西門子化學(xué)發(fā)光測(cè)定鐵蛋白標(biāo)本稀釋方法的探討

石愛新 韋敏秀 藍(lán)宇利 李梵川

（廣西省南寧市上林縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西 南寧 530500）

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西門子化學(xué)發(fā)光測(cè)定鐵蛋白標(biāo)本稀釋方法的探討

石愛新 韋敏秀 藍(lán)宇利 李梵川

（廣西省南寧市上林縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西 南寧 530500）

【摘要】目的 探討不同的稀釋介質(zhì)與稀釋方式對(duì)化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定血清鐵蛋白（FER）濃度的影響。方法 使用ADVIACE ntaur CP化學(xué)發(fā)光分析儀及配套的檢測(cè)鐵蛋白試劑（FER），分別對(duì)高濃度鐵蛋白標(biāo)本進(jìn)行三種不同稀釋介質(zhì)以及稀釋倍數(shù)的稀釋測(cè)定，觀察三種不同稀釋介質(zhì)以及稀釋倍數(shù)對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。結(jié)果 三種稀釋液10倍稀釋和50倍稀釋測(cè)定結(jié)果與相應(yīng)理論值比較，差異都沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），100倍稀釋測(cè)定結(jié)果都明顯高于理論值，差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05 ）。結(jié)論 三種稀釋液對(duì)鐵蛋白測(cè)定不產(chǎn)生基質(zhì)效應(yīng)但稀釋方式的選擇是否合適將會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生顯著的影響。

【關(guān)鍵詞】稀釋；化學(xué)發(fā)光免疫；鐵蛋白

鐵蛋白既是貧血的檢驗(yàn)指標(biāo)，也是一種腫瘤標(biāo)志物，可用于多種腫瘤的診斷和療效觀察［1］，但由于腫瘤患者標(biāo)本中的鐵蛋白濃度往往異常升高，常會(huì)超出儀器的檢測(cè)范圍，西門子CP化學(xué)發(fā)光測(cè)定鐵蛋白的上限是1650 ng/mL，高于此值報(bào)＞1650 ng/mL，需要對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋測(cè)定才能得出一個(gè)確定結(jié)果，因此，選擇稀釋液和稀釋倍數(shù)就成了一個(gè)關(guān)健問題。文獻(xiàn)報(bào)道各種稀釋介質(zhì)對(duì)化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)不同項(xiàng)目基質(zhì)效應(yīng)不同［2-3］。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備：德國(guó)西門子全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（ADVIACE ntaur CP）。

1.2 試劑：該儀器配套的檢測(cè)鐵蛋白試劑（FER）。批號(hào)：012234。

1.3 原料及樣本：質(zhì)控血清采用儀器試劑配套的高中低值定值質(zhì)控品，批號(hào)分別為：40220測(cè)定結(jié)果在定值范圍內(nèi)，三個(gè)濃度水平CV均＜5%。

1.4 分析方法：用已知鐵蛋白確定濃度標(biāo)本稀釋測(cè)定鐵蛋白，比較不同基質(zhì)對(duì)結(jié)果的影響程度，選擇可接受的稀釋介質(zhì)；用可接受的稀釋介質(zhì)稀釋測(cè)定鐵蛋白超出線性范圍的標(biāo)本，觀察熒光值與鐵蛋白濃度的關(guān)系，尋求鐵蛋白超出線性范圍標(biāo)本適合的測(cè)定稀釋倍數(shù)。

1.5 數(shù)據(jù)處理：采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用理論值為對(duì)照組，三種稀釋介質(zhì)稀釋測(cè)定結(jié)果與理論值的差異配對(duì)t檢驗(yàn)，以P ＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同稀釋介質(zhì)測(cè)定結(jié)果分析：30份已知鐵蛋白確定濃度標(biāo)本，用西門子通用稀釋液、0.9%氯化鈉溶液、正常人血清分別稀釋測(cè)定，結(jié)果見表1。三種稀釋液10倍稀釋和50倍稀釋測(cè)定結(jié)果與相應(yīng)理論值比較，差異都沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），三種稀釋介質(zhì)100倍稀釋測(cè)定結(jié)果都明顯高于理論值，差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 三種稀釋介質(zhì)稀釋標(biāo)本測(cè)定鐵蛋白結(jié)果與稀釋倍數(shù)理論值結(jié)果比較（ng/mL）

2.2 超線性范圍樣品的稀釋測(cè)定結(jié)果分析：用0.9%氯化鈉溶液作為稀釋介質(zhì)，對(duì)10份鐵蛋白＞1650 ng/mL的標(biāo)本進(jìn)行2～128倍比稀釋測(cè)定。

3 討 論

鐵蛋白是體內(nèi)鐵的主要存在形式，相對(duì)分子質(zhì)量445 kD，由24個(gè)亞基組成，其亞基成分分成H和L兩類，分量分別為21 kD和19 kD。鐵蛋白主要由網(wǎng)關(guān)內(nèi)皮系統(tǒng)的吞筮細(xì)胞釋放出來，當(dāng)鐵負(fù)荷增多時(shí)，鐵蛋白升高，在血中半壽期為27～30 h，為肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞所清除，最近發(fā)現(xiàn)，血清鐵蛋白增高與慢性腎臟疾病、心腦血管疾病、血液系統(tǒng)疾病及許多腫瘤性疾病有關(guān)，在疾病時(shí)鐵蛋白升高，緩解時(shí)降低，可作為疾病的動(dòng)態(tài)觀察和判斷療效用。因此，能準(zhǔn)確的測(cè)定鐵蛋白含量具有重要現(xiàn)實(shí)意義。

本研究用0.9%氯化鈉溶液，通用稀釋液，正常人血清作為稀釋介質(zhì)稀釋測(cè)定已知高值鐵蛋白標(biāo)本，50倍內(nèi)稀釋測(cè)定結(jié)果與理論值具有很好的相關(guān)性，表明三種稀釋液對(duì)鐵蛋白測(cè)定并沒有基質(zhì)效應(yīng)，都可以選用，但通用稀釋液成本高，正常人血清難以收集，又有被感染風(fēng)險(xiǎn)，測(cè)底本也要成本投入，0.9%氯化鈉溶液成本低，易得到，比較實(shí)用。

30份已知鐵蛋白確定濃度標(biāo)本，100倍稀釋測(cè)定結(jié)果明顯高于理論值，表明過度稀釋不可取，而10份超高值標(biāo)本2倍稀釋測(cè)定結(jié)果也明顯高于其他稀釋倍數(shù)的結(jié)果，表明稀釋倍數(shù)不夠也不行。免疫反應(yīng)遵循著名的海德堡曲線，計(jì)算曲線呈“S”形，是非線性的，在非檢測(cè)區(qū)曲線的上下端都相對(duì)走平，對(duì)結(jié)果產(chǎn)生較大誤差，檢驗(yàn)報(bào)告結(jié)果時(shí)，要乘上稀釋倍數(shù)，所有的互差也同時(shí)放大相應(yīng)的倍數(shù)，誤差就會(huì)更明顯。所以，化學(xué)發(fā)光測(cè)定的稀釋液和稀釋方式的選擇應(yīng)慎重。在臨床工作中應(yīng)結(jié)合實(shí)際情況多嘗試比較，否則將會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生顯著的影響，影響臨床診斷和治療。

參考文獻(xiàn)

［1］ 丁繼敏，范維坷.血清鐵蛋白與惡性腫瘤［J］.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，1993，14（4）:152-154.

［2］ 朱毅，張順.電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)高值甲胎蛋白標(biāo)本的稀釋方法及其溝狀效應(yīng)［J］.腫瘤防治研究，2011，38（4）:465.

［3］ 趙敏，笪宏華.甲功五項(xiàng)化學(xué)發(fā)光免疫分析的基質(zhì)效應(yīng)對(duì)臨床測(cè)值的影響［J］，現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，19（12）:3714-3718.

中圖分類號(hào)：R556

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1671-8194（2016）02-0032-01