不同肝臟疾病血清GP73、AFP-L3、AFP及AFU水平的表達(dá)

滿冬亮　王齊暉

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不同肝臟疾病血清GP73、AFP-L3、AFP及AFU水平的表達(dá)

滿冬亮王齊暉

110001沈陽(yáng)中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科

【摘要】目的研究不同肝臟疾病血清高爾基蛋白73(GP73)、甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)、甲胎蛋白(AFP)及α-L-巖藻糖苷酶(AFU)表達(dá)水平及臨床意義。方法選取我院于2014年1月至2015年11月收治的61例急性肝炎組，89例慢性肝炎組，26例肝硬化組，32例肝癌組及同期進(jìn)行體檢的60名健康對(duì)照組為研究對(duì)象，對(duì)5組分別進(jìn)行單項(xiàng)血清GP73、AFP-L3、AFP及AFU檢測(cè)和聯(lián)合檢測(cè)，并使用ROC曲線對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果肝癌組GP73、AFP-L3、AFP及AFU水平與其他肝臟疾病組和健康對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)；聯(lián)合檢測(cè)診斷的靈敏度、特異度比單項(xiàng)檢測(cè)都高，其中靈敏度達(dá)90.6%，特異度達(dá)89.0%。GP73、AFP-L3、AFP及AFU指標(biāo)的ROC曲線面積分別為0.811、0.774、0.643、0.609；3項(xiàng)聯(lián)合指標(biāo)的ROC曲線面積為0.957。結(jié)論GP73、AFP-L3、AFP及AFU在肝臟疾病發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用，聯(lián)合檢測(cè)區(qū)分肝癌與其他肝臟疾病價(jià)值顯著，能顯著提高診斷的靈敏度和精確度，ROC曲線評(píng)價(jià)能直觀呈現(xiàn)診斷結(jié)果。

【關(guān)鍵詞】肝臟疾??；GP73；AFP-L3；AFP；AFU

肝臟疾病包括肝炎、肝硬化、肝癌等，是臨床上常見(jiàn)的消化系統(tǒng)疾病之一。其中，肝癌在我國(guó)人群中的年發(fā)病率高達(dá)37.6/10萬(wàn)，且病死率較高，肝癌的病情潛伏期較長(zhǎng)，臨床發(fā)現(xiàn)后，有三分之二以上的患者屬于晚期。因此，做好早期診斷極為關(guān)鍵。目前，臨床上常用的診斷肝癌的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)有高爾基蛋白73(GP73)、甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)、甲胎蛋白(AFP)及α-L-巖藻糖苷酶(AFU)等，但是文獻(xiàn)報(bào)道[1-2]急慢性肝炎、肝硬化患者也會(huì)出現(xiàn)GP73等異常。本研究通過(guò)分析不同肝臟疾病患者血清GP73、AFP-L3、AFP及AFU表達(dá)水平，旨在為肝臟疾病診斷提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

資料和方法

一、一般資料

選取我院于2014年1月至2015年11月收治的61例急性肝炎患者(急性肝炎組)，89例慢性肝炎患者(慢性肝炎組)，26例肝硬化患者(肝硬化組)，32例肝癌患者(肝癌組)及同期進(jìn)行體檢的60名健康對(duì)照者(健康對(duì)照組)為研究對(duì)象。所有研究對(duì)象均在知情自愿情況下參與本次研究，排除妊娠期或者哺乳期婦女，健康對(duì)照組排除肝炎病毒攜帶者。急性肝炎組男性34例，女性27例，年齡31～72歲，平均年齡為(49.3±2.1)歲；慢性肝炎組男性48例，女性41例，年齡24～65歲，平均年齡為(48.2±2.0)歲；肝硬化組男性15例，女性11例，年齡26～66歲，平均年齡為(48.6±1.9)歲；肝癌組男性18例，女性14例，年齡31～76歲，平均(49.1±2.3)歲；健康對(duì)照組男性37例，女性23例，年齡29～68歲，平均(48.7±1.8)歲。5組研究對(duì)象基本資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

二、方法

參與研究的所有對(duì)象要在空腹12 h，采取3 mL靜脈血液，靜置30 min后，4℃ 3000 r/min離心后，分離血清標(biāo)本，-80℃保存。GP73采用酶聯(lián)免疫吸附法(酶標(biāo)儀購(gòu)自深圳雷杜醫(yī)療器械有限公司，試劑盒購(gòu)自于美國(guó)R&D公司)；AFP-L3采用親和吸附離心管法(親和吸附離心管購(gòu)自于北京熱景生物技術(shù)有限公司)；AFP采用化學(xué)發(fā)光法(德國(guó) Liaison 索林全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀，質(zhì)控品和配套試劑也采用該公司提供)；AFU采用MG-CNPF法(試劑盒購(gòu)自上海一研生物技術(shù)有限公司)。比較5組GP73、AFP-L3、AFP及AFU。

陽(yáng)性預(yù)測(cè)值上，GP73血清要高于106.5 ng/mL、AFP-L3血清要高于9.2%、AFP血清要高于9.6 ng/mL，AFU血清要高于23.5 U/mL。聯(lián)合檢測(cè)中陽(yáng)性預(yù)測(cè)值高于4項(xiàng)單測(cè)中的任何1項(xiàng)就表示檢測(cè)結(jié)果是陽(yáng)性。應(yīng)用ROC曲線評(píng)價(jià)GP73、AFP-L3、AFP及AFU聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肝癌診斷價(jià)值。診斷界點(diǎn)移動(dòng)后，能獲得更多的特異度和靈敏度，橫坐標(biāo)由特異度表示，縱坐標(biāo)由靈敏度表示，對(duì)各個(gè)點(diǎn)連接后繪制曲線，對(duì)曲線下的面積進(jìn)行計(jì)算，面積計(jì)算的結(jié)果與診斷價(jià)值成正相關(guān)，即面積越大，診斷價(jià)值越高。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

通過(guò)SPSS 19.0軟件實(shí)現(xiàn)了數(shù)據(jù)庫(kù)的錄入及統(tǒng)計(jì)分析，組間構(gòu)成比較用卡方檢驗(yàn)，組間療效比較用等級(jí)資料的秩和檢驗(yàn)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、5組的GP73、AFP-L3、AFP及AFU水平比較

檢測(cè)結(jié)果顯示，與健康對(duì)照組相比，肝臟疾病組GP73、AFP-L3、AFP及AFU水平均升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。肝癌組GP73、AFP-L3高于急性肝炎組、慢性肝炎組、肝硬化組，AFP高于急性肝炎組、慢性肝炎組，但是低于肝硬化組，AFU高于急性肝炎組、肝硬化組，但是低于慢性肝炎組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。肝硬化組GP73、AFP-L3、AFP高于急性肝炎組、慢性肝炎組，AFU水平低于急性肝炎組、慢性肝炎組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。除AFP-L3外，慢性肝炎組GP73、AFP及AFU水平均顯著高于急性肝炎組(P均<0.05)。見(jiàn)表1。

二、血清單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)和聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肝癌的診斷學(xué)價(jià)值

單項(xiàng)指標(biāo)對(duì)肝癌診斷結(jié)果顯示，4項(xiàng)血清指標(biāo)的性能表現(xiàn)不一，就靈敏度上，AFP-L3最高；特異度上，GP73最高；陽(yáng)性預(yù)測(cè)值上，GP73最高；陰性預(yù)測(cè)值上，AFP-L3最高；4項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果顯示，聯(lián)合檢測(cè)診斷的靈敏度、特異度比單項(xiàng)檢測(cè)都高，其中靈敏度達(dá)90.6%，特異度達(dá)89.0%，陽(yáng)性和陰性預(yù)測(cè)值比單項(xiàng)檢測(cè)都有一定程度的提高。見(jiàn)表2。

三、血清單項(xiàng)和聯(lián)合檢測(cè)的ROC曲線

ROC曲線檢測(cè)的橫坐標(biāo)以特異度為參照，縱坐標(biāo)以靈敏度為參照，在SPSS 19.0軟件上作ROC曲線圖，計(jì)算出曲線下的面積。GP73、AFP-L3、AFP及AFU指標(biāo)的ROC曲線面積分別為0.811、0.774、0.643、0.609；3項(xiàng)聯(lián)合指標(biāo)的ROC曲線面積為0.957。血清指標(biāo)單項(xiàng)檢測(cè)的ROC曲線見(jiàn)圖1，聯(lián)合檢測(cè)的ROC曲線見(jiàn)圖2。

表1　5組GP73、AFP-L3、AFP及AFU水平比較(±s)

注：與健康對(duì)照組比較，★P<0.05；與肝癌組相比，▲P<0.05

表2　4項(xiàng)血清指標(biāo)對(duì)肝癌的診斷性能評(píng)價(jià)(%)

圖1　血清指標(biāo)單項(xiàng)檢測(cè)的ROC曲線

圖2　聯(lián)合檢測(cè)的ROC曲線

討論

肝癌是由于乙型肝炎、肝硬化、黃曲霉菌等因素導(dǎo)致的發(fā)生于肝臟的腫瘤，好發(fā)于30～50歲年齡段。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年死于肝癌的患者約26萬(wàn)，而我國(guó)每年有14萬(wàn)患者死于此病。因此，如何有效治療肝癌，提高患者生存率成為臨床工作者研究的熱點(diǎn)。目前研究表明，在肝癌早期，患者腫瘤體積較小，給予積極有效治療，能夠顯著提高生存幾率，而中晚期肝癌大多不能夠切除或者切除效果較差，但是肝癌患者早期的臨床癥狀，如納差、腹脹、乏力等，與肝炎、肝硬化具有較大的相似性，通過(guò)臨床表現(xiàn)無(wú)法進(jìn)行鑒別診斷。因此，如何早期診斷成為臨床科研工作者亟待解決的關(guān)鍵問(wèn)題。

GP73、AFP-L3、AFP及AFU等血清學(xué)指標(biāo)對(duì)肝癌的診斷具有重要的參考意義。其中GP73 是存在于高爾基體的一種跨膜蛋白，在正常肝組織表達(dá)很少甚至無(wú)表達(dá)，肝癌患者血清中GP73 水平顯著升高。AFP-L3是肝細(xì)胞癌的特異性蛋白，相關(guān)臨床研究結(jié)果顯示，該蛋白和肝癌的關(guān)系最為緊密。AFP是臨床上診斷肝癌最重要的血清學(xué)腫瘤標(biāo)志物，已被廣泛用于肝癌的普查、診斷和監(jiān)測(cè)。AFU是一種溶酶體酸性水解酶，在肝腎組織中較高，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)肝癌組織中AFU活力顯著升高，且與腫瘤生長(zhǎng)期有關(guān)[3-6]。本研究通過(guò)分析肝癌組、肝硬化組、肝炎組及健康對(duì)照組GP73、AFP-L3、AFP及AFU表達(dá)差異表明，肝臟疾病組GP73、AFP-L3、AFP及AFU水平均升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)，提示其在肝臟疾病的發(fā)生中發(fā)揮重要作用。文獻(xiàn)報(bào)道[7]，GP73、AFP-L3、AFP及AFU在肝炎、肝硬化以及肝癌進(jìn)展過(guò)程中血清水平都會(huì)上調(diào)，可能存在著交叉重疊，造成使用單一指標(biāo)診斷肝癌時(shí)出現(xiàn)假陽(yáng)性或者假陰性反映，如常用的AFP，特異度低于60%。本研究中肝癌組GP73、AFP-L3高于急性肝炎組、慢性肝炎組、肝硬化組，與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[8]，提示將其用于區(qū)分肝癌與其他肝臟疾病有助于提高診斷準(zhǔn)確率。AFP高于急性肝炎組、慢性肝炎組，但是低于肝硬化組，AFU高于急性肝炎組、肝硬化組，但是低于慢性肝炎組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)，提示單一使用AFP及AFU鑒別肝癌與其它肝臟疾病可能會(huì)出現(xiàn)漏診誤診。

單項(xiàng)指標(biāo)對(duì)肝癌診斷結(jié)果顯示，4項(xiàng)血清學(xué)指標(biāo)的性能表現(xiàn)不一。就靈敏度上，AFP-L3最高；特異度上，GP73最高；陽(yáng)性預(yù)測(cè)值上，GP73最高；陰性預(yù)測(cè)值上，AFP-L3最高；也表明GP73、AFP-L3作為一項(xiàng)單項(xiàng)指標(biāo)，在肝癌與其它肝臟疾病鑒別診斷中的價(jià)值高于AFU及AFP。4項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果顯示，聯(lián)合檢測(cè)診斷的靈敏度、特異度比單項(xiàng)檢測(cè)都高，其中靈敏度達(dá)90.6%，特異度達(dá)89.0%，陽(yáng)性和陰性預(yù)測(cè)值比單項(xiàng)檢測(cè)都有一定程度地提高，表明聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肝臟疾病區(qū)分診斷的價(jià)值最優(yōu)。但是聯(lián)合檢測(cè)中的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值仍較低，表明在聯(lián)合檢測(cè)中必須注重假陽(yáng)性的問(wèn)題，臨床上可以結(jié)合其他手段進(jìn)行檢測(cè)，如超聲等。ROC曲線是不同二分類方式繪制的一種曲線，曲線的橫坐標(biāo)由特異度表示，曲線的縱坐標(biāo)由靈敏度表示，ROC曲線可從靈敏度和特異性兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)來(lái)評(píng)價(jià)一個(gè)或多個(gè)效能，通過(guò)計(jì)算曲線下的面積能客觀地展現(xiàn)出診斷結(jié)果[9]。GP73、AFP-L3、AFP及AFU指標(biāo)的ROC曲線面積分別為0.811、0.774、0.643、0.609，3項(xiàng)聯(lián)合指標(biāo)的ROC曲線面積為0.957，表明聯(lián)合指標(biāo)檢測(cè)的ROC曲線有較高的診斷價(jià)值，本研究結(jié)果與以往文獻(xiàn)數(shù)據(jù)相符[10]。

綜上所述，GP73、AFP-L3、AFP及AFU在肝臟疾病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，在對(duì)肝癌與其他肝臟疾病鑒別診斷中，使用GP73、AFP-L3、AFP及AFU聯(lián)合檢測(cè)能顯著提高診斷的靈敏度和精確度，這比單項(xiàng)檢測(cè)的價(jià)值更高。

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(本文編輯：賴榮陶)

通信作者：滿冬亮, Email: gbcdbj@sina.com

(收稿日期：2015-12-29)

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