CK7、Ki-67在肺癌中的表達(dá)及聯(lián)合診斷價值

張慧峰秦秉玉余海波

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CK7、Ki-67在肺癌中的表達(dá)及聯(lián)合診斷價值

張慧峰1秦秉玉1余海波2

【摘要】目的 探討細(xì)胞角蛋白7（cytokeratin 7，CK7）和核抗原ki-67 在肺癌中的定位表達(dá)與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。方法 收集臨床手術(shù)切除的肺癌組織蠟塊62例，應(yīng)用免疫組化檢測組織中CK7 和Ki-67 的表達(dá)，結(jié)合臨床病理資料和隨訪資料進(jìn)行回顧性研究。結(jié)果CK7 和Ki-67的表達(dá)在年齡和性別的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0．05）。Ki-67 在不同病理類型的腫瘤組織中表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0．05） ，但CK7在不同病理類型腫瘤組織中的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．01）。在高分化肺癌患者中CK7 和Ki-67 表達(dá)陽性率低于低分化肺癌患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．01）。CK7和Ki-67在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌患者中的表達(dá)陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0．01）。CK7 表達(dá)水平在病理分期較早組別（Ⅰ+Ⅱ）肺癌低于分期較晚組別（ Ⅲ + Ⅳ） ，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．01） ，但Ki-67的表達(dá)在兩組中差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0．18）。CK7 表達(dá)與Ki-67 表達(dá)無相關(guān)性（P=0．49）。結(jié)論 CK7及Ki-67 高表達(dá)與肺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，對判斷肺癌惡性程度及預(yù)后有重要參考價值。

【關(guān)鍵詞】肺癌；細(xì)胞角蛋白7；核抗原ki-67；免疫組化

Objective To investigate the relationship between the expression of CK7 and Ki-67 in lung cancer and its relationship with clinical pathological features and prognosis． Methods 62 cases of lung cancer tissues were collected from clinical surgery and the expression of Ki-67 and CK7 were detected by immunohistochemistry． The clinical data and follow-up data were retrospectively analyzed． Results The positive rate of CK7 and Ki-67 in different age groups There was no statistically significant difference（P＞0．05）． There was no significant difference in the expression of Ki-67 in tumor tissues with different pathological types （P＞0．05），but there was significant difference in the expression of CK7 in tumor tissues with different pathological types（P ＜0．01）． The positive rate of Ki-67 and CK7 in patients with high differentiation was significantly lower than that in patients with low differentiation，the difference was statistically significant （P＜0．01）． The expression level of CK7 and Ki-67 in lymph node metastasis group was significantly higher than that in non lymph node metastasis group，the difference was statistically significant （P＜0．01）． CK7 expression level in lung cancer pathological staging （I + II） was significantly lower than that in late stage （III + IV），the difference was statistically significant （P＜0．01），but the expression of Ki-67 in the two groups was not statistically significant （P=0．18）． There was no correlation between CK7 expression and Ki-67 expression （P=0．49）．Conclusion CK7 and Ki-67 are important factors affecting the prognosis of patients． The abnormal expression of the two is closely related to the occurrence，development and metastasis of lung cancer． It is important to judge the malignant degree and prognosis of lung cancer．

【Key words】 Lung cancer，CK7，Ki-67，Immunohistochemistry

肺癌是致死率最高的癌癥，它的發(fā)生與進(jìn)展是一個逐步發(fā)展的過程。細(xì)胞的過度增殖及轉(zhuǎn)移是腫瘤發(fā)生與發(fā)展的重要因素之一。細(xì)胞角蛋白7（cytokeratin 7，CK7）和Ki-67 為細(xì)胞核增殖抗原，其本身與DNA 合成有關(guān)，可以作為惡性腫瘤的細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移的評價指標(biāo)。本研究通過采用免疫組化的方法對肺癌組織中CK7和Ki-67的表達(dá)進(jìn)行檢測，并收集相關(guān)的臨床資料，探討它們與肺癌的發(fā)生與發(fā)展的關(guān)系，研究二者聯(lián)合使用作為肺癌預(yù)后敏感性指標(biāo)的可能性。

1 材料與方法

1.1 材料

SP 試劑盒購自北京中衫生物技術(shù)有限公司，鼠抗人CK7 單克隆抗體購自邁新公司，鼠抗人Ki-67 單克隆抗體免疫組化試劑盒購自北京中衫生物技術(shù)有限公司。

1.2 一般資料

選取我院胸外科2013年10月～2014年10月手術(shù)切除肺癌標(biāo)本62 例，其中男性47例，女性15例，年齡36～82歲，平均（58.3±6.7）歲。鱗癌31例，腺癌20例，腺鱗癌4例，其他7例。所有標(biāo)本均為手術(shù)切除組織，有明確的病理結(jié)果，術(shù)前均未行化療或放療。按照2009年國際抗癌聯(lián)盟（ UICC） TNM 分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ、Ⅱ期28例，Ⅲ、Ⅳ期34例。

1.3 免疫組織化學(xué)染色

切除組織石蠟包埋、切片，脫蠟，3% CO2室溫孵育5～10 min，高壓抗原修復(fù)，去內(nèi)源性過氧化物酶及牛血清封閉。分別給予一抗4℃ 過夜，采用PBS代替一抗作為陰性對照。次日再依次滴加二抗37℃孵育20 min。最后用二氨基聯(lián)苯胺（DAB） 顯色，蘇木素復(fù)染。乙醇梯度脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封片，光學(xué)顯微鏡下觀察。采用PBS代替一抗座位陰性對照。采用組織學(xué)評分評估，按照各自染色程度和染色細(xì)胞數(shù)進(jìn)行綜合量化分析評分。陽性細(xì)胞出現(xiàn)棕褐色顆粒。每例標(biāo)本在顯微鏡下隨機(jī)選擇10個高倍視野（×400），每個視野計數(shù)100個細(xì)胞。其中染色強(qiáng)度評分：無著色計為0分，淺黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。陽性細(xì)胞評分按照計數(shù)100 個細(xì)胞中陽性細(xì)胞所占百分比評分：陽性細(xì)胞＜10%為0 分，陽性細(xì)胞11%～25%為1 分，陽性細(xì)胞25%～50%為2分，陽性細(xì)胞50%～75%為3分，陽性細(xì)胞＞75%為4分。標(biāo)準(zhǔn)為：0～1分為陰性（-） ，2～3分為弱陽性（+） ，4～6分為中強(qiáng)陽性（++），＞6分為強(qiáng)陽性（+++）。陰性、弱陽性歸為陰性表達(dá)，中、強(qiáng)陽性定義為陽性［1］。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，將患者的臨床資料病理學(xué)特征和實驗結(jié)果共同建立數(shù)據(jù)庫。計數(shù)資料采用χ2檢驗相關(guān)分析采用直線相關(guān)分析和t 檢驗，P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CK7、Ki-67 在不同類型肺癌中的表達(dá)

表1 CK7、Ki-67 在肺癌中的表達(dá)同其臨床病理特征的關(guān)系

CK7和Ki-67 均定位在細(xì)胞核。62例肺癌組織中CK7和Ki-67陽性表達(dá)分別為42 例（ 67.8 %） 和43例（ 69.4%）。男性患者CK7 和Ki-67 表達(dá)陽性率與女性均差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05。不同年齡肺癌患者中CK7 和Ki-67的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（＞0.05）。Ki-67 在不同病理類型腫瘤組織中表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05） ，但CK7在不同病理類型腫瘤組織中表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。在高分化腫瘤患者組織中CK7 和Ki-6表達(dá)水平低于低分化患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的肺癌患者CK7和Ki-67的表達(dá)陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。CK7 表達(dá)水平在肺癌病理分期較早組別（Ⅰ+Ⅱ） 低于分期較晚組別（Ⅲ+Ⅳ） ，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P＜0.01） ，但Ki-67的表達(dá)在兩組中差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.18），CK7 表達(dá)與Ki-67 表達(dá)之間無相關(guān)性（P=0.49），詳見表1。

2.2 CK7 和Ki-67在肺癌中的聯(lián)合檢測

由表2可知，在聯(lián)合診斷的62例中，表型為CK7 +/ Ki-67+的肺癌共29例，以腺癌為多，占69.0%；CK7 +/ Ki-67 -共13例，以腺癌居多，占77.0%；CK7 -/ Ki-67 +共14例，以鱗癌居多，占85.7%；CK7 -/ Ki-67 -僅為6例。

表2 CK7 和Ki-67 在NSCLC 中的聯(lián)合表達(dá)

3 討論

肺癌的發(fā)病率逐年增長，已經(jīng)成為當(dāng)今世界惡性腫瘤死亡的最主要原因。雖然肺癌的多學(xué)科綜合治療取得進(jìn)展，但5年生存率仍較低，對于早期缺乏典型的臨床癥狀、體征，或者是起病比較隱匿的肺癌患者，到醫(yī)院就診或是到確診時往往已進(jìn)入晚期或已出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，給肺癌的后續(xù)治療帶來困難，同時侵襲轉(zhuǎn)移也是造成治療效果差并導(dǎo)致患者死亡的主要原因。所以人們在不斷探索研究新的早期診斷的辦法，以期使肺癌患者能夠得到更多更好的治療。隨著分子生物學(xué)以及人類基因組學(xué)的發(fā)展，人們對肺癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究也在不斷深入，為我們了解肺癌發(fā)生、發(fā)展的全過程提供了有力的基礎(chǔ)依據(jù)，我們可以更早的發(fā)現(xiàn)肺癌及預(yù)后做出判斷，并為進(jìn)一步實現(xiàn)更多的分子靶向治療、基因治療、細(xì)胞生物學(xué)治療等提供研究基礎(chǔ)。

CK7是一種堿性細(xì)胞角蛋白，其分子量為54 KDa，在不同部位的腺癌中表達(dá)，其表達(dá)模式可用于鑒別轉(zhuǎn)移腺癌的原發(fā)部位［2］。Ki67基因定位于第10號染色體，其蛋白質(zhì)產(chǎn)物定位于細(xì)胞核，由相對分子質(zhì)量為345 KDa和395 KDa兩條多肽鏈組成。Ki67是臨床檢測核增殖的敏感性指標(biāo)，G1期時即可檢測出，直至細(xì)胞分裂晚期。由于細(xì)胞分裂后Ki67會迅速降解，因此Ki67的基因表達(dá)可提示機(jī)體細(xì)胞增殖情況。研究還發(fā)現(xiàn)，Ki67在胃癌、乳腺癌、肝癌及惡性軟組織腫瘤中均有過表達(dá)，并且與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、浸潤轉(zhuǎn)移及預(yù)后有密切關(guān)系，Ki67的高表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，對其深入研究對于了解腫瘤的生物學(xué)行為和預(yù)后有重要價值［3-6］。

本研究觀察到：Ki-67 在不同病理類型腫瘤組織中表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），但CK7在不同病理類型腫瘤組織中表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。高分化肺癌患者CK7 和Ki-67表達(dá)水平低于低分化患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。CK7 和Ki-67 表達(dá)水平在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。CK7 表達(dá)水平在肺癌病理分期較早組別（Ⅰ+Ⅱ） 低于分期較晚組別（Ⅲ+Ⅳ） ，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01） ，但Ki-67的表達(dá)在兩組中沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.18），CK7 表達(dá)與Ki-67 表達(dá)之間無相關(guān)性（P=0.49），這提示肺癌的增殖與轉(zhuǎn)移可能與CK7和Ki-67 表達(dá)水平有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示肺癌組織中檢測到Ki-67、CK7 的陽性表達(dá)均提示腫瘤細(xì)胞的增殖旺盛，還顯示它們的表達(dá)水平同肺癌分化程度以及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均密切相關(guān)，故對于肺癌患者通過組織免疫組化檢查這兩項結(jié)果，可用于指導(dǎo)肺癌患者的個體化治療，判斷預(yù)后。對于肺癌患者應(yīng)采取化療、放療、手術(shù)治療以及分子靶向藥物哪一種治療方式或是綜合治療有一定指導(dǎo)作用。建議術(shù)前通過氣管鏡或者經(jīng)皮肺穿刺取活檢，早起明確病理類型的同時，通過免疫組化方法檢測Ki-67、CK7 的表達(dá)水平，如果提示Ki-67、CK7 均陽性表達(dá)，提示腫瘤惡性程度較高且預(yù)后差，在無絕對手術(shù)禁忌證的情況下積極手術(shù)治療，以降低腫瘤分期或提高遠(yuǎn)期生存率。

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【中圖分類號】R734．2

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

【文章編號】1674-9316（2015）32-0168-03

doi：10．3969/j．issn．1674-9316．2015．32．125

作者單位：1 河南省人民醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，河南 鄭州 450003；2 河南省人民醫(yī)院肝膽外科，河南 鄭州 450003

通訊作者：余海波，E-mail：yhb2101661@163．com

Expression of Ki-67 and CK7 in Lung Cancer and Their Combined Diagnostic Value

ZHANG Huifeng1QIN Bingyu1YU Haibo21 ICU，Intensive Care Unit of He'nan Provincial People's Hospital，Zhengzhou He'nan 450003，China，2 Department of Hepatobiliary Surgery of He'nan Provincial People's Hospital，Zhengzhou He'nan 450003，China

【Abstract】