IL-8和NF-κB在人腦膠質(zhì)瘤中的表達①

劉文廣，張忠民，顧志成

(1.佳木斯大學附屬第一醫(yī)院神經(jīng)外科，黑龍江 佳木斯 154003；2.牡丹江醫(yī)學院紅旗醫(yī)院，黑龍江 牡丹江 157000)

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IL-8和NF-κB在人腦膠質(zhì)瘤中的表達①

劉文廣1，張忠民2，顧志成1

(1.佳木斯大學附屬第一醫(yī)院神經(jīng)外科，黑龍江 佳木斯 154003；2.牡丹江醫(yī)學院紅旗醫(yī)院，黑龍江 牡丹江 157000)

摘要：目的：探討IL-8、NF-κB在不同級別的人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達情況，探索IL-8、NF-κB在人腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用。方法：采用免疫組化檢測IL-8和NF-κB在15例正常腦組織中和66例不同級別的腦膠質(zhì)瘤中的的表達情況。結(jié)果：IL-8、NF-κB在人腦膠質(zhì)瘤中明顯表達。結(jié)論：IL-8和NF -κB與人腦膠質(zhì)瘤的惡性程度有關(guān)，隨著膠質(zhì)瘤的惡性程度增高，其表達水平也增高。

關(guān)鍵詞：IL-8;NF-κB;膠質(zhì)瘤

惡性膠質(zhì)瘤是原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最常見、死亡率最高的惡性腫瘤。即使在經(jīng)過放療、化療及手術(shù)治療后，病人的生存周期也一般在一年左右[1]。而產(chǎn)生這種結(jié)果的主要原因是惡性膠質(zhì)瘤本身具有極強的侵襲性，盡管在經(jīng)手術(shù)切除腫瘤之后，及時的配合各種放、化療等措施，但這些仍不足以完全清除癌細胞，即使殘存少量的癌細胞，仍可在短時間內(nèi)迅速引起膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā)進而導(dǎo)致患者死亡。膠質(zhì)瘤細胞侵襲、擴散的分子作用機制十分復(fù)雜，涉及多個信號通路的直接或間接參與[2]。越來越多的證據(jù)表明：膠質(zhì)瘤的侵襲性可能與免疫反應(yīng)相關(guān)的趨化因子密切相關(guān)，某些的可溶性因子在激活相關(guān)通路后也進一步促進膠質(zhì)瘤的進一步發(fā)展[3]。在本次實驗中，我們將檢測膠質(zhì)瘤中IL-8、NF-κB的表達情況及IL-8與NF-κB信號通路的激活在膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的關(guān)聯(lián)性。

1材料和方法

1.1實驗標本

實驗材料取自2009-01～2015-06佳木斯大學附屬第一醫(yī)院神經(jīng)外科手術(shù)切除的66例腦膠質(zhì)瘤標本。這些標本按WHO腫瘤分類標準，分為低度惡性組(Ⅰ～Ⅱ級)32例和高度惡性組(Ⅲ～Ⅳ級)34例。15例正常腦組織取自高血壓性腦出血、顱腦外傷中需要顱內(nèi)減壓的患者，正常腦組織組被設(shè)為對照組。

1.2實驗方法

采用免疫組化SP法，具體步驟按照試劑盒說明書進行。工作濃度為1:100,所有標本離體12h之內(nèi)用10%福爾馬林溶液浸泡。常規(guī)石蠟包埋，做4μm厚的石蠟切片，陰性對照以PBS緩沖液代替一抗。

1.3陽性結(jié)果的判定

NF-κBp65和IL-8以細胞核和(或)細胞質(zhì)中被染成黃、棕褐色的細胞為陽性細胞。在每張切片中選取10個高倍鏡(×400)視野，每個視野下計數(shù)100個細胞。統(tǒng)計每張切片的陽性細胞占膠質(zhì)瘤細胞總數(shù)的百分比，若陽性細胞占全部細胞的百分比≥10%，則為陽性。反之則為陰性。

1.4統(tǒng)計學方法

采用SPSS20.0軟件對低度惡性組、高度惡性組與對照組各組組間進行χ2檢驗統(tǒng)計，以P<0.05為差異顯著，具有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

NF-κBp65與IL-8在正常腦組織中基本不表達。NF-κBp65在膠質(zhì)瘤組織中的陽性表達率為53.0%(35/66),見圖1，其中低度惡性組(Ⅰ～Ⅱ級)中NF-κBp65的陽性表達率為37.5%(12/32)。NF-κBp65在對照組、低度惡性組與高度惡性組的組間表達差異顯著，具有統(tǒng)計學意義,見表1。膠質(zhì)瘤組織中IL-8的陽性表達率為45.5%(30/66),見圖2。低度惡性組(Ⅰ～Ⅱ級)中IL-8的陽性表達率為31.3%(10/32)，高度惡性組(Ⅲ～Ⅳ級)中IL-8的陽性表達率為58.8%(20/34)。對照組與高、低惡性組的IL-8表達組間差異顯著,見表2，具有統(tǒng)計學意義。此外，NF-κBp65和IL-8在腦膠質(zhì)中的表達呈正相關(guān)性(r=0.371，P<0.05)，見表3。

表1　NF-κBp65的表達

注：1：對照組與低度惡性組的比較。2：低度惡性組與高度惡性組的比較。3: 對照組與高度惡性組的比較。

表2　IL-8的表達

注：1：對照組與低度惡性組的比較。2：低度惡性組與高度惡性組的比較。3: 對照組與高度惡性組的比較。

表3　NF-κBp65和IL-8表達的相關(guān)性

注：r=0.371，P<0.05。

圖1NF-κBp65在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(×400)

圖2　IL-8在人腦膠質(zhì)瘤中表達(×400)

3討論

核轉(zhuǎn)錄因子-κB作為炎癥反應(yīng)中重要的轉(zhuǎn)錄因子，不僅參與體內(nèi)各種炎性反應(yīng)的發(fā)生，而且還在腫瘤的發(fā)生及耐藥性的產(chǎn)生中發(fā)揮重大作用，腫瘤中耐藥機制的產(chǎn)生與NF-κB信號通路的持續(xù)性激活密切相關(guān)[4]。研究表明：NF-κB的持續(xù)激活在腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重大作用[5]。作為NF-κB信號通路中最重要的調(diào)節(jié)因子之一，IL-8最初被認為是免疫相關(guān)細胞的重要趨化因子，但后來的研究表明，IL-8不只是局限于炎癥反應(yīng)中，其在某些腫瘤組織中也可大量表達。雖然，目前我們還不

太明確IL-8在腫瘤中的具體作用機制，但IL-8在調(diào)節(jié)腫瘤細胞的血管生成、增殖擴散及轉(zhuǎn)移侵襲中發(fā)揮重大作用[6]。結(jié)合本次實驗，我們不難發(fā)現(xiàn)NF-κB在正常腦組織中不表達而在膠質(zhì)瘤中卻大量表達，且隨著膠質(zhì)瘤惡性程度等級的增高表達增加。通常情況下，惡性程度較高的膠質(zhì)瘤侵襲與轉(zhuǎn)移較強，此類患者經(jīng)治療后也易復(fù)發(fā)且預(yù)后和生存較差。這說明NF-κB信號通路的異常激活與膠質(zhì)瘤的侵襲性、惡性程度及預(yù)后生存密切相關(guān)。此外，IL-8在正常組織中也不表達但表達于膠質(zhì)瘤中，而IL-8在膠質(zhì)瘤中的表達也隨膠質(zhì)瘤惡性程度的增加而增加，且與NF-κBp65在各級膠質(zhì)瘤中的表達正相關(guān)性，這提示IL-8可能是NF-κB信號通路在調(diào)控膠質(zhì)瘤發(fā)生、演變過程中重要的調(diào)節(jié)因子。IL-8與NF-κB可能共同協(xié)同促進參與膠質(zhì)瘤的發(fā)生，發(fā)展過程。這些有可能為膠質(zhì)瘤未來的治療及預(yù)后評估提供新的理論依據(jù)。

參考文獻：

[1]Elizabeth A Maher, Frank B Furnari, Robert M Bachoo, et al. Malignant glioma: genetics and biology of a grave matter[J]. Genes Dev, 2001, 15(11):1311-1333

[2]Marc Mareel, Maria J Oliveira, Indira Madani. Cancer invasion and metastasis: interacting ecosystems[J]. Virchows Arch，2009, 454(6):599-622

[3]Erwin Van Meir, Miroslav Ceska, Fritz Effenberger,et al.Interleukin-8 is produced in neoplastic and infectious diseases of the human central nervous system[J].Cancer Res，1992, 52(16):4297-305

[4]Bonizzi G, Karin M. The two NF-kappaB activation pathways and their role in innate and adaptive immunity[J]. Trends Immunol，2004, 25(6):280-288

[5]韓耀偉, 佟麗波, 于繁榮. Fascin蛋白及NF-kB在宮頸鱗癌中的表達及其意義[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學，2010, 33(4):6-7

[6]Koch AE, Polverini PJ, Kunkel SL, et al. Interleukin-8 as a macrophage-derived mediator of angiogenesis[J]. Science, 1992, 258(5089):1798-801

基金項目：①佳木斯大學科學技術(shù)校級面上項目，編號：S2013-042。

作者簡介：劉文廣(1988～)男，山東棗莊人，在讀碩士研究生。 通訊作者：顧志成(1965～)男,黑龍江樺南人,學士,主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:gzc2008628@163.com。

中圖分類號：R739.41

文獻標識碼：A

文章編號：1008-0104(2016)04-0034-02

(收稿日期：2016-03-28)