食品衛(wèi)生檢驗中沙門菌屬LAMP檢測方法的應(yīng)用研究

郭曉煥

?

食品衛(wèi)生檢驗中沙門菌屬LAMP檢測方法的應(yīng)用研究

郭曉煥

【摘要】目的 探究食品衛(wèi)生檢驗中沙門菌屬LAMP檢測方法的應(yīng)用價值。方法 隨機選取84件食品樣本，采用分離培養(yǎng)鑒定和LAMP檢測方法進行檢測，對比兩種檢測方法的結(jié)果。結(jié)果 針對檢測陽性率，LAMP檢測高于分離培養(yǎng)法，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05）。結(jié)論 應(yīng)用LAMP檢測方法對食品衛(wèi)生中沙門菌屬進行檢測，效果顯著。

【關(guān)鍵詞】食品衛(wèi)生；沙門菌屬；LAMP檢測方法；應(yīng)用價值

分離培養(yǎng)法是國內(nèi)食品沙門菌檢測的常用方法，其操作流程繁瑣，且需耗費大量的時間。同時，針對免疫學(xué)方法，其敏感度不高，針對聚合酶連反應(yīng)法，其需特殊儀器和設(shè)備，導(dǎo)致檢測受到限制［1］。環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)，即LAMP，其屬于新型等溫核酸擴增方法，操作方式簡單、敏感度高等是其主要優(yōu)點［2］。因此，為研究LAMP在食品衛(wèi)生沙門菌檢驗中的應(yīng)用價值，本研究以84件食品樣本為對象，采用2種不同的檢測方法，取得了一定成效，現(xiàn)將相關(guān)報道如下。

1一般資料與方法

1.1一般資料

選取2015年3～12月收集的食品樣本84件，其中，包括20件生鮮肉、15件熟肉制品、18件生水產(chǎn)品、17件非發(fā)酵豆制品、4件冷凍生肉、4件生食類蔬菜和6件鮮榨果汁。以腸炎沙門菌為參考菌株。

1.2方法

1.2.1食品樣本前增菌 以《食品微生物學(xué)檢驗沙門氏菌檢驗》為依據(jù)，分別選取25 g食品標本，將其添加至225 ml BPW無菌質(zhì)袋內(nèi)，利用拍擊式均質(zhì)器，進行1～2 min的拍打，基于37℃下，8～18 h為培養(yǎng)時間。針對冷凍產(chǎn)品，應(yīng)以低于45℃為基礎(chǔ)條件，解凍時間不得超過15 min。

1.2.2 LAMP檢測方法 分別取食品標本前增菌液1 ml，基于10 000 r/min指標下，進行2 min的離心，除去上清液后，借助核酸通用提取試劑盒，提取核酸。與此同時，取1 μl上清液，用于制作待檢模板DNA。以《食品微生物學(xué)檢驗沙門氏菌檢驗》為指導(dǎo)，設(shè)計引物，并檢測食品標本增菌液DNA，且以標準的反應(yīng)體系為指標。以65℃為條件，進行60 min的水浴，基于80℃滅活酶前提下，促使反應(yīng)體系得以終止。待結(jié)束反應(yīng)后，通過肉眼檢測，若表現(xiàn)出混濁現(xiàn)象，則為陽性，若不存在混濁現(xiàn)象，則為陰性。

1.2.3分離培養(yǎng)鑒定 基于《食品微生物學(xué)檢驗沙門氏菌檢驗》指導(dǎo)下，在輕輕晃動經(jīng)培養(yǎng)過的食品標本前增菌液后，以1 ml為標準，將其放置于10 ml TTB增菌液中，以42℃為標準，18～24 h為培養(yǎng)時間。同時，取1 ml放置于10 ml SC增菌液中，以37℃為標準，18～24 h為培養(yǎng)時間。分別取1環(huán)食品標準增菌液，并放置于BS平板和XLD平板上，以37℃為標準，18～24 h為培養(yǎng)時間。選取可疑菌落3個，分別接種于TSI、賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基以及營養(yǎng)瓊脂平板上，以37℃為標準，18～24 h為培養(yǎng)時間。經(jīng)由生化反應(yīng)，與沙門菌特征初步吻合，基于營養(yǎng)瓊脂平板獲取可疑菌落，利用生理鹽水，制作濁度適當菌懸液，借助全自動微生物鑒定系統(tǒng)，實施分析。若條件需要，可開展血清學(xué)分型。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析

利用SPSS 20.0軟件對本次研究所有數(shù)據(jù)進行分析，χ2檢驗用于檢驗計數(shù)資料的比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義用P＜0.05表示。

2結(jié)果

對比食品標本檢驗結(jié)果，LAMP檢測陽性率為10.7％，高于分離培養(yǎng)法的4.8％，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），如表1所示。

表1　不同檢測方法下的食品標本檢測結(jié)果

3討論

LAMP檢測法，即環(huán)介導(dǎo)等溫擴增法，屬于新型核酸擴增方法，其將4種特異引物設(shè)置于靶基因的6個區(qū)域內(nèi)，基于鏈置換DNA聚合酶的作用下，以65℃為恒溫條件，達到擴增目的［3］。針對該種檢測方法，操作方便、特異性強均屬于該其基本特點，在擴增產(chǎn)物的前提下，降低樣品檢測難度，在檢測食品微生物中應(yīng)用價值較高［4］。針對檢測結(jié)果，可通過肉眼，觀察是否存在白色混濁沉淀物，以達到判定擴增情況的目的［5］。

本次研究，在對食品樣本中的沙門菌屬檢驗過程中，分別采用分離培養(yǎng)法和LAMP檢測法進行檢測。針對分離培養(yǎng)法，其以《食品微生物學(xué)檢驗沙門氏菌檢驗》為指導(dǎo)，按照一定的步驟進行檢測，即前增菌、增菌、分離、篩選可疑菌落、生化等步驟［6］。一般情況下，得到陰性檢測結(jié)果需4 d左右，而得到沙門菌檢測結(jié)果需7 d左右。與此同時，該檢測方法過程十分繁瑣、復(fù)雜，需借助全自動微生物鑒定系統(tǒng)，存在血清分型效價不高的問題，而試劑不僅昂貴，且容易出現(xiàn)失效狀況［7］。相較于需兩次增菌分離培養(yǎng)的分離培養(yǎng)方法，LAMP檢測法在提取前增菌液核酸的基礎(chǔ)上，方可開展擴增實驗，完成擴增過程僅僅需要1 h，促使檢驗流程得以簡化，而得到食品樣本沙門菌屬檢驗結(jié)果僅需要24 h，大大縮減了檢測時間。針對LAMP檢測法，檢測人員可利用肉眼，對檢測結(jié)果進行直接判定，促使其更加直觀、形象［8］。

本次研究以84件食品樣本為對象，分別通過分離培養(yǎng)法和LAMP檢測法進行檢測。結(jié)果顯示，LAMP法的檢測陽性率為10.7％，分離培養(yǎng)法的檢測陽性率為4.8％?？梢姡琇AMP法在檢測食品衛(wèi)生沙門菌屬的應(yīng)用價值更高。

綜上所述，在食品衛(wèi)生檢驗中，針對沙門菌屬，通過LAMP法進行檢測，準確率更高。

參考文獻

［1］ 周建亮，萬艷芳．食品衛(wèi)生檢驗中沙門菌屬LAMP檢測方法的應(yīng)用效果評價［J］．實驗與檢驗醫(yī)學(xué)，2014（1）：24-25．

［2］ 王勝啟，馬艷艷，李靜，等．沙門菌屬stn基因LAMP在食品衛(wèi)生檢驗中的應(yīng)用［J］．中國現(xiàn)代醫(yī)生，2014，52（12）：114-115，153．

［3］ 王瑤，邵榮標，劉偉．沙門菌及志賀菌生物學(xué)特性回復(fù)變異現(xiàn)象研究［J］．現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2014，41（11）：2070-2071．

［4］ 溫來欣，方麗萍．應(yīng)用LAMP同時快速檢測沙門菌和志賀菌的效果評價［J］．職業(yè)與健康，2014，30（4）：465-466，469．

［5］ 張韶華，崔侖標，祁賢，等．RT-LAMP法對Ⅱ型諾如病毒的檢測［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2014，41（15）：2790-2792，2799．

［6］ 曾婷，謝逸欣，馬麗．LAMP和熒光定量PCR檢測食品中致病微生物的比較研究［J］．臨床軍醫(yī)雜志，2013，41（3）：304-306．

［7］ 何翠華，劉志強，王丹云，等．應(yīng)用LAMP方法檢測動物源性食品中沙門菌［J］．中國食品衛(wèi)生雜志，2010，22（5）：411-414．

［8］ 葉文，楊柳青，張如勝，等．沙門菌屬LAMP檢測方法在食品衛(wèi)生檢驗中的應(yīng)用評價［J］．中華疾病控制雜志，2011，15（9）：785-787．

Application of LAMP Method for Detection of Salmonella in Food Hygiene Inspection

GUO Xiaohuan Food Room，F(xiàn)ood and Drug Inspection Institute of Zhumadian，Zhumadian He’nan 463000，China

【Abstract】Objective To explore the application value of LAMP method for detection of salmonella in food hygiene inspection.Methods Randomly selected 84 food samples，the isolation and identification and LAMP detection method，two methods of detection results.Results The positive rate of detection，LAMP detection was significantly higher than that of isolated culture method，significant difference was statistically significant（P＜0．05）．Conclusion For salmonella in food hygiene is detected，the application of LAMP detection method is effective．

【Key words】Food hygiene，Salmonella，LAMP method，Application value

【中圖分類號】R155

【文獻標識碼】A

【文章編號】1674-9316（2016）07-0004-02

doi：10．3969/j．issn．1674-9316．2016．07．003

作者單位：駐馬店市食品藥品檢驗所食品室，河南 駐馬店 463000