蜜蜂嗅覺研究進(jìn)展

謝翠琴　聶紅毅　蘇松坤（福建農(nóng)林大學(xué)蜂學(xué)學(xué)院，福州350000)

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蜜蜂嗅覺研究進(jìn)展

謝翠琴聶紅毅蘇松坤
（福建農(nóng)林大學(xué)蜂學(xué)學(xué)院，福州350000)

摘要：蜜蜂嗅覺影響蜜蜂交尾、哺育和采集等行為，對蜂群的繁衍和發(fā)展具有重要作用。蜜蜂觸角上分布著大量的嗅覺感覺器，能感知揮發(fā)性分子、氣味和激素等，因此是蜜蜂最重要的嗅覺器官，也是蜜蜂參與嗅覺交流的重要組成部分。綜述蜜蜂觸角、嗅覺感受器、嗅覺相關(guān)蛋白及嗅覺傳導(dǎo)機(jī)制等，能為蜜蜂后續(xù)的研究和蜜蜂觸嗅覺的應(yīng)用提供參考。

關(guān)鍵詞：蜜蜂；觸角；嗅覺

自然界中昆蟲眾多，它們依靠化學(xué)、視覺、嗅覺、聽覺和觸覺等方式進(jìn)行信息交流，適應(yīng)環(huán)境的選擇；信息交流可以促進(jìn)昆蟲個體相互協(xié)作，也能提高昆蟲求偶、覓食和抵御天敵的能力，從而增強(qiáng)昆蟲個體與群體的生存和繁衍能力。嗅覺在昆蟲中具有重要作用，參與昆蟲擇偶、選擇寄主和尋找食物源等。蜜蜂是社會性昆蟲，嗅覺與蜜蜂生命活動的各個方面息息相關(guān)，如：工蜂通過嗅覺感知蜂王物質(zhì)有助于維持蜂群的穩(wěn)定，還能通過嗅覺識別植物分子等；雄蜂利用靈敏的嗅覺追尋處女王，即嗅覺參與蜜蜂交尾，表明嗅覺對蜜蜂適應(yīng)環(huán)境和種群繁衍具有重要意義。而蜜蜂觸角上分布著眾多的嗅覺感覺器，因此是蜜蜂最重要的嗅覺器官，也是蜜蜂參與嗅覺交流的重要組成部分。對蜜蜂嗅覺進(jìn)行綜述，能為蜜蜂后續(xù)的研究和蜜蜂觸嗅覺的應(yīng)用提供參考。

1　蜜蜂觸角

自然界中昆蟲眾多，它們依靠化學(xué)、視覺、嗅覺、聽覺和觸覺等方式進(jìn)行信息交流，適應(yīng)環(huán)境的選擇。觸角上分布著眾多的感受器，是昆蟲重要的感覺器官，不僅擁有觸覺、嗅覺和味覺的功能，還能感受CO2、溫度和濕度等。嗅覺感受器主要分布于昆蟲的觸角，其次是在下顎須和下顎唇上，因此在昆蟲觸角的眾多功能中，嗅覺是昆蟲最重要的功能之一。

蜜蜂頭部有1對膝狀觸角，由柄節(jié)、梗節(jié)和鞭節(jié)組成；柄節(jié)是觸角基部的第一節(jié)，梗節(jié)是第二節(jié)，鞭節(jié)是由若干鞭小節(jié)組成的，蜂王和工蜂的鞭節(jié)有10節(jié)，而雄蜂的有11節(jié)。在蜜蜂觸角上有板形、壇形、錐形、鐘形、腔形和毛形等多種感覺器，其中的板形感覺器與嗅覺最相關(guān)；每個板形感覺器中含有多條感覺神經(jīng)元（圖1-1）。雄蜂、工蜂和蜂王觸角上的板形感受器的數(shù)目分別為16685、2232和1505，所以雄蜂觸角上的板形感受器最多，大約是工蜂的7.5倍，說明不同級型的蜜蜂，其嗅覺能力有所差異[1]。中華蜜蜂雄蜂觸角上的板形感受器比意大利蜜蜂的少，而中華蜜蜂和意大利蜜蜂工蜂觸角上的板形感覺器沒有顯著差異[2]。

探索蜜蜂觸角是一個復(fù)雜的過程，早期主要觀察觸角的基本結(jié)構(gòu)和形態(tài)，然后利用掃描電鏡對蜜蜂觸角上感覺器進(jìn)行分類并研究其功能，隨后運用觸角電位技術(shù)研究感覺器中電信號的變化。隨著分子技術(shù)的發(fā)展，蜜蜂觸角中嗅覺相關(guān)基因和蛋白逐步被研究，同時分析它們各自的結(jié)構(gòu)和功能。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展與蛋白質(zhì)組學(xué)的成熟，蛋白質(zhì)組越來越多應(yīng)用于蜜蜂觸角蛋白質(zhì)組的差異鑒定。

圖1-1(A)光學(xué)顯微鏡下蜜蜂板形感覺器[3]

圖1-1(B)蜜蜂板形感覺器的橫切面[3]

2　蜜蜂嗅覺系統(tǒng)

蜜蜂在長期進(jìn)化中演化出復(fù)雜的嗅覺系統(tǒng)，其主要功能由感覺器、嗅覺感受蛋白、嗅覺受體、感覺神經(jīng)元膜蛋白和氣味降解酶等相互協(xié)調(diào)運行產(chǎn)生。蜜蜂能通過嗅覺識別植物氣味分子、主要蜂王物質(zhì)成分（9-氧代-癸二烯酸、和9-羥基-癸二烯酸）、脂肪酸幼蟲信息素成分、報警信息素成分和其它信息素進(jìn)行化學(xué)交流，這對蜂群的繁殖和穩(wěn)定具有重要作用。昆蟲嗅覺感受傳遞是非常復(fù)雜的過程，目前尚未完全研究清楚；對蜜蜂嗅覺系統(tǒng)的研究主要是從感受器、感受蛋白、嗅覺受體、感覺神經(jīng)元膜蛋白和氣味降解酶分塊逐步研究的，目前尚未深入研究蜜蜂的嗅覺系統(tǒng)。

2.1嗅覺感覺蛋白

蜜蜂嗅覺感覺蛋白分為氣味結(jié)合蛋白（odorantbinding proteins,OBPs）和化學(xué)感覺蛋白（chemosensory proteins,CSPs）兩種，都是球形的水溶性α-螺旋小蛋白（10～30 kDa），有2個或3個二硫鍵。OBP和CSP基因不僅在嗅覺器官中表達(dá)，還在其它組織中表達(dá)，說明除嗅覺功能外，它們可能還具有其它功能。

2.1.1氣味結(jié)合蛋白

昆蟲中的OBPs的分子量通常在13～16 kDa范圍，是α-螺旋水溶性酸性小蛋白，在輔細(xì)胞中合成后被運送到感覺器淋巴液中，識別與結(jié)合氣味分子，然后將氣味分子運輸至嗅覺神經(jīng)元樹突膜的周圍。

OBPs家族根據(jù)基因序列可以分為6個亞家族Classic,Minus-C,Plus-C,Dimer,Doble和Double-Minus-C。也可以根據(jù)蛋白功能將OBPs分為五類：（1）信息素結(jié)合蛋白（pheromone binding proteins，PBPs），此類蛋白在觸角中表達(dá)豐富，能與主要信息素結(jié)合；（2）普通氣味結(jié)合蛋白（general odorant binding proteins，GOBPs），能結(jié)合花香化合物[4]；（3）觸角結(jié)合蛋白（Antennal Binding Protein，ABP）；（4）化學(xué)感覺相關(guān)親脂配體結(jié)合蛋白（Chemical-sense-Related Lipophilic-ligand-Binding Protein）；（5）雙翅目唾液蛋白家族（member of the Diptera salivary protein family,D7）。在蜜蜂中，根據(jù)蛋白功能把OBPs分為PBPs、GOBPs、ASP（觸角特異性蛋白antennal-specific protein,ASP）。又根據(jù)基因序列分為兩類：一類是傳統(tǒng)的OBPs(1-13)，含6個半胱氨酸，與其它昆蟲相同，以Cys(I)-Cys(III),Cys(II)-Cys(V),Cys (IV)-Cys(VI)成對交聯(lián)；另一類是C-minus OBPs（缺少第二或第五個半胱氨酸以及它們之間相連的二硫鍵），其中的OBP15-21含有4個半胱氨酸，而OBP14具有5個半胱氨酸[3,5]。

在1998年Danty等人通過質(zhì)譜和N端序列分析，推測在西方蜜蜂中有25個OBPs類似蛋白，并將劃分出在觸角中特異表達(dá)蛋白；后來經(jīng)過基因組測序、原位雜交等方法鑒定出西方蜜蜂中有21個OBP基因[6,7]；與許多昆蟲相比，蜜蜂含有較少的OBP基因。西方蜜蜂的21個OBP基因進(jìn)行neighbour-joining tree分析表明，OBP13和C-minus OBPs組成最大一單系，它們都在15號染色體上，并且它們的序列相似度高達(dá)48%，因此推斷OBP13和C-minus OBP基因都是由含6個半胱氨酸共同的祖先演化而來；相反的C-minus組外的OBP基因的序列相似度低，難以發(fā)現(xiàn)它們的起源[8]。

對東方蜜蜂OBPs的研究比較零散，陸續(xù)克隆表達(dá)研 究 了 ASP1，ASP2，OBP3，OBP5，OBP9，OBP11和OBP12，其中的ASP1屬于PBP；OBP11能與工蜂信息素法呢醇結(jié)合，同時也能與植物芳香物質(zhì)結(jié)合[9-16]。

西方蜜蜂的 OBP3（除觸角）、OBP16、OBP17、OBP18、OBP19、OBP20和OBP21在成年蜜蜂各個部分都表達(dá)；OBP7和OBP9僅在蜂王的卵巢中表達(dá)；OBP14和OBP15在幼蟲期表達(dá)，在蛹期不表達(dá)；OBP10在蛹期表達(dá)，并在剛出房時表達(dá)達(dá)到最高峰；蜜蜂OBP基因在嗅覺以外的器官或組織中表達(dá)，說明OBPs可作為發(fā)育和其它生理過程的普通載體；而OBP1、OBP2、OBP4、OBP5、OBP6、OBP8、OBP11、OBP15和OBP12這7個基因在觸角中高表達(dá)，在成蜂其它部位表達(dá)量低[3]；而OBP1，即是PBP基因，在工蜂和小于2周的雄蜂觸角中高表達(dá)[17]。

已研究的東方蜜蜂OBP基因序列一般長達(dá)400～ 500 bp，編碼140～150個氨基酸。Ac-ASP1和Ac-ASP2的基因都在工蜂觸角中高表達(dá)，Ac-ASP1屬于PBP，其基因在幼蟲和蛹期也表達(dá)且表達(dá)量豐富，而Ac-ASP2屬于GOBP，其基因不在這兩個發(fā)育階段表達(dá)[9,10]。Ac-OBP3在蜜蜂觸角和足的表達(dá)量顯著高于在頭和胸[14]。2010年張小輝等對Ac-OBP5、Ac-OBP9、Ac-OBP11和Ac-OBP12這幾個基因進(jìn)行克隆，分析表明它們的同源性低[12,13]。

昆蟲OBPs在嗅覺中的功能機(jī)制備受研究者關(guān)注，其中對PBP功能機(jī)制的研究表明，昆蟲中的PBP分為三類：長鏈PBP（約140個氨基酸長），中鏈PBP（約120個氨基酸長）和短鏈PBP(約100個氨基酸長）。剛開始，研究者發(fā)現(xiàn)長鏈PBP和短鏈PBP具有相似的功能機(jī)制，都如家蠶一樣，在中性環(huán)境中PBP與配體結(jié)合，在酸性條件下PBP的構(gòu)象發(fā)生變化，使之與配體解離[18]。但在飛蝗（Locusta migratoria）中研究表明：pH的改變對LmigOBP1的結(jié)構(gòu)影響很小，說明昆蟲間相似的PBP功能機(jī)制有其特異性[19]。不同種昆蟲的GOBPs能作為載體運輸各類氣味分子，還能協(xié)同氣味降解酶使氣味分子失去活性。

西方蜜蜂PBP(OBP1）具有6個半胱氨酸，其中的4個半胱氨酸形成疏水性的信息素結(jié)合位點，能與主要蜂王信息素成分結(jié)合[17]。西方蜜蜂PBP與棉鈴蟲的PBP的功能機(jī)制相近，在酸性環(huán)境中與配體結(jié)合，在中性環(huán)境其構(gòu)象改變后釋放配體[20,21]。西方蜜蜂中的OBP2（ASP2）在中性條件中形成二聚體結(jié)構(gòu)，能與多種氣味結(jié)合；OBP13能與油脂和類似物質(zhì)結(jié)合；OBP14與檸檬腈和丁香酚具有高親和力，此外還能與報警信息素成分，即2-庚酮結(jié)合；OBP21也能與9-氧代-癸二烯酸結(jié)合，另外還與追蹤信息素成分法尼醇具有較高的親和性[22-24]。C-minus OBPs中OBP15-21缺少第二和第五個半胱氨酸，OBP14缺少第5個半胱氨酸，使得C-minus OBPs與OBP1(ASP1)即PBP在三級折疊結(jié)構(gòu)有很大的區(qū)別，可使它們結(jié)合不同的揮發(fā)性物質(zhì)[24]。

2.1.2化學(xué)感受蛋白

昆蟲CSPs的主要功能是識別結(jié)合運輸非揮發(fā)性分子，其分子量約為12～14 kDa，含100～120個氨基酸，具有4個保守半胱氨酸連接形成兩個二硫鍵，三維結(jié)構(gòu)大體上為球形，內(nèi)含疏水結(jié)合區(qū)域。這類蛋白較為保守，含N-端的、中心區(qū)的和C-端區(qū)的3個保守區(qū)域。

1998年，Danty等在意大利蜜蜂觸角中發(fā)現(xiàn)CSP基因，并將它們命名為ASP3，ASP3含3個亞型—ASP3a，ASP3b和ASP3c，經(jīng)鑒定ASP3b與果蠅的CSP相似性高，屬于CSP基因[25]；后來ASP3c經(jīng)Briand用實驗證明也是CSP基因[26]；在2006年Forêt在意大利蜜蜂中鑒定出6個CSP基因，并將它們命名為CSP1-6，其中的CSP1、CSP2即分別為ASP3b和ASP3c基因[3]。隨著研究的進(jìn)行，在中華蜜蜂中也陸續(xù)克隆表達(dá)出6 個Ac-CSPs基因。無論是意大利蜜蜂還是中華蜜蜂的CSPs都與其它昆蟲的CSPs經(jīng)典特征相似。

在昆蟲中，CSP基因在觸角、頭、足、腹部、腺體、下顎須和下唇須等各個器官和組織都表達(dá)。CSP1，CSP2，CSP4在意大利蜜蜂和中華蜜蜂觸角中都表達(dá)，Am-CSP4只在觸角中表達(dá)；Ac-CSP3在蜜蜂翅中的表達(dá)量最高，而Am-CSP3在觸角中表達(dá)豐富[27-30]。CSP5和CSP6都在意大利蜜蜂卵和卵巢中表達(dá)，但CSP6也在其幼蟲期、蛹期和成蜂頭中表達(dá)；而在中華蜜蜂中，CSP5在各個發(fā)育期都表達(dá)且表達(dá)量較為穩(wěn)定，CSP6只在蛹期表達(dá)[29]。

昆蟲CSPs具有多種功能，如嗅覺、調(diào)節(jié)發(fā)育、免疫、信號傳導(dǎo)等。Maleszka等通過RNAi技術(shù)發(fā)現(xiàn)CSP5對意大利蜜蜂外胚層的發(fā)育有重要作用，CSP5的缺失會導(dǎo)致卵不能孵化，說明CSP5具有調(diào)節(jié)發(fā)育的功能[31]。Am-CSP2與芳香族化合物，說明其具有嗅覺功能。Ac-CSP3能與植物花和葉的揮發(fā)性次生代謝物結(jié)合，并且Am-CSP3能與16～18個碳的幼蟲信息素結(jié)合，說明CSP3也具有一定的嗅覺功能[30]。

2.2嗅覺受體

昆蟲的嗅覺受體（olfactory receptors,Ors）是含7個跨膜區(qū)域的跨膜蛋白，廣泛存在于嗅覺感覺神經(jīng)樹突膜上；與脊椎動物G-蛋白偶聯(lián)受體不同，它們是N端在細(xì)胞膜內(nèi)，C端在細(xì)胞膜外。昆蟲的Ors一般分為兩類：一類是典型嗅覺受體（atypical odorant receptor，Ors），這些Ors基因高度變異同源性低；另一類其基因在不同昆蟲間較為保守，同源性可高達(dá)70%以上，是傳統(tǒng)嗅覺受體（conventional Ors即olfactory receptor coreceptor family,Orco；在果蠅中被命名為Or83b）。

Krieger等在2003年擴(kuò)增出第一個西方蜜蜂Or基因AmelR2，這個基因在大多數(shù)觸角嗅覺感覺神經(jīng)中表達(dá)[32]。西方蜜蜂中有170個Ors基因，其中有7個假基因，并且大多數(shù)蜜蜂Ors基因是串聯(lián)排列的，其中最大的串聯(lián)陣列有60個Ors的序列，并且在2號染色體上；對其進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)這些基因可分為5個亞家系，其中的4個亞家系都很小，第5個亞家系很大，包含157個Ors基因[33]。經(jīng)序列分析表明AmOr2(即AmelR2）與DmOr83b的直系同源基因，屬于Orco基因。Wanner等在2007年研究表明，Or10、Or11、Or18和Or170這4個基因在西方蜜蜂雄蜂中高表達(dá)，并且Or11對蜂王物質(zhì)的主要成分9-氧代-癸二烯酸（9-ODA）有反應(yīng)[34]。

中華蜜蜂中克隆表達(dá)定位了Orco、Or1、Or2、Or3 和Or11基因，這5個Ors基因都在觸角中表達(dá)[35]；Orco在內(nèi)勤蜂觸角表達(dá)量高，在采集蜂各個部位豐富表達(dá)；Or2在雄蜂觸角中顯著表達(dá)；Or11在采集蜂中成對地大量表達(dá)[11,36]。

昆蟲ORs的功能是與氣味分子結(jié)合后改變細(xì)胞膜上的離子通道產(chǎn)生動作電位。昆蟲ORco能與OR結(jié)合成二聚體，功能之一是協(xié)助OR到達(dá)神經(jīng)元樹突膜上，例如在果蠅中敲掉OR83b，OR無法抵達(dá)神經(jīng)元樹突膜上[37]；功能之二是可作為OR的分子伴侶能增強(qiáng)與OR的識別能力，如在家蠶BmOR2能使BmOR56對順-茉莉酮的敏感度增高[38]。

2.3感覺神經(jīng)元膜蛋白

感覺神經(jīng)元膜蛋白（sensory neuron membrane proteins,SNMPs）是含有2個跨膜區(qū)域的膜結(jié)合蛋白，其基因?qū)儆谌祟愔舅徂D(zhuǎn)蛋白(FAT）CD36家族基因。最早在鱗翅目昆蟲的嗅覺受體神經(jīng)中發(fā)現(xiàn)SNMPs，研究表明這類蛋白可能在識別氣味分子上具有重要作用，如果蠅的一個SNMP（即CG700）在信息素檢測中具有重要作用，但其功能尚未完全研究清楚[39-41]。西方蜜蜂中有8個CD36同源的候選基因[42]。2013年胡穎穎等克隆表達(dá)出中華蜜蜂神經(jīng)元膜蛋白AccSNMP1編碼區(qū)，該基因1563 bp編碼520個氨基酸，并且AccSNMP1在各個部位都表達(dá)，但在觸角中表達(dá)最為豐富[43]。

2.4氣味降解酶

氣味降解酶（odorant degradation enzyme,ODEs）能使信號迅速失活，這對昆蟲嗅覺具有重要作用，因為ODEs能避免持續(xù)信號刺激和保證后續(xù)嗅覺感知的傳遞。ODEs主要包含酯酶（esterases,EST）、細(xì)胞色素P450氧化酶（cytochrome P450s,P450）、谷胱甘肽-s-轉(zhuǎn)移酶（glutathione S-transferases,GST）和醛氧化酶（aldehyde oxidase,AOX），并且這些酶中很多都具有解毒功能。

酯酶是膽堿酯酶、羧酸酯酶和磷酸酯酶等多種酯酶的統(tǒng)稱，根據(jù)功能的特異性，羧酸酯酶又可分為α-酯酶、β-酯酶、乙酰膽堿酯酶、保幼激素酯酶、神經(jīng)趨化蛋白、神經(jīng)連接蛋白、gliotactins和glutactin共8個亞家族[44]。酯酶具備降解氣味的功能，如雄性天蠶蛾觸角中的酯酶ApolSE能降解信息素中乙酸酯成分；?；页嵋苟瓿上x觸角中的羧酸酯酶SICXE10和甜菜夜蛾中的酯酶SexiCXE4能降解植物綠葉氣味成分的（Z）-3-己烯醋酸鹽[45-47]。細(xì)胞色素P450氧化酶參與信息素的代謝，如金龜子觸角特異性P450能降解性外激素成分，此外，金龜子的CYP4AW1信息素、甘藍(lán)夜蛾中的CYP4L4和CYP4S4能檢測氣味和信息素[48-50]。UGTs和AOX在昆蟲觸角中都有生成，也參與信息素的分解，并且UGTs能催化親脂性糖基混合物與AOX能分解醛類化合物，有助于觸角中有毒物質(zhì)的代謝[51-53]。

2.5嗅覺系統(tǒng)機(jī)制

昆蟲嗅覺系統(tǒng)機(jī)制有兩種假說：其一是氣味分子與感受蛋白結(jié)合后被運輸?shù)叫嵊X神經(jīng)元的樹突上，因氣味分子帶有負(fù)電荷氣味分子的積累，使得嗅覺神經(jīng)元的樹突周圍的pH發(fā)生變化，從而導(dǎo)致氣味分子與感受蛋白分離后與嗅覺受體結(jié)合產(chǎn)生動作電位[18,54]；其二是氣味分子與感受蛋白結(jié)合后，與感受神經(jīng)元膜蛋白（SNMP）相互作用激發(fā)OR，OR與G-蛋白偶聯(lián)后，由效應(yīng)器激發(fā)第二信使，隨著第二信使的增加激活離子通道[3]；最后氣味被氣味降解酶降解。

3展望

嗅覺交流對蜜蜂具有重要作用，但目前尚未完全研究清楚，可以用RNA-Seq技術(shù)研究不同行為表現(xiàn)下蜜蜂觸角幾乎所有基因的表達(dá)情況；可以利用信息素成分或氣味分子與OBP或者CSP是如何結(jié)合與釋放的，以及它們與受體結(jié)合后是怎樣產(chǎn)生電信號的，以及用信息素成分或氣味分子刺激蜜蜂，分析嗅覺候選基因的表達(dá)是否受到影響；也可以利用western blot和免疫熒光等技術(shù)，對嗅覺相關(guān)基因進(jìn)行定位，以及研究它們之間是否存在互作關(guān)系，逐步探明蜜蜂嗅覺機(jī)制與行為發(fā)育的關(guān)系。蜜蜂觸角上分布著成千上萬個感覺器，能感受環(huán)境中各種揮發(fā)性氣味分子，賦予了蜜蜂靈敏的嗅覺，而且蜜蜂可以通過學(xué)習(xí)識別新的氣味，具有可塑性。因此可深入研究蜜蜂觸角，推進(jìn)觸角仿生的研究，發(fā)明識別特定氣味靈敏的元器件，這樣的元器件能用于軍事和醫(yī)學(xué)，如檢測炸藥、尋找尸體和診斷疾病等。

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資助項目：國家自然科學(xué)基金（31340061）

作者簡介：謝翠琴（1989－），女，碩士，研究方向為蜜蜂飼養(yǎng)與繁育。E-mail:3030068335@qq.com。

通訊作者：蘇松坤，研究員。E-mail：susongkun@zju.edu.cn。

Advances in research on honey bee olfactory

Xie Cuiqin，Nie Hongyi，Su Songkun
（College of Bee Science,Fujian Agriculture and Forestry University,Fuzhou 350000）

Abstract:Olfactory system plays an important role in reproduction and development of honey bee,affecting mating,nursing,and foraging.The surface of the honey bee antennae,which is covered with numberous sensillum,has the ability to percept volatile molecules,odors,and hormones.Therefore,antennae are vital sensory organs of honey bees and accomplish an important role for olfactory communication.Therefore,we summarized honey bee antennae, olfactory sensillum,olfactory proteins and olfactory transmission mechanism,etc,which can provide reference for later researches as well as application of antennae in the honey bee.

Key words:honey bee;antennae;olfactory