寧夏部分地區(qū)牛病毒性腹瀉的血清學(xué)檢測

王曉亮，王玉梅，張玉玲，吳亞文，李知新，張 雯，胡永浩（.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，甘肅蘭州 70070；.寧夏動物疾病預(yù)防控制中心，寧夏銀川 7500；.寧夏大學(xué)，寧夏銀川 7500）

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寧夏部分地區(qū)牛病毒性腹瀉的血清學(xué)檢測

王曉亮1，2，王玉梅2，張玉玲2，吳亞文2，李知新2，張 雯3，胡永浩1
（1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，甘肅蘭州 730070；2.寧夏動物疾病預(yù)防控制中心，寧夏銀川 750011；3.寧夏大學(xué)，寧夏銀川 750021）

摘 要：［目的］掌握寧夏地區(qū)部分牛場犢牛病毒性腹瀉病毒感染情況，為犢牛病毒性腹瀉的凈化和綜合防治提供依據(jù)。［方法］從寧夏4個市9個縣（區(qū)）的25個發(fā)病牛場（戶）采集血清樣品191份，采用ELISA方法，進行血清學(xué)調(diào)查。［結(jié)果］寧夏4個地級市犢牛病毒性腹瀉的抗體陽性率高達64.92%，并有一定程度的抗原陽性，且主要發(fā)生在1月齡以內(nèi)的犢牛。［結(jié)論］牛病毒性腹瀉是具有重大經(jīng)濟意義的疾病，是今后寧夏養(yǎng)牛業(yè)應(yīng)重點防范的疾病之一。

關(guān)鍵詞：牛病毒性腹瀉；血清學(xué)；調(diào)查；ELISA

牛病毒性腹瀉病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV），屬于黃病毒科、瘟病毒屬。該病毒引起的疾病非常復(fù)雜，常呈多種臨床表現(xiàn)，通常將引起臨床急性癥狀的疾病稱為牛病毒性腹瀉（BVD），而引起慢性持續(xù)感染的疾病稱為黏膜?。∕D），因此該病也稱為牛病毒性腹瀉-黏膜病。BVDV可以感染牛、羊、豬和野生反芻動物，臨床以腸炎、腹瀉、呼吸綜合征、先天性缺陷、免疫抑制、繁殖障礙、急性和慢性黏膜病以及母畜流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和畸形胎等為特征［1］。Olafson 等［2］1946年在美國的奶牛場中首次發(fā)現(xiàn)并報道該病，隨后該病在南北美洲、歐洲、亞洲、大洋洲和非洲等地區(qū)的許多國家流行。自李佑民等［3］在我國成功分離和鑒定出BVDV以來，該病在我國北方大部分省區(qū)均有較嚴重流行。高雙娣等［4］從青海、寧夏、甘肅、陜西、四川等地的黃牛、牦牛中進行BVDV抗體檢測，發(fā)現(xiàn)其血清陽性率分別為46.15%和30.08%。

BVD嚴重影響奶牛和黃牛的繁殖及生產(chǎn)性能，給養(yǎng)牛業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟損失［5］。為摸清寧夏地區(qū)牛BVDV感染和流行情況，對25個牛場的191份血清樣品進行了血清學(xué)調(diào)查，旨在為該病的綜合防治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣本采集

2015年6—8月以現(xiàn)場采集的方式，在寧夏4個市9個縣（區(qū)）出現(xiàn)犢牛腹瀉癥狀的25個養(yǎng)牛場（戶），采集發(fā)病或同群犢牛血液樣品191份。

1.2 檢測用試劑

美國IDEXX公司生產(chǎn)的牛病毒性腹瀉病毒抗原檢測試劑盒、西班牙HIPRA公司生產(chǎn)的CIVTEST病毒性腹瀉P80抗體阻斷法試劑盒，均購自北京世紀(jì)元亨動物防疫技術(shù)有限公司。

1.3 器材

培養(yǎng)箱、96孔酶標(biāo)儀（美國伯樂680）、洗板機、微量移液器等。

1.4 檢測方法

1.4.1 血清的制備。按照常規(guī)方法從犢牛的頸靜脈或尾靜脈采血，每頭牛3 mL左右，在室溫傾斜靜置半天或37℃培養(yǎng)2 h，待淡黃色血清析出后，3 000 r/min離心5 min，取上清于離心管中，置于4℃或-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2 ELISA檢測。BVDV抗原檢測按照美國IDEXX公司推薦的ELISA方法進行，當(dāng)被檢樣品的S-N值等于或小于0.300時，判為BVDV抗原陰性；當(dāng)被檢樣品的S-N值大于0.300時，判為BVDV抗原陽性。BVDV抗體檢測按照西班牙HIPRA公司生產(chǎn)的CIVTEST病毒性腹瀉P80抗體阻斷法試劑盒使用說明書進行操作，將待檢血清按1：10倍稀釋，并根據(jù)說明書進行結(jié)果判定。

2 結(jié)果

2.1 總體檢測結(jié)果

在25個養(yǎng)牛場（戶）中，有5個場戶經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)BVDV抗原陽性，場抗原陽性率為20%（5/25），樣品來自于固原市和銀川市；有15個場戶經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)BVDV抗體陽性，場抗體陽性率為60% （15/25）。在191份牛血清中，有7份為BVDV抗原陽性，個體陽性率為3.66%（7/191）；有124份為BVDV抗體陽性，個體陽性率為64.92% （124/191）（表1）。

表1 寧夏4個市犢牛病毒性腹瀉檢測情況匯總表

2.2 寧夏固原市5個縣（區(qū)）BVD檢測結(jié)果

對寧夏固原市所屬的5個縣（區(qū)）進行了全覆蓋采樣，經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)C縣與D縣的BVDV抗體、抗原檢測均為陰性，而A、B、E三縣均呈現(xiàn)不同程度的BVDV抗體或抗原陽性（表2）。在地理分布中，C縣與D縣相鄰，并且均位于A、B、E三縣的南端，因此認為地理位置或地形特點對BVDV傳播可能存在一定的影響。

2.3 犢牛病毒性腹瀉與月齡的關(guān)系

隨機對8個養(yǎng)牛場的108頭犢牛進行了BVD抗體、抗原檢測，將檢測結(jié)果與月齡進行關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)犢牛病毒性腹瀉、抗體檢測陽性樣品主要來源于1月齡以內(nèi)的犢牛（表3）。

表2 寧夏固原市的5個縣（區(qū)）犢牛病毒性腹瀉檢測情況匯總表

表3 寧夏3個市的牛規(guī)模養(yǎng)殖場犢牛病毒性腹瀉與月齡關(guān)系

3 討論

3.1 雖然僅通過血清學(xué)調(diào)查不能排除細菌性、寄生蟲性或飼養(yǎng)管理等因素共同造成犢牛腹瀉的可能，但是從血清學(xué)的調(diào)查數(shù)據(jù)可以確定BVDV在寧夏區(qū)域內(nèi)廣泛分布，尤其是養(yǎng)牛密集區(qū)，并且隨著寧夏地區(qū)養(yǎng)牛業(yè)的迅猛發(fā)展和區(qū)內(nèi)牛的頻繁交易以及無序流動，該病會繼續(xù)傳播蔓延，是今后寧夏養(yǎng)牛業(yè)應(yīng)重點防范的疾病。

3.2 BVDV的傳染源主要是發(fā)病畜。病牛的分泌物、排泄物、血液和脾臟中都含有病毒，可以直接接觸或間接接觸的方式傳播［6］。BVDV可以穿過胎盤感染胎兒，特別是在懷孕早期。母牛一旦被感染，病毒可通過胎盤感染胎兒，使胎兒產(chǎn)生免疫抑制，引起持續(xù)性病毒血癥；如果小牛正常產(chǎn)出，病毒血癥能持續(xù)到成年期，這種牛臨床上看似健康，血清中又無保護性抗體，但體內(nèi)始終帶毒，是牛群中最危險的傳染源［6］。

3.3 雖然犢牛腹瀉是犢牛飼養(yǎng)管理中面臨的主要健康問題之一，但通過良好的飼養(yǎng)管理措施可有效降低其發(fā)病率。要做好飼養(yǎng)管理必須從加強母牛和犢牛的飼養(yǎng)管理、營造良好的衛(wèi)生環(huán)境、科學(xué)免疫接種等多方面進行綜合管控。然而，寧夏地區(qū)牛養(yǎng)殖場戶的飼養(yǎng)管理水平較之其它地區(qū)仍存在一定的差距，并將需要一定的時間進行轉(zhuǎn)變與提升。為控制BVDV在寧夏的流行并加以消滅，就必須采取檢疫、隔離、凈化、預(yù)防、加強飼養(yǎng)管理等綜合防控措施。我國已生產(chǎn)出一種弱毒凍干疫苗，可接種不同年齡和品種的牛，接種后表現(xiàn)安全，14 d后可產(chǎn)生抗體并保持22個月的免疫力［7］。此外，根據(jù)一些研究報道，中草藥對治療牛病毒性腹瀉效果顯著，療效穩(wěn)定，且無任何藥物殘留［8］。建議寧夏地區(qū)制定《寧夏牛病毒性腹瀉病綜合防治措施》，為控制并凈化BVDV奠定基礎(chǔ)。

參考文獻：

［1］ 殷震，劉景華.動物病毒學(xué)［M］.2版.北京：科學(xué)出版社，1997.

［2］ Olafson P，Mac-callum A D，F(xiàn)ox F H.An Apparently new transmissible disease of cattle ［J］.Cornell Vet.1946，36：205-213.

［3］ 李佑民，劉振國，武銀蓮.關(guān)于牛病毒性腹瀉-黏膜病病毒（長春184）的分離與鑒定［J］.中國人民解放軍獸醫(yī)大學(xué)學(xué)報，1993.3（2）：113-121.

［4］ 高雙娣，邱昌慶，周繼章，等.西北和西南五?。▍^(qū)）部分地區(qū)黃牛牦牛牛病毒性腹瀉/黏膜病血清學(xué)監(jiān)測［J］.中國獸醫(yī)科技，1999，29（7）：17-18.

［5］ 王連江，齊長明.牛病毒性腹瀉病的危害與防制［J］.中國奶牛，2007（9）：33-34.

［6］ 湯中和.牛病毒性腹瀉病毒JN株的分離鑒定及E2基因的序列分析［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2013（5）：91-94.

［7］ 蒙旭輝.擠奶機引起奶牛乳房炎的原因及預(yù)防措施［J］.北京奶業(yè)，2013（2）：18-19.

［8］ 張春梅，劉麗娟.中草藥治療牛病毒性腹瀉的療效試驗［J］.中國畜牧獸醫(yī)文摘，2014，30（11）：142-143.

（責(zé)任編輯：朱迪國）

注：王曉亮、王玉梅對本文有相同貢獻

Serological Investigation of Bovine Viral Diarrhea in Some Regions of Ningxia

Wang Xiaoliang1，2，Wang Yumei2，Zhang Yuling2，Wu Yawen2，Li Zhixin2，Zhang Wen3，Hu Yonghao1
（1.Gansu Agricultural University，Lanzhou，Gansu 730070；2.Ningxia Animal Disease Prevention and Control Center，Yinchuan，Ningxia 750011；3.Ningxia University，Yinchuan，Ningxia 750021）

Abstract：［Objective］The aim of the study was to understand the infection of bovine viral diarrhea virus（BVDV）on some cattle farms in some parts of Ningxia and to provide the basis for cleaning up and comprehensive prevention and control of bovine viral diarrhea.［Methods］ 191 bovine serum samples were collected from 25 cattle farms in 4 cities of Ningxia to detect the infection of BVDV by ELISA method.［Results］Results showed that BVDV antibody positive rate was as high as 64.92% in 4 cities of Ningxia，and antigen positive was detected in a certain degree.And most of BVD occurred in less than one month old calves.［Conclusion］Bovine viral diarrhea is one of the diseases with great economic signifi cance on cattle farms，and it was also the disease that should be prevented primarily for the cattle industry in Ningxia in the future.

Key words：bovine viral diarrhea；serology；investigation；ELISA

中圖分類號：S851.3

文獻標(biāo)識碼：B

文章編號：1005-944X（2016）02-0017-03

基金項目：寧夏農(nóng)業(yè)科技支撐--關(guān)鍵技術(shù)攻關(guān)項目（2015）

通訊作者：胡永浩