ZEB1在散發(fā)性伯基特淋巴瘤中的表達(dá)及意義

張守華　　黃慧　　徐紅艷　　吳艷　　曾松濤　　黃傳生　　楊文萍★

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ZEB1在散發(fā)性伯基特淋巴瘤中的表達(dá)及意義

張守華1，2黃慧1徐紅艷1吳艷1曾松濤1黃傳生3楊文萍1★

［摘要］目的探討ZEB1表達(dá)與散發(fā)性伯基特淋巴瘤（Burkitt lymphoma，BL）臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。方法收集33例BL患者臨床病理資料，免疫組化檢測Bcl?6、MUMl、ZEB1、E?鈣粘蛋白和N?鈣粘蛋白的表達(dá)，原位雜交檢測EB病毒編碼RNA（epstein?barr virus RNA，EBER）。結(jié)果33例BL 中Bcl?6、MUMl、ZEB1和EBER陽性率分別為90.9%（30例）、21.2%（7例）、42.4%（14例）、30.3%（10例）。所有病例均不表達(dá)E?鈣粘蛋白和N?鈣粘蛋白。ZEB1表達(dá)與臨床分期、MUMl表達(dá)和生存狀態(tài)無關(guān)（P>0.05），與Bcl?6和EBER表達(dá)也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.067、0.057）。結(jié)論BL不存在經(jīng)典上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化現(xiàn)象，ZEB1表達(dá)可能與EB病毒感染有關(guān)，其具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

［關(guān)鍵詞］伯基特淋巴瘤；免疫組織化學(xué)；ZEB1蛋白

伯基特淋巴瘤（Burkitt lymphoma，BL）是兒童最常見的淋巴瘤［1］，雖然治愈率逐步提高，但仍有少部分患者復(fù)發(fā)而死亡［2］，因此了解其發(fā)病機(jī)制將有助于開展靶向治療。轉(zhuǎn)錄因子ZEB1與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial?to?mesenchymal transition，EMT）有關(guān)，在多種腫瘤中表達(dá)，與預(yù)后有關(guān)［3］，其在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma，DLBCL）和套細(xì)胞淋巴瘤（mantle cell lymphoma，MCL）中已有報(bào)道［4?5］，與BL臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系不清楚。本實(shí)驗(yàn)收集33例BL患者臨床資料，應(yīng)用免疫組化檢測Bcl?6、MUMl、ZEB1、E?鈣粘蛋白和N?鈣粘蛋白的表達(dá)，原位雜交檢測EB病毒編碼RNA （epstein?barr virus RNA，EBER），探討ZEB1表達(dá)與散發(fā)性BL臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。

1　資料與方法

1.1病例來源

收集江西省兒童醫(yī)院病理科和江西省腫瘤醫(yī)院病理科2000年1月至2013年12月術(shù)后進(jìn)行化療的33例BL患者臨床病理資料，診斷標(biāo)準(zhǔn)參考第四版世界衛(wèi)生組織淋巴造血系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)［6］。33例BL中男孩27例、女孩6例；就診年齡為2~13歲，平均年齡5.8歲；發(fā)病部位為腹腔（30例）、頸部淋巴結(jié)（2例）、睪丸（1例）；臨床分期為Ⅰ+Ⅱ期（12例）、Ⅲ+Ⅳ期（16例）、未分期（5例）。采用電話或查閱病例形式進(jìn)行隨訪，隨訪截止時(shí)間為2014年8月31日。

1.2免疫組化和原位雜交

免疫組化檢測采用鏈霉菌抗生物素蛋白?過氧化物酶連結(jié)法（streptavidin?perosidase，SP），Bcl?6、 MUMl、ZEB1、E?鈣粘蛋白和N?鈣粘蛋白表達(dá)試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。根據(jù)Bcl?6和MUMl的表達(dá)，將BL分為生發(fā)中心型（germinal center，GC）（Bcl?6+/MUMl?）、晚生發(fā)中心型（late?GC）（Bcl?6+/MUMl+）、后生發(fā)中心型（post?GC）（Bcl?6-/MUMl+）和套細(xì)胞樣型（mantle cell?like）（Bcl?6-/MUMl-）［7］。EB病毒編碼RNA（EB?ER）原位雜交檢測試劑購自福建泰普國際生物學(xué)集團(tuán)有限公司。操作按照說明書進(jìn)行，當(dāng)腫瘤陽性細(xì)胞>30%時(shí)判斷為陽性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件，率的比較采用c2檢驗(yàn)，不滿足c2檢驗(yàn)時(shí)用Fisher確切概率法。

2　結(jié)果

2.1隨訪結(jié)果

33例BL患者隨訪時(shí)間為4~120個(gè)月，其中生存27例、死亡6例（均為Ⅲ或Ⅳ期，病例4和5未完整切除且未做骨髓穿刺）（表1）。

表1　6例死亡患者的臨床資料和免疫表型及EBV感染狀態(tài)Table 1　Clinical data，immunotype and EBV infect status in 6 died cases

2.2免疫組化和原位雜交結(jié)果

33例BL中腫瘤細(xì)胞Bcl?6（圖1）、MUMl（圖2）、ZEB1（圖3）和EBER（圖4）陽性率分別為90.9%（30例）、21.2%（7例）、42.4%（14例）、30.3% （10例）。所有病例均不表達(dá)E?鈣粘蛋白和N?鈣粘蛋白。根據(jù)Bcl?6和MUMl的表達(dá)，生發(fā)中心型24例、晚生發(fā)中心型6例、后生發(fā)中心型1例和套細(xì)胞樣型2例。ZEB1表達(dá)與臨床分期、MUMl表達(dá)和生存狀態(tài)無關(guān)（P>0.05），與Bcl?6和EBER表達(dá)也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.067、0.057）。6例死亡患者的臨床資料和免疫表型及EBV感染狀態(tài)見表1。ZEB1表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系見表2，因有5例無臨床分期而未納入統(tǒng)計(jì)分析。

3　討論

惡性淋巴瘤發(fā)病率占兒童腫瘤第3位［8］，伯基特淋巴瘤為主要病理學(xué)類型，大約占兒童非霍奇金淋巴瘤（non?Hodgkin lymphoma，NHL）的30%~ 50%［6］，其特征是惡性度高、進(jìn)展快、具有高度的侵襲性，常伴有中樞神經(jīng)系統(tǒng)及骨髓的累及；傳統(tǒng)治療方案多采用高強(qiáng)度的化療，但骨髓抑制及毒副作用常導(dǎo)致治療失敗。因此，亟待闡明高度侵襲性的分子調(diào)控機(jī)制，探尋新的治療策略。EMT是指上皮細(xì)胞在特定的生理與病理情況下失去極性和細(xì)胞間的連接性，向具有間質(zhì)表型細(xì)胞轉(zhuǎn)化的現(xiàn)象，促使細(xì)胞獲得較強(qiáng)侵襲能力，同時(shí)EMT也被認(rèn)為是影響腫瘤化療療效的一個(gè)新的重要機(jī)制［9］。ZEB1是ZEB轉(zhuǎn)錄因子家族一員，含有2個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)簇和一個(gè)同源結(jié)構(gòu)域其通過與E?cadherin啟動(dòng)子區(qū)保守的E2盒結(jié)合，抑制E?cadherin的表達(dá)，從而促進(jìn)EMT的發(fā)生［10］。Lemma等［4］研究發(fā)現(xiàn)EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子ZEBl、Twist和Slug在DLB?CL中存在異常表達(dá)，且與預(yù)后有關(guān)；同時(shí)有學(xué)者［5］證實(shí)在MCL中ZEB1激活增殖和抗凋亡基因，抑制促凋亡基因，與腫瘤細(xì)胞的侵襲性及化療耐藥有關(guān)。早期的研究也證明ZEB在淋巴細(xì)胞造血細(xì)胞的生成和功能成熟起著重要的作用［11］，由此可見在淋巴造血系統(tǒng)腫瘤中可能存在EMT（樣）的調(diào)控機(jī)制，ZEB起著關(guān)鍵作用。我們對33例BL進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)中ZEB1在BL中的陽性表達(dá)率為42.4% （14例），所有病例均不表達(dá)E?鈣粘蛋白和N?鈣粘蛋白。因此，我們推測在BL中可能不存在經(jīng)典的EMT現(xiàn)象，是否與內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（endothelial?mes?enchymal transition，EndMT）有關(guān)有待進(jìn)一步研究。

表2　ZEB1表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系（例）Table 2　The relationship between ZEB1 expression and clinicopathologic parameters（case）

ZEB1的表達(dá)與多種腫瘤預(yù)后有關(guān)，然而其在不同的腫瘤中的作用與表達(dá)部位有關(guān)，如在DLB?CL中，ZEB1表達(dá)于腫瘤細(xì)胞核、內(nèi)皮細(xì)胞和組織細(xì)胞中，無細(xì)胞質(zhì)陽性病例，核強(qiáng)陽性者預(yù)后較弱陽性者差［4］。在食管鱗狀細(xì)胞癌中，ZEB1在腫瘤細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)和腫瘤間質(zhì)中均有表達(dá)，細(xì)胞質(zhì)ZEB1弱陽性者預(yù)后更好［12］。本實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，ZEB1除了表達(dá)于腫瘤細(xì)胞外，在血管內(nèi)皮細(xì)胞和間質(zhì)中的一些細(xì)胞也呈現(xiàn)陽性。遺憾的是，本組未發(fā)現(xiàn)ZEB1的表達(dá)部位和表達(dá)強(qiáng)度與腫瘤預(yù)后有關(guān)，可能與病例較少或化療方案不統(tǒng)一有關(guān)，有待積累更多病例來闡述ZEB1在BL中的表達(dá)意義。

Bcl?6和MUMl是腫瘤細(xì)胞起源的標(biāo)記物，在DLBCL中Bcl?6和MUMl表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系較大。有學(xué)者將BL分為生發(fā)中心型、晚生發(fā)中心型、后生發(fā)中心型和套細(xì)胞樣型。雖然Bcl?6和MUMl表達(dá)與BL的預(yù)后關(guān)系不明顯［2］，但本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)3例Bcl?6陰性BL均表達(dá)ZEB1，其意義有待進(jìn)一步研究。

BL中存在與EBV相關(guān)的miRNA?127表達(dá)［13］，同時(shí)存在Wnt信號通路的異常［14］。ZEB受EBV相關(guān)miRNAs的調(diào)控，在EBV陽性鼻咽癌中，通過抑制miRNA?200a和miRNA?200b的表達(dá)，上調(diào)EMT介導(dǎo)靶基因ZEB1和ZEB2，使腫瘤細(xì)胞的侵襲性和轉(zhuǎn)移性增強(qiáng)［3］。本課題組前期工作中也證實(shí)了EBV感染相關(guān)的BL與miRNA?127、miRNA?155相關(guān)［15］，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)ZEB1表達(dá)與EBV感染狀態(tài)有一定的關(guān)系，BL中ZEB1的表達(dá)是否與miRNA?127、miRNA?200a或Wnt信號通路等有關(guān)有待進(jìn)一步研究。

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2.江西省兒童醫(yī)院普外科，江西，南昌330006

3.江西省腫瘤醫(yī)院病理科，江西，南昌330029

★通訊作者：楊文萍，E?mail：ywp07912000@163.com

基金項(xiàng)目：江西省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會課題項(xiàng)目（20155603）；江西省自然科學(xué)基金（20132BAB205047）

作者單位：1.江西省兒童醫(yī)院病理科，江西，南昌330006

Expression of ZEB1 in sporadic Burkitt lymphoma and its clinical significance

ZHANG Shouhua1，2，HUANG Hui1，XU Hongyan1，WU Yan1，ZENG Songtao1，HUANG Chuansheng3，YANG Wenping1★
（1.Department of Pathology，Children’s Hospital of Jiangxi Province，Nanchang，Jiangxi，China，330006；2.Department of General Surgery，Children’s Hospital of Jiangxi Province，Nanchang，Jiangxi，China，330006；3.Department of Pathology，Jiangxi Provincial Cancer Hospital，Nanchang，Jiangxi，China，330029）

［ABSTRACT］ObjectiveTo study the relationship between expression of ZEB1 and clinicopathologi?cal features of sporadic Burkitt lymphoma(BL).MethodsThe clinicopathological data of 33 patients with BL were retrospectively analyzed.The expressions of Bcl?6,MUMl,ZEB1,E?cadherin and N?cadherin were detected by immunohistochemistry and EBER by in situ hybridization.ResultsIn 33 cases,the positive rates of Bcl?6,MUMl,ZEB1 and EBER were 90.9%(30 cases),21.2%(7 cases),42.4%(14 cases)and 30.3%(10 cases) respectively,and negative for E?cadherin and N?cadherin.There were no significant differences between ZEB1 expression and clinical stage.Bcl?6,MUM1 and prognosis were poorly associated with EBV infection status(P= 0.057).ConclusionZEB1 expression is associated with EBV infection status.Its mechanism requires further study.

［KEY WORDS］Burkitt lymphoma;Immunohistochemistry;ZEB1 protein