大腸癌組織癌細(xì)胞中P-選擇素的表達(dá)及其臨床病理意義

羅春英，黃炳臣，黃琴，陳家興，陸海善，韋葉生，王俊利，黃照權(quán)

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大腸癌組織癌細(xì)胞中P-選擇素的表達(dá)及其臨床病理意義

羅春英1，黃炳臣1，黃琴2，陳家興2，陸海善1，韋葉生3，王俊利3，黃照權(quán)1

目的探討P-選擇素蛋白在大腸癌組織癌細(xì)胞中的表達(dá)及其臨床病理意義。方法運(yùn)用免疫組織化學(xué)法，采用P-選擇素抗體檢測(cè)116例大腸癌組織和57例癌旁正常組織P-選擇素的表達(dá)情況，比較和分析P-選擇素在大腸癌組織癌細(xì)胞和正常腸黏膜組織中的表達(dá)差異及其臨床病理意義。結(jié)果P-選擇素在大腸癌組織中的癌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞均有表達(dá)。腫瘤細(xì)胞P-選擇素陽(yáng)性表達(dá)率（77.6%，90/116）明顯高于癌旁正常腸黏膜組織中腺上皮細(xì)胞P-選擇素的陽(yáng)性表達(dá)率（17.5%，10/57），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=56.49，P＜0.05）。然而，腫瘤細(xì)胞P-選擇素陽(yáng)性表達(dá)率在不同腫瘤直徑、分化程度、浸潤(rùn)深度和有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（80.6%vs. 74.1%、79.0%vs. 74.3%、78.4%vs. 76.9%、82.7%vs. 73.4%，均P＞0.05）。結(jié)論大腸癌腫瘤組織中癌細(xì)胞表達(dá)P-選擇素是該腫瘤的重要特征。

結(jié)直腸腫瘤；P選擇素；免疫組織化學(xué)；大腸癌

近十年來(lái)，我國(guó)大腸癌的發(fā)病率和死亡率均呈逐年上升趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅人類健康［1］。黏附分子受體P-選擇素存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞和血小板中，通過(guò)與其配體結(jié)合，介導(dǎo)粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞、血小板的黏附，在炎癥、血栓形成、腫瘤血道轉(zhuǎn)移中起重要作用。有文獻(xiàn)報(bào)道，結(jié)直腸癌患者術(shù)前血清中可溶性P-選擇素水平顯著高于健康體檢者，且術(shù)后3個(gè)月可溶性P-選擇素水平明顯下降，認(rèn)為血清中P-選擇素水平可反映結(jié)直腸癌的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的程度［2］。本研究從組織學(xué)層面，采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)116例大腸癌組織和57例癌旁正常腸黏膜組織中P-選擇素的表達(dá)情況，探討P-選擇素在大腸癌組織癌細(xì)胞中的表達(dá)情況及其對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的意義。

1材料與方法

1.1材料取右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2011年1月—2012 年1月間病理診斷為大腸癌的手術(shù)切除、經(jīng)10%中性福爾馬林固定、石蠟包埋的病理標(biāo)本116例和癌旁正常腸黏膜組織57例，所有患者術(shù)前均未接受放、化療或免疫治療。116例患者中男89例，女27例；年齡22～92歲，平均（56.7±4.9）歲； 60歲者58例，＜60歲者58例；腫瘤直徑＜5 cm者62例， 5 cm者54例；經(jīng)病理醫(yī)師光學(xué)顯微鏡下觀察，高分化腺癌81例，中-低分化腺癌35例；腫瘤浸潤(rùn)肌層者51例、浸潤(rùn)至漿膜層者65例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移52例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移64例。

1.2試劑及方法P-選擇素單克隆抗體購(gòu)于R&D Systems公司，二抗、DAB購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。免疫組化采用EnVision兩步法。主要操作步驟：（1）石蠟切片，脫蠟至水。（2）抗原修復(fù)。采用枸櫞酸緩沖液高壓抗原修復(fù)，高壓鍋噴氣2 min，放置冷卻至室溫。（3）3%H2O2室溫孵育10 min阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化酶活性。（4）切片滴加非免疫牛血清室溫下10 min，以封閉非特異性抗原反應(yīng)。（5）滴加25 mg/L的鼠抗人P-選擇素單克隆抗體，4℃下孵育過(guò)夜。然后用PBS緩沖液沖洗3次，每次3 min。（6）每張切片滴加二抗多聚復(fù)合物，室溫下孵育15 min。PBS沖洗3次，每次3 min。（7）DAB顯色、蘇木素復(fù)染及中性樹(shù)脂封片。用已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，以0.1 mol/L PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。1.3結(jié)果判斷P-選擇素陽(yáng)性信號(hào)定位于細(xì)胞漿和（或）細(xì)胞膜，呈棕黃色顆粒。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性病例；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù) 10%為陽(yáng)性病例。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 17. 0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，兩樣本間率的比較采用四格表資料的χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1 P-選擇素在大腸癌組織和癌旁正常腸黏膜組織的表達(dá)P-選擇素陽(yáng)性信號(hào)定位于細(xì)胞漿和（或）胞膜，呈棕黃色顆粒，其在癌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞均有表達(dá)，見(jiàn)圖1。癌組織中癌細(xì)胞P-選擇素陽(yáng)性表達(dá)率（77.6%，90/116）明顯高于癌旁正常腸黏膜腺上皮細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)率（17.5%，10/57），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=56.49，P＜0.05）。

2.2大腸癌組織癌細(xì)胞中P-選擇素蛋白表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系大腸癌組織中癌細(xì)胞P-選擇素陽(yáng)性表達(dá)率在不同性別、年齡、腫瘤直徑、分化程度、浸潤(rùn)深度和有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

Fig. 1 Expression of P-selectin in colorectal cancer cells（EnVision，×200）圖1　大腸癌腫瘤細(xì)胞P-選擇素蛋白表達(dá)（EnVision兩步法，×200）

Tab.1 The relationship between P-selectin protein expression in colorectal cancer cells and clinical pathological features of patients表1　P-選擇素在大腸癌組織癌細(xì)胞中的表達(dá)情況及其與臨床病理特征的關(guān)系

3　討論

P-選擇素是一種表達(dá)于血小板和血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的細(xì)胞黏附分子受體，具有廣泛的生物學(xué)活性，在炎癥、血栓形成和腫瘤轉(zhuǎn)移中起重要作用［3-5］。P-選擇素有兩種變異型：一種為可溶性，在血中以單體形式存在；另一種為膜性，以寡聚狀態(tài)存在。正常情況下，內(nèi)皮細(xì)胞未受刺激和未激活，P-選擇素不表達(dá)或低水平表達(dá)。

有文獻(xiàn)報(bào)道在結(jié)直腸癌患者血清中可溶性P-選擇素水平顯著高于健康體檢者［2］。血小板是正常人血漿中可溶性P-選擇素基礎(chǔ)水平的主要來(lái)源，而內(nèi)皮細(xì)胞激活是疾病狀態(tài)下增高的可溶性P-選擇素的來(lái)源。本研究發(fā)現(xiàn)大腸癌組織中癌細(xì)胞高表達(dá)P-選擇素（77.6%），這可能成為腫瘤患者血清中P-選擇素水平升高的另一來(lái)源之一。

在腫瘤組織水平，以往文獻(xiàn)較少研究和討論P(yáng)-選擇素在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)和意義。本研究結(jié)果顯示，P-選擇素在大腸癌組織中的癌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞上均有表達(dá)，并且P-選擇素在結(jié)直腸癌細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常腸黏膜腺上皮細(xì)胞，提示P-選擇素可能參與癌細(xì)胞的形成和生長(zhǎng)。有研究推測(cè)，P-選擇素可能在癌細(xì)胞與血管內(nèi)皮間存在著雙重介導(dǎo)作用，更有利于腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移［6］。本研究分析顯示腫瘤組織中癌細(xì)胞P-選擇素的表達(dá)在不同分化程度、浸潤(rùn)深度和有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。腫瘤組織中癌細(xì)胞高表達(dá)P-選擇素的臨床和病理意義值得進(jìn)一步探討。有關(guān)P-選擇素基因敲除小鼠的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，P-選擇素缺失會(huì)抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移［7-9］；近年有研究認(rèn)為，P-選擇素基因多態(tài)性是惡性腫瘤患者發(fā)展到惡病質(zhì)的重要調(diào)節(jié)因素［10］；P-選擇素可吸引調(diào)節(jié)性T細(xì)胞浸潤(rùn)到腫瘤微環(huán)境，從而導(dǎo)致大鼠乳腺癌腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移［11］。關(guān)于大腸癌組織中癌細(xì)胞表達(dá)的P-選擇素對(duì)腫瘤形成、生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的影響需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究和探討。

綜上所述，P-選擇素在大腸癌組織癌細(xì)胞中有較明顯的高表達(dá)，該特征對(duì)腫瘤生物學(xué)行為和機(jī)體的影響需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究和探討，以期為預(yù)測(cè)大腸癌的生物學(xué)行為和大腸癌的防治提供新思路和方法。

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（2015-08-18收稿2015-10-26修回） （本文編輯李國(guó)琪）

Expression and clinical significance of P-selectin in colorectal cancer cells

LUO Chunying1，HUANG Bingchen1，HUANG Qin2，CHEN Jiaxing2，LU Haishan1，WEI Yesheng3，WANG Junli3，HUANG Zhaoquan1
1 Department of Pathology，The Affiliated Hospital of Youjiang Medical College for Nationalities，Guangxi 533000，China；2 Clinical Medical Undergraduate Course Grade 2011，Youjiang Medical College for Nationalitie；3 Department of Clinical Laboratory，The Affiliated Hospital of Youjiang Medical College for Nationalities Corresponding Author E-mail：huangzhq2012@163.com

Objective To investigate the expression and clinical significance of P-selectin in colorectal cancer cells. Methods The protein expression of P-selectin was detected by immunohistochemistry in colorectal cancer tissues（n=116）and corresponding non-tumor normal mucosa（n=57）. The differences of P-selectin expression in colorectal cancer tissues，corresponding non-tumor normal mucosa and the clinical pathological significance were compared and analysed in two groups. Results The expression of P-selectin protein was found not only in vascular endothelial cells but also in colorectal cancer cells. The positive rate of P-selectin expression was apparently higher in colorectal cancer cells（77.6%，90/116）than that in normal mucosa（17.5%，10/57，χ2=56.49，P＜0.05）. However，there were no significance in positive rates of P-selectin in colorectal cancer cells between tumors with different diameters，different degrees of differentiation，different depths of infiltration and with or without lymph node metastasis（80.6%vs. 74.1%，79.0%vs. 74.3%，78.4%vs. 76.9%，82.7%vs. 73.4%，P＞0.05）. Conclusion The high expression of P-seletin in colorectal cancer cells is an important characteristic of colorectal cancer.

colorectal neoplasms；P-selectin；immunohistochemistry；colorectal cancer

R735.3

A

10.11958/20150110

廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2011GXNSFA018194）；廣西醫(yī)學(xué)科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心開(kāi)放基金專項(xiàng)項(xiàng)目（KFJJ2011-05）；自治區(qū)級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃立項(xiàng)項(xiàng)目（201410599017）

1廣西百色，右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科（郵編533000）；2右江民族醫(yī)學(xué)院2011級(jí)臨床醫(yī)學(xué)本科；3右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科

羅春英（1977），女，副教授，碩士，主要從事腫瘤臨床病理研究

E-mail：huangzhq2012@163.com