不同劑量烏司他丁對大鼠膿毒血癥生存率的影響①

寧曉鵬，范奎新，李　根，金藝華，李艷美

(佳木斯大學附屬第一醫(yī)院急診科，黑龍江 佳木斯 154003)

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不同劑量烏司他丁對大鼠膿毒血癥生存率的影響①

寧曉鵬，范奎新，李根，金藝華，李艷美

(佳木斯大學附屬第一醫(yī)院急診科，黑龍江 佳木斯 154003)

摘要:目的：探索不同劑量烏司他丁對大鼠膿毒血癥模型生存率的影響。方法：隨機將180只大鼠分為3組(n=60)，隨機用3種不同創(chuàng)傷程度的盲腸穿孔法建立大鼠膿毒血癥模型，再隨機將每一組別平均分為3組(n=20)，分別給予基礎治療、小劑量烏司他丁、大劑量烏司他丁進行治療，比較不同建模方式組間大鼠機體炎癥反應水平以及不同劑量烏司他丁對其生存率的影響。結果：膿毒癥越嚴重，大鼠的各項炎癥反應標記物變化越劇烈；膿毒癥炎癥反應程度相同時，大劑量烏司他丁可以顯著改善膿毒癥大鼠的生存率(P<0.05)。結論：膿毒癥的炎癥反應標記物水平與其嚴重程度呈正相關，小劑量沒有明顯改善大鼠膿毒血癥的作用，大劑量烏司他丁能顯著改善大鼠膿毒癥模型的生存率。

關鍵詞:膿毒血癥;烏司他丁;大鼠;盲腸結扎穿孔

膿毒血癥是指由于細菌感染引起的全身炎癥反應綜合征，近年來，其發(fā)病率隨著臨床診療技術的提高而明顯升高，成為臨床危重癥患者死亡的主要原因之一[1,2]。本研究應用盲腸穿孔法制作大鼠膿毒癥模型，通過對盲腸進行創(chuàng)傷程度不同的穿孔處理，以建立炎癥反應程度不同的膿毒癥模型，同時測定大鼠血白細胞、IL-6、TNF-a含量，在常規(guī)給予抗生素治療的基礎上，分別給予不同計量的烏司他丁，觀察、比較大鼠膿毒癥建模方式與白細胞水平、IL-6、TNF-a水平以及治療生存率的關系，比較不同劑量烏司他丁大鼠膿毒癥的生存率的影響，以指導膿毒癥不同感染水平時，臨床治療決策的制定[3]。

1材料與方法

1.1材料

實驗動物：清潔級雄性SD大鼠180只。試驗器械：普通外科器械，眼科剪，4號尖刀片，自制引流片(長約1.0cm,寬約0.5cm),自制引流管(一次性輸液器管，長約1.0cm)。試劑：大鼠IL-6檢測試劑盒。藥物：青霉素購自佳大附屬第一醫(yī)院門診藥店，烏司他丁由佳大附屬第一醫(yī)院急診科提供。

1.2分組、處理方法

分組方法：隨機將180只大鼠分為3組(n=60)，分別為：A:不作處理,B:放置自制引流片,C:放置自制引流管，再隨機將每組60只大鼠平均分成3組(n=20)，分別給予等劑量生理鹽水、小劑量1萬U/kg烏司他丁、大劑量5萬U/kg烏司他丁進行治療。

處理方法：嚴格無菌條件下，麻醉大鼠,打開腹腔，顯露盲腸，用一次性尖刀片于盲腸上做一長約0.5cm的縱向切口，然后對盲腸切口進行處理，將盲腸放回原位、關腹[4,5]，當模型大鼠開始出現(xiàn)皮毛暗淡、無光澤、攝食、運動減少等膿毒癥臨床表現(xiàn)時，通過眼底靜脈叢采血測血白細胞、IL-6、TNF-a含量，同時給予腹腔注射青霉素8萬U/kg后，分別繼續(xù)給予不同治療,觀察、比較不同造模方式，膿毒癥大鼠血白細胞、IL-6、TNF-a水平的不同，以及比較不同劑量烏司他丁治療，對其生存率的影響。

模型死亡診斷標準：大鼠頸動脈搏動消失。

1.3統(tǒng)計學方法

2結果

2.1小劑量烏司他丁治療組生存率與基礎治療組生存率進行比較，沒有明顯改善(P>0.05),大劑量烏司他丁治療組與基礎治療組進行比較，其生存率明顯改善(P<0.05),見表1。

表1不同劑量烏司他丁治療，大鼠的生存數(shù)與總體生存率(n=60)

組別治療方式基礎治療組小劑量UTI治療組大劑量UTI治療組A3519B238C023總體生存率(%)8.316.7*50**

2.2當大鼠出現(xiàn)膿毒血癥臨床表現(xiàn)時，測量其炎癥介質白細胞、IL-6、TNF-a水平，B組與A組比較(P<0.05)、C組與B組比較(P<0.05)，大鼠炎癥介質水平明顯升高,見表2。

表2　各組大鼠血白細胞、IL-6、TNF-a檢測

3討論

膿毒血癥是指由于細菌感染引起的全身炎癥反應綜合征。人們對膿毒癥的認識由早先的認為單純的由感染引起到如今的全身炎癥反應過度失控，由此提出了現(xiàn)在普遍被學術屆認可的假說“代償性抗炎反應綜合征”，該假說認為：機體存在著以固有的促炎細胞因子為代表的促炎反應機制和以抗炎細胞因子為代表的抗炎反應機制。當機體處于正常狀態(tài)時，抗炎與促炎機制處于平衡狀態(tài)。當機體遭受應激時，往往會引發(fā)全身炎癥反應促使免疫細胞和炎癥細胞釋放促炎物質，而與此同時，全身抗炎反應系統(tǒng)也被啟動，促使機體大量分泌某些具有免疫負向調節(jié)作用的因子，從而保持機體的免疫平衡狀態(tài)。但是，當機體免疫調節(jié)能力降低或者應激狀態(tài)劇烈持續(xù)存在時，就會打破炎癥反應與免疫反應的平衡，就會出現(xiàn)全身免疫炎癥反應的紊亂，從而引起全身炎癥因子的大量無序釋放，進一步抑制全身免疫系統(tǒng)，導致機體免疫狀態(tài)的紊亂。其發(fā)病過程中，初期的感染因素往往是啟動因素，由此引起全身炎癥反應過度，導致炎癥因子的瀑布樣無序釋放往往是病情加重的直接因素，進而導致機體的免疫狀態(tài)進一步惡化。

在ICU住院患者中，由膿毒血癥引起的死亡病例約占所有ICU死亡病例的30%～70%。如此高的死亡率，預示著在膿毒血癥治療理念方面些許的進步就會挽救大量的患者生命。結合目前膿毒血癥治療的最新觀點認為膿毒癥的發(fā)病機制為全身炎癥反應失控，其治療核心及切入點就是及時有效的控制全身炎癥介質及細胞因子的無序生成和釋放，對處于免疫失控狀態(tài)的機體盡早將體內大量的無序釋放的炎癥介質中和或消除，盡快恢復機體免疫平衡狀態(tài)。最典型的就是IL-6、TNF-a等炎性介質，屬于早期內源性炎癥介質，主要損害血管內皮細胞，促進細胞內皮黏附因子的過早表達，其在炎癥早期發(fā)展加重過程中，還可刺激中性粒釋放細胞，通過促進其釋放多種蛋白酶和水解酶以及氧自由基，來損害組織細胞，具有強烈的加劇炎癥反應，進一步引起自身炎癥反應失控，這些炎癥介質水平的高低往往與膿毒癥預后及生存率成正相關，所以，通過早期清楚IL-6、TNF-a等炎性介質，可以明顯改善膿毒癥的預后及生存率。

烏司他丁是從男性成年尿液中提取的一種尿蛋白酶抑制劑，對機體過度釋放的炎性介質以及氧自由基有強大的清除與中和作用[6]。其作用的機制為：其有兩個功能活性部分，能結合多種與炎癥反應有關的酶，可以在炎癥反應過度時，抑制多余的炎癥反應酶類的火焰，從而降低炎癥反應水平，同時還可以清除大量無序釋放的氧自由基，進而保護和穩(wěn)定機體多種細胞以及細胞器的膜類，從而維持微循環(huán)和組織的良好灌注[7]。

盲腸結扎穿孔建立膿毒血癥模型是目前認為最能有效模擬臨床相關的膿毒癥模型的方法，可形象的模擬出臨床患者的內臟病理改變以及細菌移位引起的內源性多細菌感染。此法是通過人為造成大鼠體內劇烈的炎癥反應，引起全身過度的炎癥反應與免疫平衡失控，進而刺激機體內巨噬細胞及其他炎性細胞產生并釋放大量的炎性因子,以及大量的其他各種酶類和氧自由基，進而損傷細胞，引起發(fā)熱等膿毒血癥癥狀[8]。

本研究通過對不同感染程度的膿毒血癥大鼠應用不同濃度的烏司他丁進行治療，顯示出大劑量烏司他丁在治療膿毒癥方面獨特的優(yōu)勢。但是，由于樣本量比較小，烏司他丁在治療膿毒癥方面的療效尤待進一步的驗證。

參考文獻：

[1]王月華，李妍.膿毒血癥發(fā)病機制研究進展[J].Journal of Pathogen Biology,2010,5(4):299 -300, 303

[2]王 靜，李熙鴻.膿毒癥發(fā)病機制的研究進展[J].實用兒科臨床雜志,2012,27(10):786-789

[3]湯耀卿，李磊．膿毒癥動物模型制作方略及應用[J]．中華實驗外科志，2011,23(12)：1433-1434

[4]朱雪琦,劉清泉,姚詠明.膿毒癥動物模型制備方法的研究進展[J].中國危重急救醫(yī)學,2006,18(2):114-115

[5]侯志凌,唐慶喜,倪蕾.他汀類藥物降低膿毒癥患者死亡率的臨床研究[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學,2014，37(2):79-81

[6]黃愛萍.大劑量烏司他丁聯(lián)合沐舒坦對特重度燒傷患者早期肺功能的保護作用[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學,2015，38(01):35-36

[7]Wang DQ，Tian YC，Zhang SH，et al．Effects of Xue-Bi-Jing combined with forsythia suspense on the liver gene expression levels of rats with sepsis model [J]．中華勞動衛(wèi)生職業(yè)病雜志，2011，29(6)：417-420

作者簡介：①寧曉鵬(1987～)男，山西運城人，在讀碩士研究生。 通訊作者：李艷美(1964～)女，黑龍江佳木斯人，學士，主任醫(yī)師，碩士研究生導師。E-mail:2006jinyihua@163.com。

中圖分類號：R459.7

文獻標識碼：B

文章編號：1008-0104(2016)04-0132-02

(收稿日期：2015-12-18)