位和程度，它并不具備敏感性，只是在腎小球濾過功能明顯減退之后才會出現(xiàn)蛋白尿，并且其受。近年來，許多相關(guān)研究表明，在DN早期階段腎小球、腎小管損傷是同時出現(xiàn)的，而且腎小管損傷的程度決定著腎纖維化的進展，因此，全面深入從腎小管相關(guān)標記物研究入手，可以更有助于對DN早期診斷。

腎小管標記物分為兩類，一類是為低分子蛋白，尿L-FABP作為其中一種分子蛋白，在脂類代謝相關(guān)疾病中參與脂肪酸的代謝調(diào)節(jié)，可作為高甘油三酯血癥、脂肪肝和消化道腫瘤等疾病的早期檢測及輔助診斷的一個重要指標。一些研究還表明，在急性腎損傷時，尿L-FABP表達水平也明顯增高[4]，而與DN十分相關(guān)的病理生理功能就是它可以作為一種內(nèi)源性抗氧化劑解毒物質(zhì)，在DN早期，長期高血糖可引發(fā)微小血管結(jié)構(gòu)的破壞，同時慢性高血糖造成許多種蛋白質(zhì)發(fā)生糖基化反應(yīng)，導(dǎo)致糖基化產(chǎn)物大量堆積，最終加重腎小管間質(zhì)缺氧，而L-FABP很可能作為一種有效的內(nèi)源性抗氧化劑在缺氧性疾病中發(fā)揮重要作用，所以當腎小管缺氧時可以上調(diào)腎臟L-FABP基因的表達水平, 并可增加源自近端小管的尿L-FABP的水平，故此，其有助于DN早期的發(fā)現(xiàn)，并可反映DN損害程度[5]。另一類是腎小管上皮細胞的各種酶(統(tǒng)稱為尿酶)，作為另一類監(jiān)測腎小管早期損傷的標記物，在相關(guān)文獻上報道過的尿酶有很多種類，其中應(yīng)用較多的為N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)和丙氨酸氨基肽酶(AAP)。目前對LAP的臨床應(yīng)用主要局限在肝膽系統(tǒng)疾病上，但測定尿中LAP用于腎臟損害的診斷，國內(nèi)僅見個別報道，研究表明其主要位于腎小管上皮細胞的溶酶體內(nèi)，在病理情況下，由于各種原因?qū)е履I實質(zhì)尤其是腎小管受損時，可引起大量LAP通過尿液排出，常在亞臨床期就可出現(xiàn)尿酶排泄增多[6]，故此可早期反映腎損害的性質(zhì)和程度。因此，測定尿中LAP，可以初步探討尿LAP對DN早期診斷臨床意義及應(yīng)用價值。

生活方式改善、有效控制血糖是DM和DN治療及基礎(chǔ)，但是若能做到早期發(fā)現(xiàn)DN，對延緩其進展是至關(guān)重要的，本實驗將對DN的側(cè)重點放在研究腎小管方面，檢測二者方法簡單，靈敏度較高，尿液收集簡便、無創(chuàng)、快速等優(yōu)點，有望成為DN早期發(fā)現(xiàn)的理想生物標記物。

參考文獻:

[1]Panduru N M, Forsblom C, Saraheimo M, et al. Urinary liver-type fatty acid-binding protein and progression of diabetic nephropathy in type 1 diabetes[J]. Diabetes Care, 2013, 36(7):2077-2083

[2]郭朝陽,麻春瑩,范學(xué)財,等.血清胱抑素C水平與糖尿病腎病的相關(guān)性研究[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2014,37(1):67

[3]秦松竹,楊玉芝,馮琨,等.腎小球濾過率聯(lián)合尿微量白蛋白與肌酐比值診斷糖尿病腎病的臨床意義[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2015,38(2):93-95

[4]李榮山. 急性腎損傷的生物標志物[J]. 中華腎病研究電子雜志,2013,3(2):134-137

[5]黃志勇,王利,汪慧,等.糖尿病腎病患者尿L-FABP的檢測及其臨床意義[J]. 武漢大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2015,32(2):266-269

[6]馬列. 血漿VEGF、MIC-1聯(lián)合尿LAP在2型糖尿病腎病檢測的臨床意義[J]. 糖尿病新世界,2015,17:111-113

基金項目：①佳木斯大學(xué)研究生科技創(chuàng)新項目，編號：LM2015-044。

作者簡介：王瑾堃(1988～)女，黑龍江伊春人，在讀碩士研究生。 通訊作者：劉中柱(1964～)男，黑龍江嫩江人，學(xué)士，教授，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:liuzhongzhu75@163.com。

中圖分類號：R587.1

文獻標識碼：B

文章編號：1008-0104(2016)04-0138-02

(收稿日期：2016-02-02)