HPV感染與宮頸癌關(guān)系的研究

劉學(xué)博

[摘要] 目的 探討HPV感染與宮頸癌的關(guān)系，為宮頸癌的篩查提供臨床參考。 方法 收集2012年9月～2014年10月在我院就診的宮頸癌患者200例，將其根據(jù)是否存在HPV感染分為HPV感染組和無(wú)HPV感染組，HPV感染組再分為單一感染組和多重感染組。 結(jié)果 單一感染率、多重感染率分別為60.0%、11.0%。單一感染率最高為HPV16，其次為HPV18、HPV58，其余亞型均<2%。多重感染以二重感染為主，且以HPV16±58比例最高。在所有HPV感染中，大多數(shù)為含HPV16亞型的感染。多重感染組患者年齡與單一感染組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。多重感染組≥55歲的比例明顯高于單一感染組（P<0.05），兩組病理類型均以鱗癌為主，病理分期均以浸潤(rùn)癌為主，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；兩組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 結(jié)論 HPV感染與宮頸癌存在一定關(guān)系，這可能對(duì)宮頸癌的篩查、預(yù)后有指導(dǎo)作用。

[關(guān)鍵詞] HPV多重感染；HPV單一感染；宮頸癌

[中圖分類號(hào)] R711.74 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2016）03（c）-0132-03

[Abstract] Objective to study the relationship between HPV infection and cervical cancer to provide clinical reference for cervical cancer screening. Methods 200 patients with cervical cancer treated in our hospital from September 2012 and October 2014 were collected.According to whether there was HPV infection，they were divided into HPV infection group and non HPV infection group，HPV infection group was further divided into single infection group and multiple infection group. Results The single infection rate and multiple infection rate was 60.0%，11.0% respectively.The single highest infection rate was HPV16，followed by HPV18，HPV58 once again，the other subtypes were less than 2%.Multiple infections was mainly double infection，and the percentage of HPV16±58 was the highest.Among all HPV infection，the majority was the subtype of HPV16 infection.There was no statistical difference of age between multiple infection group and single infection group （P>0.05）.The proportion of more than 55 years old in multiple infection group was obviously higher than that of single infection group （P<0.05）.Pathological type of 2 groups were mainly squamous cell carcinoma，pathological staging were invasive carcinoma，the difference was not statistically significant （P>0.05）；there was no statistical difference of lymph node metastasis rate between two groups （P>0.05）. Conclusion There is a certain relationship between HPV infection and cervical cancer，which may have a guiding role for screening and prognosis of cervical cancer.

[Key words] HPV multiple infection；HPV single infection；Cervical cancer

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的一種惡性腫瘤，其對(duì)女性生命健康造成嚴(yán)重影響。人乳頭狀瘤病毒（HPV）感染對(duì)宮頸癌的發(fā)生起關(guān)鍵性作用已被大量研究所證實(shí)，它具有多種亞型，目前已知的有120種，根據(jù)感染狀態(tài)，HPV感染分為單一亞型感染和多重感染（2種亞型以上的感染）[1]。二重感染和三重感染是最常見的多重感染類型。許多研究表明，多重感染與宮頸病變間有密切的相關(guān)性，是宮頸病變和宮頸癌發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[2]。本研究收集200例宮頸癌患者，對(duì)其進(jìn)行HPV感染監(jiān)測(cè)，分析HPV感染與患者臨床特征的關(guān)系，以期為宮頸癌的篩查及防治提供臨床依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2012年9月～2014年10月在我院就診的宮頸癌患者200例，所有患者術(shù)前均接受HPV檢測(cè)及術(shù)后病理確診?；颊吣挲g21～76（46.2±8.6）歲。根據(jù)是否存在HPV感染分為HPV感染組和無(wú)HPV感染組，并將HPV感染組細(xì)分為單一感染組和多重感染組。

1.2 HPV DNA檢測(cè)

1.2.1 檢測(cè)設(shè)備和試劑盒 美國(guó)ABI公司PE9700擴(kuò)增儀、德國(guó)QIAGEN公司醫(yī)用核酸分子快速雜分儀；德國(guó)QIAGEN公司提供的HPV DNA抽提試劑盒及HPV基因分型檢測(cè)試劑盒[可檢測(cè)5種低危亞型（HPV6、HPV11、HPV42、HPV43、HPV 44）和13種高危亞型（HPV16、HPV18、HPV3l、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59、HPV68）]。另外膜上還包括質(zhì)量控制的陰性對(duì)照點(diǎn)、監(jiān)測(cè)PCR反應(yīng)的內(nèi)對(duì)照點(diǎn)和用于監(jiān)測(cè)顯色系統(tǒng)的Biotin對(duì)照點(diǎn)。

1.2.2 標(biāo)本DNA提取 收集子宮頸脫落細(xì)胞，置于HPV專用保存液中保持，取0.5 ml上述液體，離心 2 min，棄去上清液，用HPV DNA抽提試劑盒提取DNA，根據(jù)試劑盒操作說(shuō)明書進(jìn)行。

1.2.3 HPV亞型檢測(cè) 采用HybrMax法[3]測(cè)定，將上述獲得的HPV DNA擴(kuò)增，把Taq酶、PCR MIX、水根據(jù)要求混勻，反應(yīng)體系為25 μl，PCR反應(yīng)獲得的產(chǎn)物進(jìn)行加熱變性后冰浴，隨后置于雜交儀的薄膜（固定有核酸探針）上，讓樣品流入膜內(nèi)進(jìn)行導(dǎo)流雜交，清除未結(jié)合的DNA，雜交期間維持45℃。用封阻液封閉膜，培育5 min。排出封阻液后添加酶標(biāo)液，室溫下溫育5 min。充分沖洗膜，清除未結(jié)合的酶標(biāo)液，加入底物顯色5 min，顯色后1 h內(nèi)分析結(jié)果。

1.3 HPV陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)[4]及多重感染表示方法

當(dāng)RLU/CO≥1時(shí)為HPV陽(yáng)性，其中RLU、CO分別為標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照的相對(duì)光單位。多重感染以HPV亞型間用“±”連接，如“16±52”表示HPV16和HPV52雙重感染；“16±35±56”表示HPV16、HPV35、HPV56三重感染。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用率表示，采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料用x±s表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

所有患者中有142例存在HPV感染，HPV感染率為71.0%（142/200），其中單一感染率、多重感染率分別為60.0%（120/200）、11.0%（22/200）。單一感染率最高為HPV16，其次為HPV18、HPV58，其余亞型均<2%。多重感染以二重感染為主，且以HPV16±58比例最高。在所有HPV感染中，大多數(shù)為含HPV16亞型的感染。混合感染亞型最多為四重感染（表1）。

2.2 宮頸癌患者HPV感染與臨床特征的關(guān)系

單一感染組患者年齡為（49.1±9.6）歲，多重感染組患者為（53.5±11.7）歲，兩組的年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.608，P=0.218）。多重感染組≥55歲的比例明顯高于單一感染組（P<0.05），兩組病理類型均以鱗癌為主，病理分期均以浸潤(rùn)癌為主，兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；兩組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表2）。

與單一感染組≥55比較，*P<0.05

3 討論

有研究報(bào)道，我國(guó)每年宮頸癌發(fā)生率約為28.7%[5]。在我國(guó)，20世紀(jì)90年代宮頸癌死亡率為3.25/10萬(wàn)，較20世紀(jì)70年代的9.98/10萬(wàn)明顯降低[6]。宮頸癌病死總例數(shù)是所有惡性腫瘤病死患者數(shù)的18.4%[7]。近年來(lái)，宮頸癌發(fā)生有年輕化趨勢(shì)，因而逐漸引起臨床工作者的關(guān)注。

宮頸癌預(yù)后與其病理特征密切相關(guān)，如患者年齡、病理類型、病理分期等，而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是其中重要的一個(gè)相關(guān)因素[8]。近期，HPV檢測(cè)技術(shù)逐漸在宮頸癌的篩查中得到推廣應(yīng)用，其對(duì)宮頸癌的預(yù)測(cè)價(jià)值深受研究者們的重視。王長(zhǎng)奇等[9]的研究認(rèn)為，HPV多種亞型同時(shí)感染對(duì)宮頸癌的發(fā)生及預(yù)后產(chǎn)生重要影響。Bello等[10]對(duì)多重HPV感染與宮頸癌的相關(guān)性進(jìn)行研究，結(jié)果顯示多重感染風(fēng)險(xiǎn)明顯高于單一感染患者。本研究結(jié)果顯示，多重感染率為11.0%，單一感染率為60.0%。在120例單一感染患者中，HPV亞型比例最高者為HPV16，其次為HPV18、HPV58，這與姚敏等[11]的研究結(jié)果相似。雙重感染隨著地區(qū)及種族不同而有所不同，本研究中多重感染以二重感染多見，占多重感染的77.3%，其中HPV16+58最常見，其次為HPV16+52，而含HPV16的比例最高?？梢?，HPV16是單一感染或多重感染的最主要類型，這與吳玉萍等[12]的報(bào)道一致。

HPV多重感染與年齡有關(guān)。Swangvaree等[13]的研究指出，宮頸病變患者，<40歲患者HPV多重感染率較高。也有研究報(bào)道，<30歲人群多重感染率高[14]。這兩個(gè)研究均說(shuō)明年輕人群更易出現(xiàn)多重感染，但本研究則相反，≥55歲的宮頸癌患者發(fā)生HPV多重感染率大于<55歲患者，說(shuō)明多重感染更易出現(xiàn)在年齡較大患者中，其原因可能是隨著年齡的增加，患者機(jī)體內(nèi)原有的免疫力逐漸減弱或激素濃度改變而引起病毒復(fù)活。呂曉萍等[15]的研究報(bào)道，多重感染發(fā)生率和形式主要受方法學(xué)和檢測(cè)間隔時(shí)間的影響，另外地理、遺傳、種族等因素也會(huì)對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生影響。

目前，普遍認(rèn)為，感染與宮頸癌的預(yù)后相關(guān)。Kjaer等[16]的研究結(jié)果顯示，合并HPV多重感染的宮頸癌患者，其治療失敗率是單一感染者的5倍，說(shuō)明多重感染可能對(duì)宮頸癌預(yù)后產(chǎn)生不良影響。

總之，HPV感染與宮頸癌存在一定關(guān)系，但其在宮頸癌的發(fā)生及預(yù)后的作用機(jī)制尚不明確，需擴(kuò)大樣本進(jìn)一步研究、證實(shí)。若能證實(shí)多重感染在宮頸癌中的作用機(jī)制將有利于對(duì)宮頸癌的防治，也能預(yù)測(cè)患者的預(yù)后，從而為制訂合理的治療方案提供依據(jù)。

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（收稿日期：2015-12-30 本文編輯：許俊琴）