一起豬偽狂犬與豬圓環(huán)病毒病混合感染的診斷

郝志香，李　樂(lè)，馬　健，魯　毅（.河南省新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心；.河南省新鄉(xiāng)市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 新鄉(xiāng) 453000）

一起豬偽狂犬與豬圓環(huán)病毒病混合感染的診斷

郝志香1，李樂(lè)2，馬健1，魯毅1
（1.河南省新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心；2.河南省新鄉(xiāng)市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 新鄉(xiāng) 453000）

摘要：2015年9月新鄉(xiāng)市某豬場(chǎng)發(fā)生一起豬死亡率的40％的傳染病，病豬精神不振，食欲減退，體溫升高至40℃，站立不起，皮膚有圓形壞死灶，抗生素治療無(wú)效，發(fā)病率100％。通過(guò)流行病學(xué)調(diào)查，并對(duì)其進(jìn)行病理剖檢、實(shí)驗(yàn)室診斷，確診為該豬場(chǎng)育肥豬是由豬偽狂犬病毒和豬圓環(huán)病毒2型混合感染引起的發(fā)病和死亡。

關(guān)鍵詞：豬偽狂犬病；豬圓環(huán)病毒??；混合感染

豬偽狂犬病是由豬偽狂犬病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的豬的急性傳染病。該病在豬呈爆發(fā)性流行。引起妊娠母豬流產(chǎn)、死胎，公豬不育，新生仔豬的大量死亡，育肥豬呼吸困難、生長(zhǎng)停滯等，是危害全球養(yǎng)豬業(yè)的重大傳染病之一。豬圓環(huán)病毒病（porcine circovirus diseases，PCVD)是由豬圓環(huán)病毒2型引起的一種傳染病，是斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、豬皮炎腎病綜合征（PNDS）、豬呼吸系統(tǒng)混合疾病、繁殖障礙綜合征等與PCV-2相關(guān)的疾病統(tǒng)稱(chēng)。PCV-2及其相關(guān)的豬病，死亡率10％～30％不等，較嚴(yán)重的豬場(chǎng)在暴發(fā)本病時(shí)死淘率高達(dá)40％，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。PCV-2感染可引起豬的免疫抑制，從而使機(jī)體更易感染其他病原，這也是圓環(huán)病毒與豬的許多疾病混合感染有關(guān)的原因。

1　流行病學(xué)調(diào)查

該豬場(chǎng)共養(yǎng)殖有100日齡生豬200頭，起初個(gè)別生豬發(fā)病，一周后陸續(xù)感染，精神不振，食欲減退，體溫升高至40℃，呼吸急促，站立不起，皮膚有圓形壞死灶，抗生素治療無(wú)效，發(fā)病率100％，死亡率40％。初步懷疑感染病毒。

2　病理變化

剖解病死仔豬發(fā)現(xiàn)，關(guān)節(jié)水腫有積液，胸腹腔有積液和粘連，全身淋巴結(jié)周邊有出血且腫大，肺部和腎臟有出血點(diǎn)和黃褐色斑點(diǎn)，肝、脾腫大，有灰白色壞死灶，肌肉褪色，盲腸和結(jié)腸部位淤血并有出血點(diǎn)。

3　實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1樣品采集與處理

采集解剖死亡豬后的組織（脾、肺、肝、腎、扁桃體及腹股溝淋巴結(jié)）樣品2份，加入少許PBS液稀釋研磨，在-70℃反復(fù)凍融3次后，4℃下12 000 rpm離心5 min，取上清置-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

3.2核酸提取

核酸提取采用RNA/DAN純化試劑盒（購(gòu)自世紀(jì)元亨），具體操作方法如下：取已處理樣品，加入裂解液600μl,充分顛倒混勻，室溫靜置3～5 min；將液體吸入吸附柱中，13 000 rpm離心30 s；棄去收集管中的液體，加入600μl洗液，13 000 rpm離心30 s，重復(fù)一次；棄去收集管中液體，13 000 rpm空柱2 min，以除去殘留液；將吸附柱移入新的1.5 ml離心管中，向中央加入洗脫液25～50μl，室溫靜置1 min，13 000 rpm離心30 s，離心管中的液體即為病毒核酸模板。

3.3豬偽狂犬病毒熒光PCR鑒定

豬偽狂犬病毒（PRV）熒光PCR鑒定采用豬偽狂犬病毒（PRV）核酸擴(kuò)增試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?，?gòu)自廣州維伯鑫生物科技有限公司，檢測(cè)方法及判定標(biāo)準(zhǔn)按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。對(duì)兩份病料提取的模板及陽(yáng)性質(zhì)控和陰性質(zhì)控進(jìn)行熒光PCR擴(kuò)增后，得到的結(jié)果見(jiàn)圖1。根據(jù)結(jié)果可以看出，兩份病料均為豬偽狂犬病毒陽(yáng)性。

圖1臨床組織樣品熒光PCR鑒定PRV結(jié)果

3.4豬圓環(huán)病毒2型熒光PCR鑒定

豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)熒光PCR鑒定采用豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?，購(gòu)自廣州維伯鑫生物科技有限公司，檢測(cè)方法及判定標(biāo)準(zhǔn)按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。對(duì)兩份病料提取的模板及陽(yáng)性質(zhì)控和陰性質(zhì)控進(jìn)行熒光PCR擴(kuò)增后，得到的結(jié)果見(jiàn)圖2。根據(jù)結(jié)果可以看出，2份病料均為豬圓環(huán)病毒2型陽(yáng)性。

4　結(jié)果與討論

根據(jù)實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果，可以確診該豬場(chǎng)育肥豬是由豬偽狂犬病毒和豬圓環(huán)病毒2型混合感染引起的發(fā)病和死亡。

該豬場(chǎng)發(fā)生的PRV與PCV-2混合感染，在很大程度上與PCV-2感染引起的免疫抑制有關(guān)。PCV-2具有免疫抑制特性，因?yàn)镻CV-2感染豬的淋巴器官中T、B淋巴細(xì)胞數(shù)量減少，淋巴組織中巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，外周血和淋巴組織中的巨噬細(xì)胞單核細(xì)胞數(shù)量升高，導(dǎo)致PCV-2感染豬群免疫功能下降，使豬群對(duì)其他病原體的抵抗力大大降低，從而使機(jī)體更易感染其他病原，引起混合感染。

從該豬場(chǎng)的兩頭病死豬中均檢出PRV和PCV-2，并且引起免疫抑制的疾病越來(lái)越多，可以推斷，目前豬場(chǎng)多重感染或者混合感染已經(jīng)成為發(fā)病的規(guī)律，也導(dǎo)致豬群發(fā)病后的臨床癥狀更加復(fù)雜，病情更加嚴(yán)重，確診更加困難，防治效果差，在以后的疾病預(yù)防和診斷過(guò)程中應(yīng)該引起重視。

圖2臨床組織樣品熒光PCR鑒定PCV-2結(jié)果

（編輯：高真貞）

中圖分類(lèi)號(hào)：S858.28

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1006-799X(2016)04-0050-01

作者簡(jiǎn)介：郝志香（1986-），女，河南輝縣人，助理獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疫病防控工作。